Способ получения вакцины против краснухи

Способ получения вакцины против краснухи

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ег,. .s:

ОП И САМИ Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ ц 457229

Союз Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕ НТУ (61) Зависимый от патента (22) Заявлено 29,07.67 (21) 1176000/31-16 (32) Приоритет— (51) М. Кл. С 121с 7, 00

Государственный комитет

Совета РЛиннстров СССР по делам изобретений и открьпнй (53) УДК 615.371(088.8) Опубликовано 15.01.75. Бюллетень № 2

Дата опубликования описания 13.03.75 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Евгений Бернард Бьюнак и Морис Рольф Хиллеман (США) Иностранная фирма

«Мерк энд Компани, Инк,» (США) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ КРАСНУХИ

Изобретение относится к вирусологии, в частности к способам получения вакцин против краснухи.

Известен способ получения вакцин против краснухи путем культивирования вируса краснухи в культуре клеток почек мартышки при

30 — 38 С. Однако культура ткани мартышки является неудовлетворительной средой для аттенуации, поскольку вакцина для людей, полученная из нее, обычно содержит множество различных неприемлемых чужеродных веществ.

Для снижения степени кантаминации вакцины чужеродными вирусами предлагается вирус культивировать в культуре клеток эмбрионов утки и проводить не менее 10 пассажей.

При осуществлении способа вирус краснухи переносят с клинического материала, т. е. гор ового мазка лиц, зараженных краснухой, в культуру ткани эмбриона утки. Вирус краснухи помещают в стеклянные бутылочки, содержащие культуру ткани эмбриона утки, приготовленную из измельченных и трипсинированных зародышей утки приблизительно десятидневного возраста. Питательной средой культуры может быть любая среда, способствующая росту клеток, например известная среда

199, к которой добавляют сыворотку крови теленка. После этого зараженные культуры клетки выращивают в термостате последовательным пересевом при температуре в пределах 30 — 38 С, желательно при 30 — 34 С (опти5 мальная 32 С), и 35 — 38 С (оптимальная

36 С). При этом вирус реплицируется в большом количестве и ослабляется.

Пример. Девяти-один надцатидневные эмбрионы утки после удаления головы и ко10 нечностей тонко измельчают в стерильных условиях, а измельченную ткань промывают несколько раз раствором Хенка, трипсинируют при 36 С с использованием 0,25% трипсина (Difco 1: 250) в тройном соленом буфере в

15 течение 2 — 3 ч. Клеточную суспензию собирают стерильной марлей и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 мин. Уплотненные клетки вновь взвешивают в ростовой среде (среда 199) для подсчета, содержащей 2% сы20 воротки крови теленка, нагреваемой при 56 С в течение 30 мин, и 50 мг/мл неомицина.

Культуру высевают в бутылки при концентрации 350 000 жизнеспособных клеток на 1 мл, инкубируют от 36 до 48 ч при 36 С и исполь25 зуют для повторного размножения или для приготовления вакцины.

Культуры ткани эмбриона утки готовят в стеклянных бутылках с использованием питательной среды 199, содержащей 2% неактиви457229

Составитель С. Щенева

Техред Г. Дворина

Корректоры: В. Петрова и О. Данишева

Редактор Л. Тюрина

Заказ 391/17 Изд. № 1022 Тираж 529

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, K-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Типография, пр. Сапунова, 2 рованной сыворотки крови теленка в качестве ростовой среды. Через 3 — 4 дня после посева ростовую среду удаляют, а бутылочные культуры 4 раза промывают раствором Хенка—

100 мл на одну промывку и инокулируют

2,5 млн. вируса краснухи на бутылку. В каждую бутылку добавляют 60 мл среды 199, содержащей 10% соответствующего вещества, стабилизирующего вирусную анфекционность, и затем культуры инкубируют при 30 — 34 С.

В ростовую и поддерживающую среду вводят неомицин при концентрации 50 мг/мл. Вируссодержащую массу снимают через 2 — 4 дня и культуры в бутылках пополняют свежей поддерживающей средой, содержащей стабилизирующее вещество. Десять повторных пассажей выполняют при 32 С.

Титрование на инфекционность проводят в культурах почечной ткани мартышки. Вируссодержащие жидкости хранят при 70 С. Берут пробу для контроля и испытания на безопасность. Оставшуюся после пробы жидкость очищают и проверяют на безопасность на обезьянах. В оставшуюся жидкость добавляют со5 ответствующее дополнительное стабилизирующее вещество, помещают в отдельные бутылочки и высушивают, после высушивания закупоривают, запечатывают и хранят.

10 Предмет изобретения

Способ получения вакцины против краснухи путем культивирования вируса краснухи в культуре клеток при 30 — 38 С с последующим

15 отделением вируссодержащего материала известными приемами, отличающийся тем, что, с целью снижения степени кантаминации вакцины чужеродными вирусами, вирус культивируют в культуре клеток эмбрионов утки

20 и проводят не менее 10 пассажей.