Способ очистки -аспарагиназы от пирогенов

Способ очистки -аспарагиназы от пирогенов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(} ), 443514

Союз Советсиин

Социалистических

Республик () !) З«ни ll!Illili of на) енто (22) Заявлено 18, 12. 68 (21;1290716/28

-13 с присоединением заявки1389868/23-4; (51) М Кл. с От f т/02

Государственный комитет

Совета Мнннстров СССР оо делам нзооретеннй н открытнй

32) г риоритет 06.04. 68 Р 1767157.7 ) РГ 09 11 68 Р 1808042.7 ()пу ликоваио $p ®7 Бтоллетень № Ж (5З} УЙК .@7. 9И.405 (088. 8} (45} Дата опубликования описания 15.12.74 (72) Авторы Иностранцы

Отто Вагнер, Клаус Бауер, Вильфрид Кауфманн, Эрих

Рауенбуш, Алывред Аренс и Эккар Ирион (ФРГ) (71) Заявител ь

Иностранная сйирма

"Байер АГ" (ФРГ} (54) СПОСОБ ОЧИСТКИ Z - АСПАРАГ }НАБЫ 07 ПИРОГЕКОВ

Изобретение относитсЯ к ф8рментной промышленности и представляет собой способ очистки — аспарагиназы

Известен способ очистки -— аспарагинаэы от пирогенов с помощью хроматографии на диэтиламинс этилц8ллюлозе °

Предлагается способ, согласно которому;.{ . -аспарагиназу очищают

От пирогенов тем что фермент в присутствии аминокислоты, в частности глицина, и низшего алифатического спирта, предпочтительно метанола, при рН ме,жду 7,0 и 9,2 нагревают до 40-6i. С, отделяют оса; дившиеся примеси из раствора, а затем проводят осаждение при рН

4,5 — 5,5 при помощи раствора поли этиленгликоля.

Для осуществления этого способа добавляют к раствору -аспа

° ° агиназы I0 об.3 метанола и около вес.g глицина. устанавливают зна

t,чение рН 8-9. Целесообразно выдер2 жать раствор затем в т8чение 1-ь дней при температуре 50ОС. После удаления осадившихся прим8сей HgK рН 5,5 проводят осаждение целевого продукта при помощи полиэтилеиглиКОЛЯ.

Получаемый материал — концентрированная, свободная от пирогенов или содержащая лишь незначи}0 тельные количества пирогенсв аспарагиназа.

Примеg i. ШОr Ж -асаарагиназы с удельной активностью

?С}0 и на Х мг растворяют в I л во 5 ды. Добавляют ?00 мл метанола и

40 г глицина и устанавливают рН раствора 8 9. Раствор выдерживают

В теЧЕНИЕ с)0 Ч Прк тЕМПЕратурЕ

+50 С, Осаждающийся при этом протеин удаляют в течение 30 мин посредством центрифугирования при

6000 o6/мин. Выделенный центрифугированием прозрачный материал доводят при помощи 2 н. НСС до рН

",—, 5.2 и осаждают путем фракционироСоставитель гт 1Я о бек

Ред ктор 6 МоР«»нсвт Тех ред pl. Й Огтт ст о 0 6Q. Ко ре г р Д Д «тт 1» /) egg, Изд. Иф7

Заказ 1 Hðàæ 506

Подписное

ill l11llllll 1 ос>дарственного комитета Сове а Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, 113035, Раушская наб., 4

111н днрннтне «Иатенг», Москва, Г 59, Бережковская иаб., 24

5 т111З.Ч вания при помощи 50%"ного раствора полиэтиленгликоля Образовавшийся посла добавления йдблизительно

200 мл полиэтиленгликоля осадок удаляют путем центрифугирования, промывают ацетоном и сушат. Ваод приблизительно ЗЗ г с удельной активностью 200-235 на 1; мг материалае

П р m м е р 2, Работают аНа- 1o логично примеру Х, но добавляют

200 мл метанола.

Пример 3. Работают аяа15

Ж бавляют 100 мл зтанола.

ПРЕДМЕТ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ очистки К -аспарагиназы от пирогенов, отличающийся тем, что, с целью повышения активности и 2О

1 т чистоты g аспараГйнаэы „- . :Одныи

ga0Ts0g lt . -Q0HaQspNHaQM нагревают в присутствии аминокислотыа предпочтительно глицина, и низшего алифатического спирта, предпочтительно метанола, при температуре 40-6Lw при значении рн 7,0-9,2™с последующим удалением осадившйхся примесей из раствора известным способом и осаждением -аспарагиназы при рН

4,5-5,5 при помощи раствора полиэтиленгликоляе

Приоритет по признакам

06.04,68 — осаждение рмента в интеивале указанных значений рН

7,0-9,2.

09.П. 68 — осаждение фермента полизтиленгликолем в присутствии аминокислоты и низшего алифатического спирта.