Способ получения антибиотиков

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик е 734.„9-, 4Ъ| Ф Рл (61) Дополнительное к авт. сеид-ву (22) Заявлено 040573 (21) 1923164/31-16 (51)h4

С 12 D 9/00 с присоединением заявки М (23) Приоритет—

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий

Опубликовано 3001,80. Бюллетень М 4

Дата опубликования описания 300180 (53) УДК 6 15 . 779 . 9 (088. 8) (72) Авторы изобретения

В.А.Пыганов, Е.П.Яковлева и О.С.Куэиецова (71) 3a яв ител ь

Ленинградский научно-исследовательский институт антибиотиков . (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКОВ

Кукурузная мука

Соевая мука

Гидрол (по редуцирующим веществам)

Хлорид натрия

Углекислый кальций вода, л

Изобретение относится к медицинской промышленности, в частности к получению антибиотиков.

Известен способ стимулирования биосинтеза леворина путем совместного культивирования продуцента антибиотика и дрожжеподобных грибов.

Для повышения выхода целевого продукта предлается к ферментационной Я среде добавлять фильтрат культуральной жидкости дрожжеподобных грибов, например, Candida или RhodotoruIa .

Можно также использовать предвари» тельно лиофильно высушенный фильтрат. g

Предлагаемый способ получения антибиотиков включает два этапа: первый заключается в приготовлении биостимулятора, а второй — в проведении ферментации продуцентов антибиотиков на средах, содержащих биостимулятор.

Для получения биостимулятора.применяют один из видов дрожжеподобных грибов родов: Candida, RhodotoruIa, например Candida tropicalis, Сапй1йа 25

utiIis, Candida IypoIytica, RhodotoruIa aurantica RhodotoruIa muciIa

ginosa, или какой-либо другой организм этих родов. Один из указанных микроорганизмов выращивают на суслоагаре в пробирках или бактериологических матрацах при 37еС в течение

24 ч и затем смывают физиологическим раствором для получения суспензии, содержащей 10 млрд. микробных клеток. в 1 мл, Приготовленную суспенэию вносят в количестве 1-2% в качалочные колбы со средой рН 6,8-7,0 следующего состава, гг

Колбы -устанавливают на качалку и инкубируют 24-48 ч при 27-28ФС.

Полученную культуральную жидкость сливают и отделяют фильтрованием или центрифугированием от взвешенных частиц. Для лучшей фильтрации или центрифугирования культураЛьяую жидкость предварительно эамораживают при минус 10-15ОС и оттаивают при комнатной температуре. Для удаления пигмен457342 тов фильтрат обрабатывают активиГ Р»ванным углем. Для этого к нему добавляют 1Ъ осветляющего угля марки A и перемешивают его с помоцью мешалки в течение 30 мин, после чего уголь отфильтровывают на плотной фильтровальной бумаге. Получают осветленный фильтрат, содержащий в растворенном виде биостимулятор (продукт 1).

Осветленный фильтрат разливают по пробиркам или флаконам и лиофилируют.

Остаток после лиофильной сушки, выход которого составляет 12-14 r на

1 л культуральной жидкости (продукт 2), используют как биостимулятор.

Лиофильно высушенный остаток является многокомпонентной смесью: .и содержит, Ъ:

Редуцирующие вещества

Неорганический фосфорБелок

Органические кислоты

Зола

Влажность порошка

20-23

30-35

2, 25-3 5

4-5

30-40 8-10

600 мл

До 1 6О

7,3-7,4

После стерилизации и охлаждения среды в нее вносят 5 мл двусуточного инокулюма культуры Actinomyces

Важной особенностью биостимулятора является его термостабильность, благодаря чему свойства вецества сохраняются после добавления его в сре- ЗО ды и их стерилизации.

Для проведения ферментации используют регламентные культуры и среды, а также известные способы подготовки посевного материала, выращивания 35 микроорганизмов и стерилизации сред.

Пример 1. Ферментация Acti—

nomyces Ievori s штамм 28 продуцента леворина. В качалочные колбы емкостью 5.л, содержащие 1 л соево-кукурузно-гидрольной среды вносят 10 мл

10 млрд=.ед.взвеси Candida tropicaXis.

Колбы устанавливают на качалку и культивируют при 27-28 С в течение

2 сут. Затем клетки отделяют центрифугированием и получают биостимуля- 45 тор в виде продукта 1. В качалочные колбы на 750 мл, каждая из которых содержит 50 мл соево-кукурузно-гидрольной среды следующего состава, г:

Кукурузная мука 20

56

Соевая мука 10

Гидрол (по рейуцируюцим вецествам ) 10

Хлорид натрия 5 55

Уг лекислый кальций 1

Биостимулятор (продукт 1)

Вода, л рН до стерилизации

severis, выращенного при 27-28@С на среде следующего состава, г:

Соевая мука

Глюкоза

Клорид натрия

Углекислый кальций

Вода, л

Затем проводят ферментацию при обычном режиме в течение 120 ч.

Активность культуральной жидкости по окончании процесса ферментации составляет 61000 ед/мп, при ферментации на той же среде беэ биостимулятора активность культуральной жидкости составляет 45200 ед/мл.

Пример 2. Ферментация Actinomyces nodosus штамм 510/13 продуцента амфотерицина В. В качалочные колбы емкостью 5 л, содержащие 1 л соево-. кукурузно-гидрольной среды, вносят 10 мл 10 млрд. ед. взвеси

RhodotoruIa aurantica. Колбы устанавливают на качалку и выращивают культуру при 27-28 С в течение 2 сут.

Затем центрифугируют и из недостаточной жидкости получают биостимулятор (продукт 1). После этого готовят ферментационную среду следующего состава, г:

Кукурузная мука

Глюкоза

Сернокислый аммоний 5

Кукурузный экстракт 5 (по весу)

Углекислый кальций 5

Биостимулятор (продукт 1) 6 00 мл

Вода, л До 1 рН среды до стерилилизации 6,9-7,1

Среду разливают в качалочные колбы емкостью 750 мл по 50 мл. После стерилизации и охлаждения среды в нее вносят 5 мп двусуточного посевного материала Actinomyces nodosus, выращенного при 27-28"С на среде, г:

Соевая мука

Глюкоза

Углекислый кальций 2,5

Хлорид натрия 1

Вода, л 1 рН 7,2-7, 3. до стерилизации

Ферментацию при обычном режиме проводят в течение 96 ч, Активность культуральной жидкости по окончании процесса ферментации ,составляет 5500 мкг/мл против

4100 мкг/мл в контрольной ферментации беэ биостимулятора.

457342

Формула изобретения

Составитель С.Малютина

ТехредО,Легеэа Корректор Ж,.Шароши.

Редактор Л.Письман

Заказ 10023/8 Тираж 522 Подписное

БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ЛПП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

1. Способ получения антибиотиков путем глубинного биосинтеза, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, к ферментационной среде добавляют фильтрат культуральной жидкости дрожжеподобных грибов, например, рода

Cand1da или Rhodotorula.

2. Способ по п.l, о т л и ч а ю,шийся тем, что фильтрат культуральной жидкости предварительно лиофильно высушивают.