Способ получения концентрированного низина
Иллюстрации
Реферат
iii) 4275I6
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К ПАТЕНТУ
Союз Советски
Социалистическии
Республик (б1) Зависимый от патента (22) Заявлено 07.01.70 (21) 1393515/28-13 (51) М. Кл. С 12d 9/12 (32) Приоритет 17.01.69 (31) P 131233 (33) ПНР
Опубликовано 05.05.74. Бюллетень ¹ 17
Государственный комитет
Совета Мииистроо СССР по делам изоаретеиий и открытий (53) УДК 615.779,926 (088.8) Дата опубликования описания 10.10.74 (72) Авторы изобретения
Иностранцы
Ежи Меллер, Галина Восько, Казимиж Брониковски, Богдан Раковски, Ева Дипинска, Эльжбита Якубчик, Мария Шадковска (ПНР) Иностранная фирма
Кутновский фармацевтический завод «Польфа (ПНР) 1 МЦ4 (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЦЕНТРИРОВАННОГО НИЗИНА
Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам получения концентрированного низина.
Известен способ получения концентрированного низина путем выращивания его продуцента Streptococcus 1ас(1з на питательной среде, содержащей молоко или молочные продукты, например обезжиренное молоко, выделения низина из культуральной жидкости путем добавления сычужного фермента и хлористого кальция, подкисления ее соляной кислотой, резделения на твердую и жидкую фазы, отделения твердой, например, фильтрованием с последующим промыванием ее и вспениванием полученного фильтрата, осаждения низина из пены добавлением солей натрия в присутствии ацетона, полученный осадок центрифугируют, растворяют в метиловом спирте и вновь осаждают низин при помощи ацетона. Полученный низин высушивают.
По предлагаемому способу получают высококонцентрированный низин.
Для этого культуральную жидкость подкисляют до значен ия рН, равного 3,3 — 3,7, преимущественно 3,5, перед вспениванием среду нагревают до температуры б0 — 120 С, преимущественно 95 С, выдерживают при этой температуре в течение нескольких минут, например пяти, и осадок охлаждают, отделяют от раствора, который вспенивают. Промывают осадок отработанной питательной средой с получением экстракта, который фильтруют и также вспепивают, добавление ацетона осуществляют многократно в осадок, полученный IIocле высаливания солями натрия, для его обезвоживания с температурой ниже 0"С.
Для выращивания продуцента низина питательная среда может содержать глюкозу, 10 картофельный сироп, пепсионовый гидролизат культуры стрептококков из серологической группы N, гидролизат казеина или альбумина, причем вышеуказанные вещества могут быть введены как в совокупности друг с другом, 15 так и отдельно.
Пену, полученную при вспенивании фильтрата и экстракта, осушивают, например, отстаиванием и конденсируют путем изменения скорости течения струи.
Пример 1. Берут 1000 л ферментационной жидкости с активностью 4200 ед/мл, полученной путем ферментирования низин-образующим штаммом Streptococcus lactis питатель25 ной среды следующего состава: 750 л молочной сыворотки, 20 кг картофельною сиропа и
250 л пепсинового гидролизата культуры стрептококков, принадлежащей к серологической группе N.
427516
Ферментационную жидкость подкисляют
18 /о-ной соляной кислотой до рН 3,5, а затем ее подогревают до температуры 95 С, при этой температуре выдерживают в течение 5 мин и охл аждают до т ем пер а тур ы 25 С. В ы п а в ш ий при этом белковый осадок фильтруют.
Отфильтрованную жидкость подвергают двухступенчатому процессу вспенивания при помощи механического пенообразователя, например насоса, в который непрерывно подают ферментационную жидкость и воздух в объемном отношении около 6: 1.
Полученную пену осушивают в резервуаре, в нижней части которого имеется отвод для обедненной ферментационной жидкости, а в верхней — воронка, собирающая пену под действием вакуума.
Осушенную пену, собранную в воронку под действием вакуума, переводят в жидкость путем изменения скорости течения струи.
