Способ определения амилолитической активности ферментных препаратов

Способ определения амилолитической активности ферментных препаратов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН Ия

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (II) 449 934

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 12.06.72 (21) 1795783 28-13 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 15.11.74. Бюллетень № 42

Дата опубликования описания 21.04,75 (51) М. Кл. С 12d 13/10

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 576 15 08 (088.8) (72) Автор изобретения

И. 3. Коншина (71) Заявитель Ленинградский научно-исследовательский институт антибиотиков (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИЛОЛИТИЧЕСКОЙ

АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Изобретение касается способа количественного определения амилолитической активности фе)рментов, который может применяться в области биологии, в частности в пищевой и медицинской промышленности, а также в клинических лабораторях и в лабораториях, занимающихся исследованиями ферментов.

Известен способ определения амилолитической активности ферментов препаратов, п|редусматривающий введение раствора исследуемого препарата в агаризованный крахмальный субст)рат, инкуби рование смеси при 37 С и измерение диаметров образовавшихся на субстрате бесцветных зон.

С целью разработки количественного метода определения амилолитической активности ферментов, повышения точности определения и упрощения процесса определения по предлагаемому способу в качестве агаризованного крахмального субстрата используют смесь, содержащую 1,5% ara pa, 0,4% крахмала 0,05 М буфера и 0,05 М NaCI, а после инкубирования субстрат окрашивают йодистым реактивом.

Йодистый реактив содержит 15 г йодистого калия, 1,5 r йода и 1 л воды.

Способ определения амилолитической активности ферментных препаратов заключается в следующем. Горячий 3%-ный раствор очищенного arapa смешивают с 1,6%-ным )раство)ром крахмала и с уксусно-ацетатным буферным раствором с NaCI в таких количествах, чтобы конечная концентрация компонентов в смеси составляла 1,5% агара, 0,4% к)рахмала, 0,05

5 М буфера и 0,05 М NaCI.

Смесь разливают по 18 мл в чашки Петри диаметром 100 мм. В агаризованном субстрате проделывают восемь лунок диаметром

7,0 мм, вносят в каждую из них,по 0,08 мм

10 раствора исследуемых п репа ратов. Рабочим интервалом активности является 0,25 — 4,0

АЕ/мл. Чашки термостати руют при 37 С в течение 18 час, затем агаризованный субст)рат окрашивают йодным реактивом, содержащим

15 15 г йодистого калия и 1 5 г йода в 1 л воды.

Затем измеряют зоны расщепления крахмала и по ним судят об а ктивности исследуемых фракций, определяемой IIO стандартной калибровочной кривой, построенной на полулога20 рифмической сетке с помощью контрольного препарата с известной амилолитической активностью.

Предмет изобретения

25 1. Способ определения амилолитической активности фе)рментных препаратов,,предусматривающий введетгие раствора исследуемого препарата на агаризованный крахмальный субстрат, инкубирования смеси п ри 37 С, из30 ме)рение диаметров об|разовавшихся на суб449934

Составитель Т. Полянская

Техред М. Семенов

Корректоры: В. Петрова и О. Данишева

Редактор В. Блохина

Заказ 932/17 Изд. № 1165 Тираж 456 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Я-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 страте бесцветных зон и определение активности исследуемого препарата по калибровочной игривой, отл ич а ю щи и ся тем, что, с целью повышения точности определения и упрощения процесса определения, в качестве крахмального субстрата используют смесь, содер4 жащую 1,5% агадира, 0,4% крахмала, 0,05 М буфера и 0,05 М NaC1, а после инкуби рования субстрат окрашивают йодистым реактивом.

2. С пособ по п. 1, отличающийся тем, 5 что йодистый реактив содержит 15 r йодистого калия, 1,5 г йода и 1 л воды.