Штамм вниигенетика-25-продуцент кислой протеиназы

Штамм вниигенетика-25-продуцент кислой протеиназы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

< п 4430 61

Союз Советских

Социалистических

Реслчблик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 22.12.72 (21) 1860484/28-13 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 15.09.74. Бюллетень ¹ 34

Дата опубликования описания 22.04.75 (51) М. Кл. С 12d 13 10

С 12k 3/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР (53) УДК 577,15.08 (088.8) Ао делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Л. И. Ерохина, И. М. Нестерова и С. П. Истошина

Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов (54) ШТАММ ASPERGILLUS А%АМОР1

В Н И И ГЕН ЕТИ КИ-25- ПРОДУЦЕНТ КИСЛОЙ ПРОТЕИ НАЗЫ

Изобретение относится к области микробиологии и микробиологическому синтезу, в частности к получению промышленных штаммов микроорганизмов, к штамму — продуценту кислой протеиназы.

Препараты кислой протеиназы (аваморина) с оптимумом действия рН 1,8 — 3,0 находят применение в пищевой промышленности для устранения белкового помутнения виноградных вин, для повышения стойкости пива, приготовления соусов. В животноводстве кислая протеиназа используется в комплексе с другими ферментами для повышения эффективности кормов. В медицине кислая протеиназа может применяться для замены пепсина.

Известны штаммы плесневого гриба Aspergillus awamori, продуцирующие кислую протеиназу.

Предлагаемый штамм Aspergillus awamori

ВНИИгенетика-25-мутант синтезирует в 3 — 3,5 раза больше кислой протеиназы в условиях глубинного выращивания и отличается рядом культурально-морфологичеаких особенностей.

Новый штамм ВНИИгенетика-25 выведен из известного штамма Aspergillus awamori

78-2 в результате применения генетико-селекционных методов работы при использовании двухступенчатой обработки мутагенными факторами, 2

На первой ступени селекции в результате обработки исходного штамма 78-2 ультрафиолетовыми лучами выделен ауксоттрофный мутант № 2, нуждающийся в гистидине и спо5 собный синтезировать кислую протеи назу на

40% больше по сравнению с исходным штаммом 78-2.

На второй ступени селекции в результате обработки биохимического мутанта № 2 гис то М-метил-N -нитро-N-нитрозогуанидином получен ревертант-25 гис+, способный синтезировать кислую протеиназу в 3 — 3,5 раза больше по сравнению с исходным штаммом 78-2.

Морфология. Мицелий состоит из коротких

15 искривленных разветвленных гифов с многочисленными поперечными перегородками, стенки клеток извилистые и зубчатые, форма клеток неправильная, часто уродливая.

Клетки относительно короткие, утолщенные у

2î перегородок, содержат жировые включения и вакуоли, зернисты. Размер мицелия 3,2 — 8,4Х

)(4,8 — 22,5 мм.

Конидии круглые, диаметр 3,2 — 6,4 мк.

Культурально-биохимические признаки.

25 Сусло-агар. Посев уколом. При выращивании при 28 С в течение семи суток штамм образует круглые колонии диаметром 12 — 17 мм с плотным компактным воздушным мицелием. Поверхность колоний складчатая, бугри30 стая, серовато-темно-коричневого цвета. Края

443061

10

Составитель Г. Субботина

Составитель Г. Субботина Редактор В. Новоселова Корректор В. Петрова

ЦНИИПИ Заказ 932:2 Изд. М 1165 Тираж 456 Подписное

Типография, пр. Сапунова, 2 колоний более светлые, не1ровные. Мицелий врастает в агар. Обратная сторона колоний с вдавленным центром, складчатость выражена слабо. Среду не окрашивает.

Синтетическая среда Ролен-Тома.

При посеве уколом и выращивании при

28 С в течение семи суток. Колонии такие же, как и на сусло-ага1ре, но среда окрашивается в темно-бурый цвет.

Синтетическая среда Чапека.

П ри посеве уколом и выращивании в течение семи суток при 28 С колонии образуются неправильной формы, выпуклые, с возвышенным центром, серовато-зеленого цвета, края неровные, врастающие в агар.

