Субстрат для определения активности моноаминоксидазы

Субстрат для определения активности моноаминоксидазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

«

О П И" САН И. Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

00 459474

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 20.06.73 (21) 1937265/31-16 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 05.02.75. Бюллетень № 5

Дата опубликования описания 31.07.75 (51) М. Кл. С 07g 7/02

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам иаобретеимй н открмтий (53) УДК 577.15.07 (088.8) (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Г. Д. Забродин и Б. М. Коган

Центральный научно-исследовательский институт судебной психиатрии им. В. П. Сербского (54) СУБСТРАТ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

МО НОАМИ НОКС ИДАЗ Ы

Н0 Q МН-СН,- СООН

Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики и контроля лечения психических больных.

Известно применение п-нитрофенилэтиламина в качестве субстрата для определения активности моноа миноксидазы.

11елью изобретения является применение п-оксифениламиноуксусной кислоты в качестве субстрата для определения активности моноаминоксидазы в биологических средах.

В качестве субстрата для определения активности моноаминоксидазы в биологических средах используют п-оксифенилглицин, структурная формула которого

Молекулярный вес 167,16583 у. е. Вещество имеет вид порошка светло-серого цвета, хорошо растворимого в воде. В водном растворе обладает собственной интенсивной флюоре"ценцией, пропорциональной его концентрации в растворе, с длиной волны возбуждения

318 ммк и длиной волны испускания 380 ммк. и-оксифенилглицин используют в качестве субстрата для фермента моноаминоксидазы при оптимальном значении рН 8,5, при котором часть молекул этого вещества диссоциирует на фенол и глицин, а аминогруппа атакуется ферментом. В результате ферментативного действия моноаминоксидазы глицин превращается в глиоксиловую кислоту с выделением иона аммония и перекиси водорода, которая разрушается введением в реакционную смесь пероксидазы из хрена.

Активность моноаминоксидазы в биологических средах определяют следующим образом.

В кварцевую кювету термостатической ячейки спектрофлюориметра последовательно вно15 сят 2,6 мл «трис» буфера рН 86; 0,1 мл (0,05 мг) п-оксифениламиноуксусной кислоты;

0,1 мл (0,04 мг) пероксидазы из хрена и 0,2 мл плазмы крови (или суспензии митохондрий или гомогената исследуемой ткани). Темпера20 тура смеси должна поддерживаться на уровне

30+0,5 С. При длине волны возбуждения

318 ммк и длине волны испускания 380 ммк самописец регистрирующего прибора спектрофлюориметра выводится на 75 делений шкалы

25 (предварительно производится калибровка шкалы регистрирующего прибора при этих же длинах волн с помощью раствора хинина сульфата 0,01 мкг (мл в 0,1 н H2SO ). Через минуту после перемешивания реакционной смеси

30 включается лентопротяжный механизм реги 459474

Предмет изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор Т. Каранова Техред А. Дроздова Корректоры: В. Петрова и О. Дани|нева

Заказ 1666/8 Изд. ¹ 388 Тираж 529 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 стрирующего прибора на пять или больше минут. Спустя определенное время, отмечается количество делений, на которое снизилась интенсивность флюоресценции и-оксифенилуксусной кислоты.

Применение п-оксифениламиноуксусной кислоты в качестве субстрата для определения

5 активности моноаминоксидазы.