Способ определения содержания амилозы в полисахариде

Способ определения содержания амилозы в полисахариде

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

i» 4- дтемтЮо- охте" "МОПИСЛНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

<»> 425IG5

Союз Советсник

Социалистических

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства— (22) Заявлено 17.03.72 (21) 1760548/28-13 с присоединением заявки— (32) Приоритет—

Опубликовано 25.04.74. Бюллетень и 15

Дата опубликования описания 23.01.75 (51) М. Кл. G 01п 33 02

С 13/ 1/08

Государственный комитет

Совета Министров СССР оо делам изобретений и открытий (53) УД1 664.2 (088.8) (72) Автор ,изобретения

В. И. Деулин (71) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский институт крахмалопродуктов (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ

АМИЛОЗЫ В ПОЛИСАХАРИДЕ

Изобретение относится к методам контроля крахмалоп родуктов и может быть использовано в крахмало-паточной промышленности при контроле процессов и продуктов фракционирования крахмала и в сельском хозяйстве при селекционных работах.

Известен способ колориметрического определения амилозы в полисахариде, включающий приготовление раствора йод-полисахаридного комплекса, содержащего нормированное соотношение полисахарида, йода и йодида (например, 1 лг полисахарида, 2 яг йода и

10 яг йодистого калия в 100 лл), при рН менее 11, измерение оптической плотности полученного раствора йод-полисахаридного комплекса при 560 — 650 нм, предпочтительно около 600 н,я, и определение содержания амилозы по калибровочной кривой, построенной по данным для образцов полисахарида известного состава в идентичных условиях приготовления растворов йод-полисахаридных комплексов.

При этом в анализируемой пробе предварительно определяют содержание полисахарида.

Трудоемкость и продолжительность операций, связанных с определением содержания полисахарида в образце, превышают трудоемкость и продолжительность собственно определения амилозы по известному способу даже при достаточно больших количествах образца и при высокой его чистоте (например, крахмал). При малых количествах сухого образца (Hàïðèìåð, в случае анализа единичных се5 мян растений без ущерба для их жизнеспособности)„или при низких концентрациях анализируемых растворов определение содержания полисахарида в образце значительно осложняется, а точность анализа снижается.

10 Цель изобретения — упростить известный способ за счет исключения операций, связанных с определением содержания полисахарида в анализиру емой пробе.

Для этого дополнительно измеряют опти15 ческую плотность раствора йод-полисахаридного комплекса при длине волны 450 — 550 н,я, предпочтительно около 500 нм, и затем содержание амилозы определяют по отношению оптической плотности прн большей длине

20 волны к оптической плотности при меньшей длине волны.

Б 100 .ял измеряемого раствора предпочтитепьпо должно быть полисахарида 0,5 — 3 мг, йода — не менее 5 яг при мольном соотно25 шении йодид: йод не менее 20: 1.

Предлагаемый способ заключается в том, что раствор полисахарида неустановленной концентрации, приготовленный произвольным способом, смешивают с йод-йодидным раствором, получая раствор йод-полисах",ðèäíîãî

%М

425105

65 комплекса с нормированным содержанием йода и йодида. Измеряют оптические плотности полученного раствора при 560 — 650 нм, предпочтительно около 600 нм, и при 450—

550 нм, предпочтительно около 500 нм, находяг отношение указанных оптических плотностей и определяют содержание амилозы по калибровочной кривой, построенной по данным для полисахаридов известного состава в идентичных условиях приготовления растворов йод-полисахаридных комплексов.

При достаточном избытке йода и йодида в распворе йод- поли сахаридного комплекса отношение оптических плотностей последнего, измеренных по отношению к стандартному раствору индентичного состава, HO не содержащему полисахарида, при 560 †6 и 450—

550 нм, предпочтительно около 600 и около

500 нм, в достаточно широком интервале не зависит от концентрации полисахарида, но изменяется с изменением состава полисахарида.

Измерение оптичеаких плотностей производят на спектрофотометрах или фотоколориметрах. Лучшие результаты обеспечивает использование фотоколориметров со светофильтрами, пропускающими в областях длин волн

560 — 650 и 450 — 550 нм, предпочтительно при максимумах пропускания около 580 и около

520 нм. Это связано с меньшей чувствительностью фотоколориметров к смещению макси.","умов светопоглощения растворов йод-полисахаридных комплексов с изменением степени полимеризации амилозы.

Предпочтительная длина кюветы составляет 20 мм. Концентрацию полисахарида в измеряемом растворе регулируют при смешивании растворов полисахарида с йодом и йодидом так, чтобы обеспечить колориметрирование в диапазоне оптических плотностей

0,5 — 1. Измеряемый раствор подкисляют соляной кислотой до рН 1.