Поверхность колоний морщинистая, чешуйчатая. Наибольшая длина колоний 7 — 10 мм.

Среда ок1рашивается в зелено-бурый цвет.

Ломтики картофеля.

Посев шгрихом. П1ри выращивании в течение семи суток при 28 С воздушный мицелий хорошо развит, пенообразный, темно-серый.

Конидий образуется умвренное количество.

Субстрат окрашивается в темно-зеленый цвет.

Молоко.

При засеве суспензией конидий растет на поверхности в виде пристеночного кольца.

На двадцать первые сутки при 28 С молоко пептонизирует.

Желати.на.

При посеве уколом растет в виде пристеночного морщинистого кольца. Через двадцать суток культивирования при 28 С половина столбика субстрата ок рашиваегся в темно-бурый цвет. Желатину разжижает.

При посеве спор на синтетическую среду с нитратами и культивировании в течение 30 суток п1ри 28 С восстановления нитратов не наблкщается,.

Для выращивания посевного материала используют сусловый агар (семь по Баллингу), а для ферментации жидкую среду, содержащую, /о.. ржаную муку — 2,0; KH2PO4 — 0,5;

FeSO4, NgSO4, Z1ISO4 по 0,002.

Для засева ферментационной среды используют посевной материал в виде суспензии конидий двухнедельной культуры, выращенной на косом сусло-агаре.

Процесс ферментации проводят в колбах

Э1рленмейера на качалке с 200 — 220 об/мин при 28 С.

Активность штамма ВНИИгенетика-25 на среде с ржаной мукой (в ед/мл культуральной жидкости по методу СЭВ) составляет

1000 ед/мл к.ж. или 333,3/о.

Предмет изобретения

Штамм Aspergillus awamori ВНИИгенетика-25-продуцент кислой протеиназы.

Морфология. Мицелий состоит из коротких искривленных разветвленных гифов с многочисленными поперечными перегородками.

Стенки клеток извилистые и зубчатые, форма клеток неправильная, часто у1родливая, клетки относительно короткие, утолщенные у перегородок, содержат жировые включения и вакуоли, зернистые. Размер мицелия 3,2—

8,4)4, 4,8 — 22,5 мм. Конидии круглые, диаметр их 3,2 — 6,4 мк.

Культурально-биохимические признаки.

Сусло-агар. Посев уколом. При выращивании при 28 С в течение семи суток штамм об1разует круглые колонии диаметром 12 — 17 мм с плотным компактным воздушным мицелием. Поверхность колоний складчатая, бугристая, серовато-темно-коричневого цвета. Края колоний более светлые, неровные. Мицелий врастает в агар. Обратная сторона колоний с вдавленным центром, складчатость выражена слабо. Среду не QIKpaIIIHBGIoT.

Синтетическая среда Ролен-Тома.

При посеве уколом и выращивании при

28 С в течение семи суток колонии такие же, как и на сусло-агаре, но среда окрашивается в темно-бурый цвет.

Синтетическая среда Чапека.

При посеве уколом и выращивании в течение семи суток при 28 С колонии образуются неправильной формы, выпуклые, с возвышенным центром, серовато-зеленого цвета.

Края неровные, врастающие в агар. Поверхность колоний морщинистая, чешуйчатая.

Наибольшая длина колоний 7 — 10 мм. Среда окрашивается в зелено-бурый цвет.

Ломтики ка1ртофеля. Посев штрихом. При выращивании в течение семи суток при 28 С воздушный мицелий хорошо развит, пенообразный, темно-серый. Конидий образуется умеренное количество. Субстрат окрашивается в темно-зеленый цвет.

Молоко.

При засеве суспензией конидий растет на поверхности в виде пристеночного кольца. На двадцать первые сутки при 28 С молоко пептонизирует.

Желатина.

При посеве уколом растет в виде пристеночного MopiIIIинистого кольца. Через двадцать суток культивирования при 28 С 1/2 столбика субстрата окрашивается в темнобурый цвет. Желатину разжижает.

При посеве суапензией спор на синтетическую среду с нитратами и культивировании в течение 30 суток при 28 С восстановления нигратов не наблюдается.