Сконденсированная пена — это фракция, составляющая высокосгущенный водный концентрат низина. Обедненную ферментационную жидкость отводят из резервуара и направляют на следующую ступень, где этот процесс повторяют.
Количество ступеней зависит от пенообразующих свойств среды и от требуемой степени сгущения.
20 кг белкового осадка, содержащего 7000 ед/г низина, экстрагируют 180 л отработанной питательной среды. Полученный экстракт фильтруют и вспенивают в две стадии, получают 32,5 л жидкой фракции, обладающей активностью 120000 ед/мл, из нее осаждают низин добавлением 8,3 кг поваренной соли.
Осадок центрифугируют, троекратно экстрагируют 15 л ацетона, охлажденного до — 15 С.
Примеси ацетона, оставшиеся в полученном осадке, удаляют путем отгонки в вакууме при температуре — 15 С.
Получают 0,450 кг высококонцентрированного низина крепостью 8,3 10 ед/г.
Пример 2. Берут 1000 л ферментационной жидкости крепостью 5500 ед/мл, полученной путем ферментирования низин-образующим штаммом Streptococcus lactis питательной среды, состоящей из обезжиренного молока, Фер мента ционную жидкость подкисляют
18 /о-ной соляной кислотой до рН 3,5, а затем подогревают ее до 95 С и при этой температуре выдерживают в течение 5.мин, после этого жидкость охлаждают до температуры 25 С, а выпавший при этом осадок фильтруют. Отфильтрованную жидкость подвергают двухступенчатому вспениванию. Получают белковый осадок в количестве 80 кг, содержащий 8000 ед/г низина.
Экст рагируют 720 л молочной сыворотки, предварительно лишенной низина. Экстракт
60 скорости течения струи.
Зо
55 подвергают двухступенчатому вспениванию, получают 41,5 л жидкой фракции, обладающей активностью 120000 ед/мл. Эту жидкую фракцию перерабатывают в дальнейшем, как описано в примере 1.
В результате получают 0,550 кг концентрата низина крепостью 8,5-10 ед/г.
Предмет изобретения
1. Способ получения концентрированного низина путем выращивания его продуцента
Streptococcus lactis на питательной среде, содержащей молоко или молочные продукты, например обезжиренное молоко, выделения низина из культуральной жидкости путем подкисления ее соляной кислотой, разделения на твердую и жидкую фазы, отделения твердой, например, фильтрованием, с последующим промыванием ее и вспениванием полученного фильтрата путем введения в него воздуха, осаждения низина из пены добавлением солей натрия с последующим центвифугированием, добавлением ацетона и высушиванием, например, под вакуумом, отличающийся тем, что культуральную жидкость подкисляют до рН, равного 3,3 — 3,7, преимущественно 3,5, перед вспениванием среду нагревают до 60—
120 С, преимущественно 95 С, выдерживают при этой температуре в течение нескольких минут, например пяти, и осадок охлаждают, промывают отработанной питательной средой с получением экстракта, который фильтруют, а также вспенивают, ацетон добавляют многократно в осадок, полученный после высаливания солями натрия, для его обезвоживания с температурой ниже 0 С.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что питательная среда для выращивания продуцента наряду с молоком и молочными продуктами содержит глюкозу.
3. Способ по п. 1, отлич ающийся тем, что среда содержит картофельный сироп.
4. Способ по пп. 1 — 3, отличающийся тем, что питательная среда содержит пепсиновый гидролизат культуры стрептококков из серологической группы N.
5. Способ по пп. 1 — 3, отличающийся тем, что питательная среда содержит гидролизат казеина,или альбумина.
6. Способ по пп. 2 — 5, отличающи йся тем, что вышеуказанные вещества могут быть введены как в совокупности друг с другом, так и отдельно.
7. Способ .по п. 1, отличающийся тем, что пену, полученную при вспенивании фильтрата и экстракта, осушивают, например, отстаиванием и конденсируют путем изменения