Способ получения антибиотиков
Иллюстрации
Показать всеРеферат
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик е 734.„9-, 4Ъ| Ф Рл (61) Дополнительное к авт. сеид-ву (22) Заявлено 040573 (21) 1923164/31-16 (51)h4
С 12 D 9/00 с присоединением заявки М (23) Приоритет—
Государственный комитет
СССР по делам изобретений и открытий
Опубликовано 3001,80. Бюллетень М 4
Дата опубликования описания 300180 (53) УДК 6 15 . 779 . 9 (088. 8) (72) Авторы изобретения
В.А.Пыганов, Е.П.Яковлева и О.С.Куэиецова (71) 3a яв ител ь
Ленинградский научно-исследовательский институт антибиотиков . (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКОВ
Кукурузная мука
Соевая мука
Гидрол (по редуцирующим веществам)
Хлорид натрия
Углекислый кальций вода, л
Изобретение относится к медицинской промышленности, в частности к получению антибиотиков.
Известен способ стимулирования биосинтеза леворина путем совместного культивирования продуцента антибиотика и дрожжеподобных грибов.
Для повышения выхода целевого продукта предлается к ферментационной Я среде добавлять фильтрат культуральной жидкости дрожжеподобных грибов, например, Candida или RhodotoruIa .
Можно также использовать предвари» тельно лиофильно высушенный фильтрат. g
Предлагаемый способ получения антибиотиков включает два этапа: первый заключается в приготовлении биостимулятора, а второй — в проведении ферментации продуцентов антибиотиков на средах, содержащих биостимулятор.
Для получения биостимулятора.применяют один из видов дрожжеподобных грибов родов: Candida, RhodotoruIa, например Candida tropicalis, Сапй1йа 25
utiIis, Candida IypoIytica, RhodotoruIa aurantica RhodotoruIa muciIa
ginosa, или какой-либо другой организм этих родов. Один из указанных микроорганизмов выращивают на суслоагаре в пробирках или бактериологических матрацах при 37еС в течение
24 ч и затем смывают физиологическим раствором для получения суспензии, содержащей 10 млрд. микробных клеток. в 1 мл, Приготовленную суспенэию вносят в количестве 1-2% в качалочные колбы со средой рН 6,8-7,0 следующего состава, гг
Колбы -устанавливают на качалку и инкубируют 24-48 ч при 27-28ФС.
Полученную культуральную жидкость сливают и отделяют фильтрованием или центрифугированием от взвешенных частиц. Для лучшей фильтрации или центрифугирования культураЛьяую жидкость предварительно эамораживают при минус 10-15ОС и оттаивают при комнатной температуре. Для удаления пигмен457342 тов фильтрат обрабатывают активиГ Р»ванным углем. Для этого к нему добавляют 1Ъ осветляющего угля марки A и перемешивают его с помоцью мешалки в течение 30 мин, после чего уголь отфильтровывают на плотной фильтровальной бумаге. Получают осветленный фильтрат, содержащий в растворенном виде биостимулятор (продукт 1).
Осветленный фильтрат разливают по пробиркам или флаконам и лиофилируют.
Остаток после лиофильной сушки, выход которого составляет 12-14 r на
1 л культуральной жидкости (продукт 2), используют как биостимулятор.
Лиофильно высушенный остаток является многокомпонентной смесью: .и содержит, Ъ:
Редуцирующие вещества
Неорганический фосфорБелок
Органические кислоты
Зола
Влажность порошка
20-23
2О
30-35
2, 25-3 5
4-5
30-40 8-10
600 мл
До 1 6О
7,3-7,4
После стерилизации и охлаждения среды в нее вносят 5 мл двусуточного инокулюма культуры Actinomyces
Важной особенностью биостимулятора является его термостабильность, благодаря чему свойства вецества сохраняются после добавления его в сре- ЗО ды и их стерилизации.
Для проведения ферментации используют регламентные культуры и среды, а также известные способы подготовки посевного материала, выращивания 35 микроорганизмов и стерилизации сред.
Пример 1. Ферментация Acti—
nomyces Ievori s штамм 28 продуцента леворина. В качалочные колбы емкостью 5.л, содержащие 1 л соево-кукурузно-гидрольной среды вносят 10 мл
10 млрд=.ед.взвеси Candida tropicaXis.
Колбы устанавливают на качалку и культивируют при 27-28 С в течение
2 сут. Затем клетки отделяют центрифугированием и получают биостимуля- 45 тор в виде продукта 1. В качалочные колбы на 750 мл, каждая из которых содержит 50 мл соево-кукурузно-гидрольной среды следующего состава, г:
Кукурузная мука 20
56
Соевая мука 10
Гидрол (по рейуцируюцим вецествам ) 10
Хлорид натрия 5 55
Уг лекислый кальций 1
Биостимулятор (продукт 1)
Вода, л рН до стерилизации
severis, выращенного при 27-28@С на среде следующего состава, г:
Соевая мука
Глюкоза
Клорид натрия
Углекислый кальций
Вода, л
Затем проводят ферментацию при обычном режиме в течение 120 ч.
Активность культуральной жидкости по окончании процесса ферментации составляет 61000 ед/мп, при ферментации на той же среде беэ биостимулятора активность культуральной жидкости составляет 45200 ед/мл.
Пример 2. Ферментация Actinomyces nodosus штамм 510/13 продуцента амфотерицина В. В качалочные колбы емкостью 5 л, содержащие 1 л соево-. кукурузно-гидрольной среды, вносят 10 мл 10 млрд. ед. взвеси
RhodotoruIa aurantica. Колбы устанавливают на качалку и выращивают культуру при 27-28 С в течение 2 сут.
Затем центрифугируют и из недостаточной жидкости получают биостимулятор (продукт 1). После этого готовят ферментационную среду следующего состава, г:
Кукурузная мука
Глюкоза
Сернокислый аммоний 5
Кукурузный экстракт 5 (по весу)
Углекислый кальций 5
Биостимулятор (продукт 1) 6 00 мл
Вода, л До 1 рН среды до стерилилизации 6,9-7,1
Среду разливают в качалочные колбы емкостью 750 мл по 50 мл. После стерилизации и охлаждения среды в нее вносят 5 мп двусуточного посевного материала Actinomyces nodosus, выращенного при 27-28"С на среде, г:
Соевая мука
Глюкоза
Углекислый кальций 2,5
Хлорид натрия 1
Вода, л 1 рН 7,2-7, 3. до стерилизации
Ферментацию при обычном режиме проводят в течение 96 ч, Активность культуральной жидкости по окончании процесса ферментации ,составляет 5500 мкг/мл против
4100 мкг/мл в контрольной ферментации беэ биостимулятора.
457342
Формула изобретения
Составитель С.Малютина
ТехредО,Легеэа Корректор Ж,.Шароши.
Редактор Л.Письман
Заказ 10023/8 Тираж 522 Подписное
БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ЛПП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4
1. Способ получения антибиотиков путем глубинного биосинтеза, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, к ферментационной среде добавляют фильтрат культуральной жидкости дрожжеподобных грибов, например, рода
Cand1da или Rhodotorula.
2. Способ по п.l, о т л и ч а ю,шийся тем, что фильтрат культуральной жидкости предварительно лиофильно высушивают.