B связ,i с тем, что оптические характеристики йодных растворов претерпевают изменения во времечи, отношение оптических плотностей растворов йод-полисахаридных комплексов устанавливают как танге".ñ угла наклона ",èêeÉHÎÉ зависимости Оптических плотностей, измеренных около 600 нм, от оптических плотностей, измеренных около 500 нм, графически. При этом колор",;ìåòðèðîâàïèå проводят по отношению к дистиллированной воде, а измеряемый раствор непосредственно в кювете разбавляют стандартным раствором.

Результаты, полученные при пяти-семи oэзбавлепиях, используют при построении гпафика и усредняют, соединяя полученные тОчки прямой.

Пример. Приблизительно 2 — 10 мг высокоамилозного кукурузного крахмала на кончике ножа вводят в пробирку и суспензируют в примерно 3 мл дистиллированной воды, при перемешивании добавляют около 3 мл

".и. ХаОН, полученный раствор 1 час выдер5

Зо

50 живают,при комнатной тем пературе, после чего нейтрализуют 1 н. HCI по фенолфталеину.

В мерную колбу на 50 мл вводят 5 мл

0,01 н. Jq в 1 í. KJ, 20 — 30 мл ди стиллированной:воды, 5 мл I ar. НСI и при перемешивании приливают нейтрализованный раствор высокоамилозного крахмала до достижения плотной сине-зеленой окраски. Колоу доводят до метки дистиллированной водой и полученный таким образом измеряемый раствор перед колориметрированием 10 мин выдерживают при комнатной температуре.

Стандарный раствор готовят смешиванием в мерной колбе на 100 мл 10 мл 0,01 н.,12 в

1 н К3, 10 мл 1 н. HCI с доведением колбы до метки дистиллированной водой.

Колориметрирование производят на фотоэлектроколориметре ФЭК-56 со светофильтрами № 7 (максимум пропускания при 582 нм) и № 5 (максиму м про пускания при 490 нм) в прямоугольной кювете длиной 20 мм. Измеряемый раствор заливают в кювету и измеряют по отношению к воде оптическую плотность со светофильтром № 7 — Д, и ¹ 5 — Д;,.

Затем из кюветы пипеткой отбирают

2 — 3 мл измеряемого раствора, возмещая отобранную часть примерно таким же объемом стандартного раствора, и после перемешивапия содержимого кюветы стеклянной палочкой вновь колориметрируют, получая ряд значений:

Д; — 0,97; 0,765; 0,64; 0,56; 0,485, Д вЂ” 1,29; 0,905; 0,7; 0,57, 0,445.

На миллиметровой бумаге строят график, Откладывая по оси ординат значения Д„а по оси абсцисс значения Д;, для каждой пары измерений оптической плотности каждого из разбавлений измеряемого раствора. Далее через нанесенные на график точки проводят прямую и определяют ее наклон (И, =1,62).

При содержании амилозы более 27% участок калибровочной кривой, полученной для полисахаридов кукурузного крахмала, соответствует эмпирической формуле:

А=125 (И, — 1,2), в которой А — содержание амилозы в полисахариде, Подставляя найденное значение И, в эту формулу, определяют содержание амилозы в анализируемом образце высокоамилозпого кукурузного крахмала:

А 125 (1 62 — I 2) = I 25 0 42=52 50

Предмет изобретения

1. Способ определения содержания амилозы в полисахариде, заключающийся в смеши вании пробы полисахарида с йодом и йодидом, измерении оптической плотности полученного раствора при длине волны 560 †6 нм, предпочтительно около 600 нм, отлича ои1ийся тем, что, с целью упрощения определения, измеряют дополнительно оптическую плотность раствора йод-полисахаридного комплекса при

425105

Составитель Г, Лошкарева

Текред Е. Борисова

Редактор Л. Народная

Корректор И. Симкина

Заказ 1713/472 Изд. Ка 782 Тираж 651 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета NklHHcTpoB СССР по делам изобретений и открытий

Москва, 5Ê-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред. <: ????????????> длине волны 450 †5 нм, предпочтительно около 500 нм, и затем содержание амилозы определяют по отношению оптической плотности при большей длине волны к оптической плотности при меньшей длине волны.

2. Способ по и. 1, отличающийся тем, что в 100 лл раствора содержание полисахарида составляет 0,5 — 3 мг, содержание йода — не менее 5 иг при мольном соотношении йодид: йод не менее 20: 1.