Способ получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов

Способ получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

0 П И С А Н И Е и 436084

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз СоветскиХ

Социалистииеских

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства 413188 (22) Заявлено 31.12.71 (21) 1731697/28-13 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 15.07.74. Бюллетень № 26

Дата опубликования описания 18.12.74 (51) М. Кл. С 12d 13/00

Гасударственный камитет

Савета Министраа СССР па делам изааретений и аткрытий (53) УДК 663.18(088.8) (72) Авторы изобретения

С. Э. Ансберга, А. М. Ирген, В. П. Каула и P. Э. Страздыня

Латвийский филиал Всесоюзного института «ИРЕА» (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕОЗИДФОСФАТОВ

И САХАРОФОСФАТОВ

Изобретение относится к способам получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов и может быть использовано в различных областях биохимии и медицины.

По olcHQBHQMy авт. св, № 413188, известен апособ лолучения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов,путем биологического фосфорилирования фосфорилирующей смеси, состоящей из сахара, аденозина, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов, неорганических фосфатов, хлористого калия, хлористого магния, воды при рН 6,5 — 7,0 в присутствии биологического катализатора с последующей очисткой продукта.

С целью повышения ферментативной активности биологического катализатора и чистоты получаемых продуктов дополнительно с экстрактом водорослей в фосфорилирующую смесь вводят плазмолизированные пивные дрожжи в соотношении 1: 2.

Способ заключается в следующем.

В качестве биостимуляторов — ферментов применяют экстракт водорослей, приготовленный размельчением водорослей (в соотношении сухие водоросли — вода, как 1: 3) с последующим выдерживанием в течение 3 ч п р и тем п ер атур е 4 С.

Полученный экстракт водорослей прибавляют в фосфорилирующую смесь, состоящую из сахара, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов, неорганических фосфатов, хлористого калия и магния, пивных дрожжей, то луола, сахара и воды при 37 С и рН 6,5 — 7,0

Реакция продолжается 0,5 — 2,5 ч. Для прекращения реакции фосфорилирования используют 10%-ный раствор трихлоруксусной кислоты при — 7 С. Для осаждения нуклеозидфосфатов применяют метиловый или этиловый спирт в 7 — 10-кратном объеме.

1О Для получения сахарофосфатов в качестве биостимуляторов применяют экстракт водорослей. Препарат получают в виде кальциевых и бариевых солей.

В дальнейшем способ поясняется примера15 ми его исполнения.

Пример 1.

200 мг аденозина растворяют в 7,6 мг воды. Прибавляют Иа НРО 2Н20 (натрий

20 фосфорнокислый двухзам.) и КН:РО4 (калий фосфорнокислый однозам.) в процентном соотношении 3,5: 1; 0,014 КС1 (калий хлористый), 0,014 г MgCI 6НеО (магний хлористый), 0,4 г технического сахара, 0,6 мг то25 луола, 7,6 мл пивных дрожжей, экстракта зеленых водорослей. Содержание белка 20 мг.

Время ферментации 3 ч при температуре

36 — 38 С при рН 6,5 — 7,0. Для прекращения реакции прибавляют 2 г трихлоруксусной кисЗО лоты при 0 С. Отцентрифугируют осадок. К

436084

Составитель М. Ларина

Техред Е. Борисова

Корректор А, Дзесова

Редактор Л. Цветкова

Заказ 3322/6 Изд. Ко 1814 Тираж 456 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, 5К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 фильтрату прибавляют 10-кратнь1й объем метилового спирта. Оосадок разделяют на ионообменной колонке.

Выход: 0,156 г 96% АТФ (аденазинтрифосфорная кислота) .

Пример 2, 200 мг аденозин-5 -монофосфорной кислоты растворяют в 7,6 мл воды.

Прибавляют U!apHPO4 ° 12НзО (натрий фосфорнокислый двухзам.) и КН РО4 (калий фосфорнокислый однозам.) в процентном отношении 2,5: 0,7; 0,014 г КС1 (калий хлористый), 0,014 г М С1з 6НзО (магний хлористый), 0,4 г технического сахара, 0,6 мл толуола, 7,6 мл пивных дрожжей экстракта зеленых водорослей (приготовленного в день работы). Содержание белка 20 мг.

Время фермептации 3 ч при температуре

36 — 38 С при 6,7 — 7,0 рН. Для прекращения реакции прибавляют 2 г трихлоруксусной кислоты при 0 С. Отцентрифугируют осадок.

К фильтрату прибавляют 10-кратный объем метилового спирта, Осадок разделяют на ионообменной колонке.

Выход: 0,12 г 95 /о АТФ.

Пр им ер 3.

200 мг 15 ГМФ (гуанозин монофосфорная кислота) растворяют в 7,6 мл воды.

Прибавляют 1х1азНРО4 ° 12Н О (натрий фосфорнокислый двухзам.), КН2РО4 (калий фосфорнокислый однозам.) в процентном отношении 2,5: 0,7; 0,014 r КС1 (калий хлористый), 0,014 г МоС!г.6Н О (магний хлористый), 0,4 г технического сахара, 0,6 мл толуола, 7,6 мл пивных дрожжей, экстракта зеленых водорослей (приготовленного в день работы). Содержание белка 10 мг.

Время ферментации 2.,5 — 3 ч при температуре 36 — 38 С при рН 6,5 — 7,0.

Для прекращения реакции прибавляют 2 г трихлоруксусной кислоты при 0 С. Осадок отделяют центрифугированием. К фильтрату прибавляют 10-кратный объем метилового спирта, Осадок разделяют на ионообменной колонке.

Выход 0,1 г 90 /о ГТФ (гуанозинтрифосфорная кислота), 0,1 r 90% ГДФ (гуанозиндифосфорная кислота).

Пример 4. К 54 ir сахара прибавляют

10,5 r фосфорнокислых солей, 100 г пивных

10 дрожжей, 300 мл воды, экстракта зеленых водорослей (пирготовленного в день работы).

Содержание белка 180 мг.

Раствор перемешивают 2 — 3 мин, затем выдерживают в течение 15 мин при температу15 ре 36 — 37, после чего добавляют 13,5 мл толуола.

Время ферментации 1,0 — 1,5 ч. Процесс ферментации прекращают прибавлением

50 мл 50%-ного раствора трихлоруксусной

20 кислоты. Центрифугируют, К центрифугату добавляют 21 r Ва (СНзСОО) q и насыщенный раствор Ва (ОН) > до слаборозового окрашения по фенолфталеину. Реакционную смесь центрифугируют.

25 Вариевую соль дифосфата фруктозы промывают 1 раз 50%-ным спиртом, 1 раз

96-градусным спиртом. Сушат в вакууме эксикаторе.

Выход: 50 г бариевой соли 1,6 — дифосфа30 та фруктозы.

Предмет изобретения

Способ получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов по авт. св. Мз 413188, отл и35 ч а ю шийся тем, что, с целью повышения ферм ентативной активности биологического катализатора и чистоты полученных продуктов, дополнительно с экстрактом водорослей в фосфорилирующую смесь вводят плазмоли40 зированные аивные дрожжи в соотношении

1: 2.