Патент 452587

Способ определения концентрации антибиотика в присутствии других антибиотиков

 

„Ы"

4 Ф

t .d УС

О П И-4 -А НИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) 452587

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства(22) Заявлено1 5.05.72 (21) 1786340/31-16 (51) М. Кл. С 12К 1/00 с присоединением заявки №вЂ”

Гасударственный квинтет

Савета Мнннстрав CCCP аа делам изобретений н аткрытий (32) Приоритет

Опубликовано05.12 74< Бюллетень № 45

Дата опубликования описания 3О О5.75 (53) УДК 615. 779- 9 (088. 8) (?2) Автор изобретении

E. П. Сиволодский (71) Заявитель (54 ) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИ Я КОНЦЕНТРАЦИИ АНТИБИОТИКА

В ПРИСУТС ГВИИ ДРУГИХ АНТИБИОТИКОВ

Изобретение относится к медицине.

Известен способ количественного определения антибиотиков.в присутствии других антибиотиков методом серийных разведений на твердой питательной среде с использованием тест-культур с хромосомной устойчивостью.

Однако такой способ трудоемок, так как получить тест-культуры с хромосомной ус- тойчивостью трудно.

С целью упрощения способа предложено использовать тест-культуру с зписомной ,устойчивостью.

Предложенный способ осуществляют, следующим образом. И

Сухой питательный агар (питательная среда) растворяют при нагревании в воде (50,0 сухой среды на 1 л воды) и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Далее в расплавленную среду вносят налидиксо- 2) вую кислоту (растворенную при кипении в

0,1 н. растворе Na0H), после чего проверяют и коррегируют рН среды (7,2-7,4).

Затем среду разливают по .20 мл в пробирки широкого диаметра или колбы и стерн- 25 о лизуют в автоклаве при 120 С в течение

20 мин. Хранят среду при комнатной тем-; пературе одну-две недели.

В качестве тест-микробов используют мутанит штамма Е.со1,1 чае Г К., имеющий хромосомную устойчивость к 1 000 мкг/мл налидиксовой кислоты, и его субштаммы, несущие эписомы лекарственной устойчивос-; ти с различными сочетаниями генов антибиотико-резистентности.

R -фактор передают тест-микробам от дизентерийных бактерий Зонне1тт удав путем конъюгации в течение 1 час по известной методике. Чувствительность тест-штаммов; к антибиотикам определяют методом серийных разведений на среде с налидиксовой кислотой с каждой новой серией сухого питательного агара, а также на этой среде в присутствии каждого нового вида испытуемого субстрата. Тест-штаммы хранят в столбике 0,5% мясо-пептонного агара под слоем вазелинового масла с пересевом через 3-4 месяца.

Питательную среду в пробирках .расплавляют на водяной бане. Испытуемый суб452587

4 рациклина 1 ЕД/мл (МПК для штамма

<-. с01ь 5Q 3008)х90 (разведение мочи) до 90 ЕД/мл, а левомицетина 6-1 ЕЛ/mr (МПК для штамма Е,. c0li, pg 2482) х10

5 (разведение мочЫ) 60-10 ЕД/мл.

Пример 2. Определение концентрации ампициллина в кале и моче человека в присутствии канамицина и тетрациклина.

В течение суток применяют перорально

10 с интервалом в 6 час 400000 ЕД тетрациклина, 1000000 ЕД канамицина и

1000000 ЕД ампициллина, после чего исследуют содержание антибиотиков в кале и моче.

Концентрация ампициллина в. кале 2 ЕД/мл (МПК для штамма Я. qqli, Ng 2404)х70 (разведение кала) 120 ЕД/г. Одновременно определяют концентрацию канамицина и тетрациклина.

20 Концентрация канамицина в кале 6 ЕД/мл (МПК для штамма E.ÑÎÈ % 1496) х80 (разведение кала) 420 ЕД/г, а тетрациклина 1,4 0:2 ЕД/мл (МПК для штамма

E.цф Я) х 100 (разведение кала) 14025 20 ЕД/г.

Концетрация ампицпллина в моче 2 ЕД/мл (MI1K для штамма E.ÑÎ!1% 2404) х80 (разведение мочи) 160 ЕД/мл; канамицин в моче не обнаружен. Концентрация тетра- циклина 1 ЕЛ/мл (МПК для штамма Я со1 Щ ) х90 (разведение мочи) 90 EQ/мл.

35 Предмет изобретения

r.ос < dn« t<-".iи С.Малк пнга! l.Õàíååâî "" "Р П.Ьрахнггна

Корректор<<:

Заказ g /5 Изл. № /Р4 Ц

ППП!1П1! Г0< ударстиеииого комитета (".<<иег а Миггггсгрои «::г".Р ио лелям изобрегеиий и отггрыгнй

Москигг, I13035, Раушскаи иаб., 4

Пр< «ирияти» «Патент», Моск<<а, l 59, ?зережконская иаб., 2l страт вносят в определенном весовом или объемном количестве в пробирки с охлажо денной до 45-55 С питательной средои для получения ряда последовательных разведений ..убстрата (например: 1:5; 1:10;

1:20; 1:30; 1: 10; 1:50 и т.д.).

Из каждой пробирки среду с субстратом выливают в стерильную чашку Петри.

Чашки с застывшей средой подсушивают в термостате 15 мин. На сектора поверхности среды засевают штрихом rro одной. петле несколько 18-24 час бульонных . культур тест-микробов (т.е. по 20-50 млн микробных клеток). Чашки с посевами помещают в термостат при 37 С на 18-24 час, после чего учитывают результаты, Тест-микробы, чувствительные к антибиотикам, содержащимся в субстрате, на среде не растут, а устойчивые тест- иикробы растут в виде сплошного газона или отдельных колоний по ходу посева. Построенные микробы, содержащиеся в нестерильном субстрате, на среде не растут или образуют отдельные колонии в глубине среза, что не мешает учету результатов. Вид антибиотиков, содержащихся в субстрате, определяют по сочетаниям роста и угнетения роста тесч-штаммов. Концентрация антибиотика равна произведению максимального разведения субстрата, при . котором отсутствует рост соответствующего тест-микроба, на минимальную подавляющую концентрацию антибиотика (в ЕД/мл для данного тест-микроба на этой же питательной среде в присутствии аналогичного вида субстрата.

Пример 1. Определение вида и концентрации антибиотиков в моче человека.

Перорально применяют два вида антибиотиков в дозах но 200000 ЕД. Через

2 час исследуют мочу на содержание антибиотиков и обнаруживают в ней тетрациклин и левомицетин. Концентрация тетРелакгоп З.(орбунова <екРе г

Способ определения концентрации антибиотика в присутствии других антибиотиков, 40 с иснользованием тест-культуры, устойчивой к этим антибиотикам, о т л и ч а юш и и с я тем, что, с целью упрощения способа, иг пользуют тест-культуру с эписомной устойчивостью.

Тираж фз () Пояиисиое