Патент 439514

Способ получения литических ферментов

 

Оll ИСАН ИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

i 4395I4

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства— (22) Заявлено 01.11.72 (21) 1842570/28-13 с присоединением заявки Xo— (32) Приоритет—

Опубликовано 15.08,74. Бюллетень № 30

Дата опубликования описания 07.04.75: (51) М.Кл. С 12d 13/10

Гасударствеииый комитет

Совета Министров СССР па делам изооретеиий и открытий (53) УДК 577.15.08 (088.8) (72) Авторы изобретения

С. А. Самцевич, Б. Х. Шкляр и Л. А. Шукан

Отдел микробиологии АН Белорусской ССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, точнее к способу получения литических ферментов, используемых в пищевой промышленности, медицине, сельском хозяйстве.

Известен способ получения литических ферментов путем культивирования Actinomyces на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли.

С целью увеличения активности литических ферментов по предлагаемому способу культивирование осуществляют Actinomyces, относящихся к виду cinегоsus. При этом из Actinomyces, cinегоsus. используют штамм За.

Предлагаемый штамм Actinomyces cinегоsus шт. 3 а. выделен в 1971 г. из торфяноболотной почвы, Выделение провод на среде CP-1 (г/л) с дрожжами рода

Candida в качестве единственного источника углерода при рН 7,0 и при 28 — 30 С. Выделенную культуру подвергают многократной очистке путем рассева на среде CP-1, хранят выделенный штамм на среде CP-1.

Штамм имеет следующую характеристику.

Морфология.

Воздушный мицелий беловато-серый, Культура бесцветная, в среду пигмент не выделяет. Спороносцы спиральные, растянутые

2 с 3 — 5 завитками. Споры овальные с гладкой поверхностью.

Культуральные и физиологические свойства.

Среды CP-1, Чапека, на картофеле — рост хороший, воздушный мицелий беловато-серый.

На крахмал-аммиачном агаре рост хороший, воздушный мицелий беловато-серый. Келатипу разжижает быстро, молоко пентонизирует, на клетчатке растет умеренно, нитратов не восстанавливает, крахмал гидролизует умеренно.

Ассимилирует глюкозу, маннозу, сахарозу, галактозу, крахмал. Не усваивает арабинозу, мальтозу, фруктозу, инозит, лактозу, рамнозу, 5 мапнит, цитрат натрия, ацетат натрия.

На предлагаемой питательной среде следу1ощего состава, /о:

Соевая мука 1

Пекарские дрожжи 0,25

NH4С1 0,06

КеНРО4 0,25

Мазо, 0,01

Дрожжевой автолизат 0,01 образует литические ферменты, лизирующие кормовые дрожжи Candida utilis на 60 — 65 /О при разведении культуральной жидкости в 3 раза.

Способ осуществляют следующим образом.

В водопроводную воду вносят следующие зо компоненты, /о:

439514

Составитель М. Ларина

Техред E. Борисова Корректор Т. Добровольская

Редактор В. Блохина

Заказ 7522 Изд. № 1917 Тираж 456 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

МОТ, Загорский цех

Соевую муку 1

Пекарские дрожжи 0,25

Двузамещенный фо сфор нокислый калий 0,25

Хлористый аммоний 0,06

Сернокислый магний 0,01

Дрожжевой автолизат 0,01.

Полученную питательную среду стерилизуют и в качестве посевного материала используют четырехсуточную культуру Actinomyces

cinегоsus штамм За, выращенную на агаризованной среде CP-1, г/л:

СаСОз 0,7

KNO3 0,7

Мазо, 0,35

NaC1 0,35

FeSO4 Следы

Агар 18,00

Культивирование антиномицета ведут глубинным способом при 28 — 30 С в течение

30 — 42 час. При этом среда аэрируется 6 — 7-ю объемами воздуха на 1 объем питательной среды. После культивирования мицелий отделяют центрифугированием при 3000 об/мин.

Литическую активность ферментов определяют следующим образом.

К 1 мл суспензии дрожжей прибавляют

1 мл трис-буфера 0,067 М при рН 7,0 и 2 мл культуральной жидкости или ферментного раствора. Исходную оптическую плотность реакционной смеси доводят до экстинции 0,7 — 0,8 и определяют ее изменение на ФЭК-56, при

i. =- 537 мм в кювете с расстоянием между стенками 1 мм после инкубации при 40 С в течение 1 час.

Активность литических ферментов выража1от в процентах снижения оптической плотности (ОД) по формуле:

ОД Oa „,„— ОД, ОД нач

l5

Предмет изобретения

1. Способ получения литических ферментов путем культивирования Actinomyces на пи2р тательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, отличающийся тем, что, с целью увеличения активности ферментов, культивирование осуществляют

Actinomyces, относящихся к виду с1пегозпз.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что из Atinomyces cinегоsus используют штамм

За.