Способ получения препаратов антигенов кишечных бактерий

Способ получения препаратов антигенов кишечных бактерий

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

® йв Мйвиа1 ю»тезв оаоец,, .Вйюйм»

ОП И САНИ

ИЗОБРЕТЕН И и 45425I

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства

1) М. Кл. С 12k 5/00 (22) Заявлено 07.04.72 (21) 1768919/31-1 с присоединением заявки ¹

Государственный комитет

Совета Министров CCCf оа делам изобретений

H 0TKPblTHH (32) Приоритет

Опубликовано 25.12.74. Бюллетень № 47

Дата опубликования описания 06.02.75 (53) УДК 615.371(088.8) (72) Авторы изобретения

T. Г. Васильева, 3. М. Круглихина и H. И. Шапиро (71) Заявитель Ленинградский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ АНТИГЕНОВ

КИШЕЧНЫХ БАКТЕРИЙ

Изобретение относится к области медицинской промышленности, а именно к производству вакцин.

Известен способ получения антигенов кишечных бактерий путем выращивания культуры в питательной среде, обработки микробной массы панкреатином, детоксикацией формалином с последующим осаждением антигенов спиртом, центрифугированием, диализом и лиофилизацией.

Целью изобретения является повышение иммуногенности и снижение токсичности препаратов.

Эту цель достигают тем, что экстракцию и частичную детоксикацию проводят первичными алкилсульфатами натрия.

Способ осуществляют следующим образом.

Живую культуру паратифа Б после 8—

12 час культивирования с густой 50—

60 млрд/мл перекачивают в стериальный реактор в количестве 80 л. К микробной взвеси в реактор добавляют моющий порошок «Новость», вводя его постепенно в течение 2—

3 мин до конечной концентрации 0,5% (вес./об.), т. е. из расчета 5 г на 1 л микробной взвеси или 400 г на 80 л обрабатываемой культуры. Содержимое реактора непрерывно перемешивают с помощью мешалки (180 об/мин). Реактор герметизируют, и полученную взвесь выдерживают 2 час при комнатной температуре, периодически перемешивая (через каждые 15 — 20 мпн по 3 мин) .

В этот период происходит обезвреживание микробной взвеси, экстракция антигенов и их

5 детоксикация.

Для обеспечения гибели всех микробных клеток (после обработки порошком «Новость» могут остаться единичные устойчивыс клетки возбудителя) к микробнои взвеси в реактор

10 добавляют 0,2 jp формалина (объем/объем), т. е. на 80 л исходной культуры 160 мл формалина.

Взвесь выдерживают в реакторе с формалином 2 суток: первые сутки при 37 С, вторые—

15 при комнатной температуре. По истечении этого срока для определения полноты обезвреживания культуры из взвеси беру г выемку и производят посев на мясо-пептонньш бульон (контроль стерильности) .

20 Обезвреженную стерильную микробную массу перекачивают пз реактора в мерник суперцепгрифугп и центрифугируют. Полученный центрпфугат собирают в бутыли и подверга|от повторному цептрпфугированшо для

25 более полного отделения остатков микробной массы.

Полученный центрифугат, собранный в бутылки, разливают в стерильные мешочки из целлофановой ленты и диализуют от проточ30 ной воды в течение 48 час.

454251

Составитель С. Малютина

Техред T. Миронова

Корректор Н. Стельмак

Редактор Д. Пинчук

Заказ 154/10 Изд. № 215 Тираж 456 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Отдиализованные растворы антигена разливают в сухие чистые стерильные банки, закрывают двумя слоями марли, этикетируют и высушивают лиофильно. Высушивание антигена производят в вакууме из замороженного состояния. Замораживание проводят в камере при минус 40 — минус 50 С в течение 15 час.

Затем банки помещают в сушильный аппарат, создают вакуум в пределах 100 — 200 мк; через 2 — 3 час начинают подогрев. Сушат в течение 48 — 72 час, температура при выгрузке

ЗTС.

Выход сухого антигена составляет 3,4 1,0г на 1 л исходной микробной взвеси.

Высушенный антиген помещают в стерильные стеклянные банки темного стекла с притертой пробкой и хранят при комнатной температуре. Срок хранения 2,5 года.

Предмет изобретения

Способ получения препаратов антигенов кишечных бактерий путем экстракции живой культуры, детоксикации формалином, диали10 за и лиофилизации, отличающийся тем, что, с целью повышения иммуногенности и снижения токсичности препаратов, экстракцию и частичную детоксикацию проводят первичными алкилсульфатами натрия.