Способ получения декстраназы

Способ получения декстраназы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Ю E

ИЗОЬЕЕтЕНИЯ

<») 459497

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 27.07.73 (21) 1952275/28-13 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 05.02.75. Бюллетень № 5

Дата опубликования описания 31.07.75 (51) М. Кл. С 12d 13/10

ГосударстееннЬ<й комитет

Совета Миийстров СССР по делам изобретеиий и открытий (53) УДК 576.15.08 (088.8) (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Г. А. Молодова, Л. И. Петрова и H. Н. Бурцева

Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДЕКЮРАНАЗЫ

Изобретение относится к ферментной области микробиологической промышленности, а именно к способу получения декстраназы при глубинном культивировании мицелиального гриба Penicillium funiculosum 15.

Известен способ получения декстраназы путем культивирования ее продуцентов на водной минеральной среде, содержащей декстран, с последующим выделением декстраназы из культуральной жидкости.

Недостатком известного способа является низкий уровень активности получаемой декстраназы.

С целью повышения активности декстраназы предлагается в процессе культивирования в культуральную среду, дополнительно вводить

0,05 — 0,1% декстрана.

Целесообразно дополнительное количество декстрана в культуральную жидкость вводить на 2 — 3 сутки культивирования продуцента.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом, В процессе выращивания продуцента декстраназы Penicillium funiculosum 15, культивируемого на синтетической питательной среде известного состава с 1% нативного высокомолекулярного декстрана, к растущей культуре на 2 — 3-сутки культивирования добавляют дополнительно 0,05 — 0,1% декстрана.

Я

Предлагаемый способ позволяет в 3 — 4 раза увеличить активность декстраназы в культуральной жидкости, Активность внеклеточной декстраназы определяют вискозиметрически по разжижающей способности фермента с использованием в качестве субстрата 0,8%-ного раствора нативного бактериального декстрана. Для этого к

15 мл 0,8%-ного раствора декстрана в 0,1 М

1О iNa-ацетатном буфере (рН 5,0) добавляют 1 мл культуральной жидкости (после соответствующего разведения). Реакционную смесь инкубируют при 37 С. Через определенные интервалы времени измеряют время истечения реак15 ционной смеси на вискозиметре ВПЖ-2 с диаметром капилляра 0,54 — 0,56 мм, термостатированном при 37 С.

Активность декстраназы рассчитывают по формуле:

20 1

А;= Са

Н где А — активность, ед./л;

25 C,— концентрация субстрата, %;

q — относительная вязкость;

1 — время реакции, сек.

Выращивание штамма-продуцента проводят на среде, содержащей (в %): 1,0 нативного

30 декстрана; 0,1 NaNO ., 0,08 К НР04 и 0,06

459497

Таблица 1

Биомасса, ность г/л ед/л

Время введения дополнительного количества декстрана, сутки

Активность, ед/л

Исходное содержание декстрана в питательной среде, %

Биомасса, г/л

3,6

3,5

Вторые

Контроль

3,8

3,0

257

Третьи

Контроль

2,5

2,4

0,5

Контроль

3,4

2,7

221

Вторые н третьи*

Контроль

2,4

2,3

44

0,6

Контроль

ЗО

0,8

Контроль

2,2

2,3

18

ЗО

2,5

2,5

41

0,9

Контроль

3,8

3,0

257

1,0

Контроль

З,З

40

Таблица 2

: Биомасса, г/л !

Активность, ед/л

Дополнительное количество декстрана, %

3,8

3,3

126

0,01

Контроль

3,4

2,8

174

126

0,03

Контроль

3,4

2,8

267

0,05

Контроль

3,5

2,8

257

0,1

Контроль

4,3

3,0

0,2

Контроль

>gSQ4. рН среды до стерилизации 6,0. Культивирование ведут в колбах на качалке (200 об/мин) при 29 — 30 С в течение четырех суток.

Посевным материалом служит трехсуточный мицелий гриба.

Посевной материал вносят в опытные колбы в количестве 4%.

Пример 1. На вторые или третьи сутки культивирования в опытные колбы, содержащие 100 мл среды с 1% декстрана, вносят дополнительно 0,1% декстрана, т. е. 10 мл вышеописанной среды.,Для,контроля во всех примерах продуцент выращивают на среде с 1% декстрана. На четвертые сутки роста определяют активность внеклеточной декстраназы (см. табл. 1).

* На вторые н третьи сутки вводят по 0 1% декстрана

Из данных табл. 1 видно, что незначительное дополнительное внесение декстрана резко увеличивает биосинтез декстраназы, в то время как рост мицелия практически не меняется. Наиболее эффективным оказывается добавление 0,1% декстрана на третьи сутки культивирования. При этом наблюдается трехчетырехкратное увеличение активности декстраназы в культур альной жидкости (до

220 — 250 ед/л) .

Пример 2. В процессе культивирования продуцента на третьи сутки в опытные колбы со средой, содержащей 1% декстрана, вносят

15

4 дополнительно 0,01; 0,03; 0,05; 0,1 и 0,2% декстрана в виде стерильной исходной питательной среды. На четвертые сутки роста в культуральной жидкости определяют активность декстраназы (см. табл. 2).

Наибольший уровень активности наблюдается на третьи сутки культивирования при внесении 0,05 и 0,1 % декстрана, Увеличение или уменьшение количества добавляемого декстрана в процессе культивирования не приводит к столь значительному увеличению активности (активность увеличивается только в

1,5 раза).

Пример 3. На третьи сутки .культивирования продуцента в опытные колбы вносят дополнительно 0,1% декстрана при разном исходном содержании его в питательной среде (0,5 — 1%), На четвертые сутки культивирования определяют активность декстраназы в культуральной жидкости (см. табл, 3).

Таблица 3

Из данных табл. 3 видно, что дополнительное внесение 0,1% нативного декстрана на третьи сутки культивирования приводит к 3—

4-кратному увеличению активности декстраназы, когда исходное содержание декстрана в питательной среде составляет 1%. При уменьшении исходного содержания декстрана в среде увеличения ферментативной активности не наблюдается. При выращивании продуцента на среде с 1,1% нативного декстрана, внесенного однократно до стерилизации среды, активность декстраназы на четвертые сутки культивирования не превышает активность контрольных труб, содержащих 1 декстраназы (59 — 64 ед/л).

Таким образом, использование предлагаемого способа получения декстраназы позволяет увеличить активность последней в 3 — 4 раза.

Предмет изобретения

1. Способ получения декстраназы путем культивирования ее продуцентов на водной минеральной среде, содержащей декстран, с последующим выделением декстраназы из культуральной жидкости, отличающийся

459497

Составитель А. Петрова

Редактор Л. Гончарова Техред Г. Дворина Корректоры: В. Петрова и О, Данишева

Заказ 1666i9 Изд Ке 388 Тираж 529 Подписное

ИНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, 7К-35, Раушская иаб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 тем, что, с целью повышения активности декстраназы, в процессе культивирования в культуральную среду дополнительно вводят 0,05—

0 1 о/о дл-с:- a t ta.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дополнительное количество декстрана в культуральную жидкость вводят на 2 — 3 сутки культивирования продуцента.