"способ получения антибиотика антимоэбина

"способ получения антибиотика антимоэбина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ВсЕСОЮЗНЛЯ Ь

ПАТЕНТ!. 0 @ И

ОПИС

ИЗОБРЕТЕН ИЯ (ii) 457228

Союз Советских

Социалистических

Республик

К IlATEHTY (61) Зависимый от патента (51) М. Кл. С 12d 9/04

С 07 11/OO (22) Заявлено 12,06.67 (21) 1163478„ 31-16 (32) Приоритет—

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Опубликовано 15.01.75. Бюллетень М 2 (53) УДК 615.779.932 (088.8) Дата опубликования описания 13.03.75 (72) Автор изобретения

Иностранец

Мандаджам Джеерсаннидхи Тирумалахар (Индия) Иностранная фирма

«Хиндустан Антибиотикс Лтд» (Индия) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА АНТИМОЭБИНА

Изобретение относится к производству антибиотиков.

Предложен способ получения антибиотика антимоэбина, ранее в патентной литературе не описанный, который заключается в том, что культуру Emericellopsis synnematicola АТСС

16540 или Cephalosporium pimprina АТСС

16541 выращивают в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли в течение 48 †1 ч при

20 — 37 С и начальном рН среды 4,0 — 7,5, затем мицелий и фильтрат культуральной жидкости экстрагируют органическим растворителем, выделяют целевой продукт из экстракта и очищают известными способами.

Антимоэбин является антипротозольным, антигельминтным антибиотиком. Антибиотик имеет очень низкую токсичность. Антибиотик антимоэбин имеет следующие свойства.

Род. Нейтральный полипептид.

Вид и цвет. Белый, кустообразные иголки, легкий, горький, без запаха.

Температура плавления. От 219 до 220 С.

ОптическаЯ активность. (n)ерв =+10 (C = 1,02 /О в метаноле); (и) р — — +10 (С = 1,03% в диметилформамиде).

Максимальная абсорбция ИК-спектра

33,20 — 31,90 (связанный NH); 16,50 — 15,30 СО и NH — деформация; 10,78; 6,95 см — .

Растворимость. Растворимый в метаноле, бутаноле, н-пропаноле, изопропаноле, пиридине, ледяной уксусной кислоте, диметилформамиде, водяном ацетоне, влажном метилово5 эат иал ооваоо м к еeт оoнaеe, а также в метиловом и этиловом диэтилформамиде, нерастворим в воде, хлороформе, эфире, бензине, уксусноэтиловом эфире, уксуснобутиловом эфире, ацетоне, толуоле, четыреххлористом углероде, диоксане, 10 бензоле, сернистом углероде, хлорметане и этиленгликоле.

Дальнейшие реакции. Отрицательные: раствор железа и хлора, проба Бенедикта, Ноли15 ша, Сокогуши, а также реакции с нингидрином, биурет и антрон; положительные ксантопротеиновые реакции, после 1-часового щелочного гидр олиза, положительные биуретовые реакции, гидролиз с 6п-соляной кислотой в за20 крытой трубе в течение 16 ч дает 11 положительных нингидриновых проб при двуразмерной фотографии хроматической бумаги. Путем применения одно- и двуразмерных фотографий хроматической бумаги определяются с по25 мощью стандартных аминокислот следующие аминокислоты: пролин а-аминонзомасляную кислоту, фенилаланин, валин, лейцин, гидроксамовый пролин, лизин и глутаминовую кис. лоту.

30 Анализ, /о. С 56,11; Н 7,56; N 13,56.

457228

Галогенные и серные реакции являются отрицательными.

На фиг. 1 показан ИФ спектр антимоэбина в «nujol»; на фиг. 2 — ИК спектр для двух различных пределов.

Пример 1. Изготовление антимоэбина.

Вначале готовят среду, состоящую из, :

Соя 20

Глюкоза 2,0

Сернокислый аммоний 0,3

Хлористый натрий 0,25

Углекислый кальций 0,6.

Все компоненты имеют рН 65 до 7. Затем стерилизуют раствор в количестве 50 л в течение 15 — 30 мин, после чего среду засевают культурой Emericellopsis synnematicola либо

Е. poonensis.

Выращивание ведут при перемешивании и аэрации при 28 С, наблюдая период сильной вегетации с помощью микроскопа. После 58 ч вегетации содержимое переносят в ферментатор на 100 л, содержащий среду следующего состава, / .

Соя 2,5

Глюкоза 3,0

Сернокислый аммоний 0,5

Хлористый натрий 0,25

Углекислый кальций 0,5

Вода Остальное.

Все компоненты имеют рН от 6 5 до 6,8. Выращивание ведут при перемешивании и аэрации. Рост мицелия и образование антибиотика время от времени определяют гравиметрическим способом. После 96 — 120 ч рН основания доводят до 5 и производят фильтрацию, а затем собирают фильтрат и экстрагируют его с

1/3 объема н-бутанола, причем для перемешивания антибиотика и для переведения его из основания в растворитель применяют экстрактор. Подобным способом экстрагируют мицелий с 1,5 объемом бутанола на 1 кг мицелия, затем экстракцию повторяют. Во время второй экстракции применяют на 1 кг мицелия

1 л бутанола. После экстракции и перемешивания бутанол отфильтровывают и отделяют, а затем экстракт бутанола перемешивают с фильтратом основания.

Экстракт бутанола применяют для удаления солей и для их концентрации в вакууме около

5 30 л. Раствор бутанола имеет вначале объем около 600 л.

Большое количество осадка, состоящего из первичного антибиотика отфильтровывают, а затем промывают с помощью ацетона и сушат.

lo После этого к раствору бутанола прибавляют тройное количество ацетона и сохраняют этот раствор при 10 С в течение 24 ч, а затем отфильтровывают светло-желтый осадок, промывают его ацетоном и сушат.

15 Полученный описываемым способом антимоэбин промывают многократно водой вплоть до;выделения желтоокрашенного вещества, а затем растворяют его в 45 / -ном метаноле и подвергают мойке водой при 50 С. В резуль20 тате этого получают значительное количество антимоэбина. Затем добавляют активный уголь и подвергают этот раствор фильтрованию в нагретом состоянии, выдерживают его в течение 3 — 4 ч при комнатной температуре

25 и переносят в холодное помещение, в котором выдерживают его в течение ночи при 5 С. Получают большое количество игольчатых кристаллов в пучках, которые отфильтровывают, моют дистиллированной водой и сушат. Ана30 логично проводят вторую кристаллизацию.

Предмет изобретения

1. Способ получения антибиотика антимо35 эбина, отличающийся тем, что культуру

Emericellopsis synnematicola ATCC 16540 или

Cepholosporium pimprina ATCC 16541 выращивают в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минераль40 ные соли, экстрагируют мицелий и фильтрат культуральной жидкости органическим растворителем, выделяют целевой продукт из экстракта и очищают известными способами.

2. Способ по и. 1, отлич а ю щийся тем, 45 что выращивание осуществляют в течение

48 — 192 ч при 20 — 37 С и начальном рН среды

4,0 — 7,5.

457228

1О

Z0 го за ио

5а

S0

100

1аа

210 заа чала ипп

Фиг. 1

25 1

10О

100, 80 а ъ 60

И

Д иа

zo го

50 1

100

60 ип

zo о 00

0 ио zo

3 0 У.5 40 50 GO 80 чкм цопп ыаа пап 2500 zooo 1500

b.0 7-0 80 10 П а П 100мм

2000 1800 1600 1и00 1200 1000 800

Qua 2