Способ определения концентрации витамина в^о

Способ определения концентрации витамина в^о

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е ! 432I92

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВЙДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскин

Социалистических

Республик: (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 22.05.64 (2!) 901441/31-16 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 15.06.74. Бюллетень № 22

Дата опубликования описания 04.1!.74 (51) Ч. Кл. С 12k 1 00

Государственны!й комитет

Совета Кинистров СССР па делам ивооретений отн-b>T é (53) УДК 577.164.16:576..8.093.4 (088.8) (72) Авторы изобретения

И. С. Родынюк, Н. А. Круглов, Д. Ф. Петров и Ю. В. Рапопорт (7!) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ВИТАМИНА В;.

Известен способ определения концентрации витамина В» путем диффузии раствора в агаризованную среду с витаминно-зависимым штаммом с последующим выявлением зон роста тест-культуры и замером их диаметра.

Используемые в указанных способах витаминно-зависимые штаммы не позволяют определить концентрацию витамина В» в достаточно короткий срок.

По предлагаемому способу для ускорения хода определения концентрации витамина В» питательную среду засевают ауксотрофным штаммом «Azotobacter suis».

Для повышения четкости и увеличения точности определения зоны роста окрашивают красной кровяной солью и железоаммиачными квасцами.

Культуру А. suis выращивают на косяках мясопептонного агара и хранят в холодильнике при 4 С. Пересевают культуру — 2 раза в месяц на свежие косяки и выдерживают

24 час при 37 С. Для опыта используют культуру, выращенную на мясопептонном бульоне на качалках при 37 С. Выросшую культуру центрифугируют в течение !Π— !5 мин при

3000 об/мин и суспендируют в 0,85%-ном физиологическом растворе (109 клеток на 1 мл).

Культурой можно пользоваться в течение

7 дней при хранении ее в холодильнике при

4 С.

В качестве растворителя образцов и стандартного раствора витамина В» используют

1% -ный раствор лимоннокислого натрия.

Стандартный раствор содержит 0,05 мг/л ви5 тамина В».

Для выполнения определения в чашку Петри вносят 20 мл расплавленной агаризованной среды (0,8 г КН РО4, .0.8 r К НРО4, 3.0 г цитрата аммония и 7,5 агар-агара на 500 мл

10 водопроводной воды, рН вЂ” 7,0 — 7,2), засеянной из расчета 5 !О клеток на мл нри 48 С.

При помощи пробочного сверла вырезают

6 лунок, в две из которых вносят стандартный раствор, а в остальные такое же количество

15 капель испытываемого раствора. Исследуют не менее двух разведений испытываемого раствора, при этом концентрацию каждого следующего раствора берут в два раза меньшей. На каждое разведение берут не

20 менее трех чашек. После четырехчасовой инкубации при 37 С среду в чашках обрабатывают 2%-ным раствором красной кровяной соли, промывают спиртом, обрабатывают !%-ным раствором железоаммиачных

25 квасцов, промывают водой и замеряют зоны роста под фонарем. Сульфгидрильные группы, образующиеся в присутствии витамина В,2, восстанавливают трехвалентное железо в двухвалентное, которое дает с красной кровя30 ной солью синее окрашивание.

432192

Составитель В. Таратута

Техред Г. Васильева

Корректор Е. Миронова

Редактор Л. Василькова

Заказ 2955/14 Изд. Ив 1736 Тираж 456 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, K-35, Раушская наб., д. 475

Типография, пр. Сапунова, 2

Расчет концентрации витамина В>. производят по таблицам В. С. Дмитриевой.

Концентрация витамина В1 в исследуемом растворе должна быть в пределах 0,02—

0,8 мг/л.

Предмет изобретения

1. Способ определения концентрации витамина В1> путем диффузии раствора в агаризованную среду с витаминно-зависимым штаммом с последующим выявлением зон роста тест-культуры и замером их диаметра, отл ич а ю щи и с я тем, что, с целью ускорения хода определения, питательную среду засевают ауксотрофным штаммом «Azotobacter suis».

2. Способ по п. 1, отл и ч а ю щийс я тем, что, с целью повышения четкости и точности определения, зоны роста окрашивают красной кровяной солью и железоаммиачными квас10 цами.