Патент ссср 413188

Патент ссср 413188

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

4I3I8 8

Со оз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

M. Кл. С 12 d 13/00

Заявлено 31.XI I.1971 (№ 1731964/28-13) с присоединением заявки №вЂ”

Приоритет

Опубликовано 30.1.1974. Бюллетень ¹ 4

Дата опубликования описания 28Л .1974

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам нзооретеннй и открытий

УДK 663.18(088.8) Авторы изобретения

С. Э. Ансберга, А. М. Ирген, В. П. Каула и Р. Э. Страздыня

Латвийский филиал Всесоюзного ордена Трудового Красного

Знамени научно-исследовательского института химических реактивов и особо чистых химических веществ

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕОЗИДФОСФАТОВ И

САХАРОФОСФАТОВ

Изобретение относится к способам получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов и может быть использовано в различных областях биохимии и медицины.

Известен способ получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов путем биологического фосфорилирования фосфорилирующей смеси, состоящей из сахара, аденозина, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов, неорганических фосфатов, хлористого калия, хлористого магния, воды при рН 6,5 — 7,0 в присутствии биологического катализатора, с последующей очисткой продукта.

Целью изобретения является увеличение выхода и чистоты продукта, а также упрощение процесса и сокращение времени ферментации.

Достигается это тем, что в качестве биологического катализатора используют экстракт водорослей, который вводят в фосфорилирующую смесь в соотношении 1: 1 или 1,2: 1.

Способ осуществляют следующим образом.

В качестве источника ферментов используют экстракт водорослей, приготовленный размельчением водорослей (в соотношении сухие водоросли против воды как 1: 3), и выдерживают при температуре 4 С 3 час. Используются водоросли вегетативного периода (созревания).

Экстракт водорослей, используемый в качестве сырья для получения нуклеозидфосфатов н сахарофосфатов, прибавляют в фосфорилирующую смесь, которая состоит из сахара, аденозина, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов, неорганических фосфатов, хлори5 стого калия, хлористого магния, воды при температуре 37 С и рН 6,5 — 7,0.

Соотношение экстракта водорослей и фосфорилирующей смеси 1: 1 или 1,2: 1. Реакция продолжается 0,5 — l,5 час. Для прекращения

10 реакции фосфорилирования используют 10%ный раствор трихлоруксусной кислоты при — 7 С, взятой в объеме 25 мл на 200 мг аденозина.

Для осаждения нуклеозидфосфатов приме15 няют метиловый спирт или этиловый спирт в 7 — 10-кратном объеме. Очистку нуклеозидов осуществляют путем ионообменной хроматографии.

Применение экстракта водорослей взамен

20 дрожжей как источника ферментов качественно и принципиально улучшает способ получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов.

П р и м ер 1. 200 мг аденозина растворяют в 7,6 мл воды. К раствору прибавляют

25 ih a>HPO4 12Н20 (натрий фосфорнокислый двухзамещенный) и КНеРО, (калий фосфорнокислый однозамещенный) в весовых соотношениях 3,5%: 1%. Затем вносят 0,014 г КС1, 0,14 r MgC12 6Н20 и 9,5 мл экстракта зеленых

Зо водорослей.

413188

Предмет изобретения

Составитель М. Ларина

Редактор Н. Спиридонова Техред 3. Тараненко Корректор Т. Хворова

Заказ 1157/9 Изд, № 1205 Тираж 456 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва 5Ê-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Время ферментации 0,5 — 1,5 час при температуре 37 С и рН 6,5 — 7,0. Для прекращения реакции прибавляют 1 г трихлоруксусной кислоты при 0 С. Раствор центрифугируют. К фильтрату прибавляют 10-кратный объем метилового спирта, а осадок разделяют на ионообменной колонке.

Выход: 0,176 г 96о/о АТФ (аденинтрифосфорная кислота).

Пример 2. 200 мг аденозин-5-монофосфорной кислоты растворяют в 7,6 мл воды. К раствору прибавляют ХазНР04 ° 12НзО и КНзРО4 в весовых соотношениях 2,5 /о . .0,7 /в. Затем добавляют 0,014 г КСI, 0,014 г MgC1 .6ÍðO и

9,5 мл экстракта зеленых водорослей.

Процесс далее ведется аналогично примеру 1

Выход: 0,18 г 95% АТФ.

Пример. 3 200 мг гуанозин-5-монофосфорной кислоты растворяют в 7,6 мл воды. К раствору прибавляют ИазНР04 ° 12НзО и КНзРО4 в весовых соотношениях 2,5 .0,7%. Затем добавляют 0,014 r КСI, 0,014 г МдС1з 6НзО и 95 мл экстракта зеленых водорослей.

Далее — аналогично примеру 1.

Выход: 0,12 г 90% ГТФ; 0,13 г 90 ГТФ.

Пример 4. К 54 г сахара прибавляют

16,5 г фосфорнокислых солей, 300 мл воды, 400 мл экстракта водорослей.

Раствор перемешивают 2 — 3 мин, затем выдерживают в течение 15 мин при температуре

36 — 37 С.

Время ферментации 0,5 — 1,5 час. Процесс прекращают прибавлением 25 мл50%-ногораствора трихлоруксусной кислоты. Центрифугируют. К центрифугату добавляют 21 г

Ва (СНзСООН) з и насыщенный раствор

Ва(ОН) з до слабо-розового окрашивания по фенол-фталеину. Реакционную смесь центрифугируют.

Бариевую соль дифосфата фруктозы промы10 вают один раз 50%-ным спиртом и один раз

96о/о-ным спиртом. Сушат в вакуумном эксикаторе.

Выход: 53 г бариевой соли 1,6-дифосфата фруктозы.

1. Способ получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов путем биологического фосфо20 рилирования фосфорилирующей смеси, состоящей из сахара, аденозина, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов, неорганических фосфатов, хлористого калия, хлористого магния, воды при рН 6,5 — 7,0 в присутствии биологи25 ческого катализатора, с последующей очисткой продукта, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения процесса, а также увеличения выхода и чистоты продукта, в качестве биологического катализатора ис30 пользуют экстракт водорослей.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что экстракт водорослей вводят в фосфорилируюгцую смесь в соотношении 1: 1 или 1,2: 1.