Способ определения сенсибилизации лейкоцитов
Патент 445690
Авторы
Классы МПК
Способ определения сенсибилизации лейкоцитов
Иллюстрации
Реферат
0 FI-%LE ::A;+I(И Е
ИЗОБРЕТЕНИЯ (II) 445690
Союз Советских
Социалистических
Республик
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 04.06.73 (21) 1929991 31-16 (51) М. Кл. С 12k 1 00 с присоединением заявки N
Государственный комитет
Совета Министров СССР
IIo делам изобретении и открытий (32) Приоритет
Опубликовано 05.10.74. Бюллетень М 37
Дата опубликования описания 28.02.75 (53) УДК 576.8.077 (088.8) (72) Авторы изобретения
Д. К. Новиков и В. И. Новикова
Витебский государственный медицинский институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ
ЛЕЙКОЦИТОВ
Изобретение относится к области медицины.
Известен способ определения сенсибилизации лейкоцитов путем соединения их с исследуемым антигеном, последующей инкубации и подсчета деформированных клеток с помощью люминесцентной микроскопии.
Однако известный способ малочувствителен.
Цель изобретения — повышение чувствительности — достигается тем, что в культуральной среде после инкубации определяют 10 содержание ионов калия.
Предлагаемый способ определения сенсибилизации лейкоцитов заключается в следующем. 15
Кусочки селезенки убитых сенсибилизированных антигеном или аллергеном и нормальных интактных животных или сенсибилизированных неродственным антигеном расщипывают иглами в трис-буфере (рН 7,2), содср- 20 жащем 0,9 /o NaC1, полученные суспензии трижды отмывают большим количеством (1()—
20 мл) этого же буфера и концентрируют до содержания клеток 10 — 40 млн/мл.
5 — 10 мл крови, взятой в пробирки с гепа- 25 рином у больных и здоровых лиц или у больных, несенсибилизированных к данному антигену, отмывают три раза от плазмы, добавляя каждый раз равный объем трис-НС1-буфера-1+ NaC1. 30
Приготовленныс суспензип делят на две пли более равных частей, добавляют к одной части (0 5 — 2 мл осадка форменных элементов крови) соответствующее нетоксичное количество антигена (аллергена), а к другой части— равное по объему количество трис-НС1-буфера+ХаС!.
Затем добавляют антигены и суспснзпям контрольных (несенсибилизированных) клеток.
Каждый вид суспензий разливают в 3—
5 пробирок, инкубируют их 1 час при 37 С в термостате, цснтрифугируют 10 мин при
2000 об/мин (1500 g), падосадочную жидкость отсасывают и снова дважды цснтрифугируют по 10 мин при 2000 и 3000 об, мин, В надосадочной жидкости, полученной после последнего центрифугирования, опрсдсляют концентрацию калия на пламенном фэтометре.
Увеличение количества ионов калия в среде с аптигепом на 0,5 мг% и более ио сравнению со средой без антигена н средой, содер жащеп «интактный» антиген, указывает н; наличие сенсибилизации к этому антигену.
Такого увеличения количества ионов калия нс должно наблюдаться при добавлении антигсне к контрольным (несенсибилизированпым) лей.
445690
Составитель С, Малютина
Редактор Т. Шарганова Техред В. Рыбакова Корректор О. Тюрина
Заказ 395/2 Изд. М 295 Тираж 456 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, 7К-35, Раушскан наб., д. 4(5
Тппогра(>пп, пр Сапунова, 2 коцита м. Увеличение концентрации ка,мгя меньше чем на 0,4 мг о/о указывает на отрицательный результат, т. е. сенсибилизации лейкоцитов к аптигену нет. При концентрации ионов калия 0,4 мг Я> результат считается сомнительным (т. с. возможна слабая сенсибилизация). Для статистической обработки рсциниентов каждую пробу ставят в наборе Д—
5 пробирок, находят среднюю концентрацию для данной пробы (например, лейкоциты с антш сном) и вычисляют достоверность различий от контролей но t-критерию Стьюдента.
Предмет изобретения
5 Способ определения сенсибилизации лейкоцитов путем соединения их с исследуемым агентом и последующей инкубации, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности, в культуральной среде пос10 ле инкубации определяют содержание ионов калия.