Способ выделения лецитиназного ферментного комплекса

Способ выделения лецитиназного ферментного комплекса

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С A Н И E 460293

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 23.05.73 (21) 1923313/28-13 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 15.02.75. Бюллетень № 6

Дата опубликования описания 18,03.75 (51) М. Кл. С 12d 13. 10

Государственный комитет

Совета Министров СССР (53) УДК 577.15.08 (088.8) А0 делам изобретений и открытий (72) Автор изобретения

M В. Яловицын

Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева (71) Заявитель (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛЕЦИТИНАЗНОГО:

ФЕРМЕНТНОГО КОМПЛЕКСА

Лецитиназная активность, мг % Р О, фракции (1, П, Ш)* буферных растворов а

Д,о ащ о с а

I П И

Ацетатный буферный раствор

0,095 0,01

1,26 0,07

1,56 0,09

1,58 0,07 0,54 0,10 б

10 7

0,16 0,04

0,19 0,05

0,85 0,10

Боратный буферный раствор

2,9 0,04

1,01 0,08

10,2 0,3

1,06 0,03

1,04 0,06

Фосфатный буферный раствор

11,4 0,02

4,18 +0,08

23,2 0,05

1,66 0,07

11,7 0,10

2,00 0,05

1,42 0,02

6,69 0,09

15,39 0,09

7,5

8,0

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к выделению ферментов, являющихся побочной продукцией биосинтеза бактерий Bacillius thuringiensis.

Известен способ выделения лецити назного ферментного комплекса путем фракционирования его сульфатом аммония, отделени я образующегося осадка и его промывки.

С целью упрощения выделения ферментного лецитиназ ного комплекса из культуральной жидкости Bacillius thuringiensis, являющейся отходом производства бактериальных инсектицидов, по предлагаемому способу перед фракционированием сульфатом аммония к культуральной жидкости при перемешивании добавляют 5%-ный раствор трихлоруксусной кислоты, выпадающие при этом в осадок белки отделяют, промывают и фракционируют сульфатом аммония в фосфатном буферном растворе при рН 7,5 — 8,0.

Пример. Культуры Baciillus thuringiensis 4 сертипа выращивают в течение 3 — 4 суток в объеме 200 мл мясо-пептонного бульона на колбочной качалке при ЗΠ— 35 С. Ми1кробные клетки отделяют от культуральной жидкости центрифугированием в течение

10 — 15 мин при 2 — 3 тыс. об/мин.

Белки культуральной жидкости осаждают на холоде 5%-ным раствором трихлоруксус В каждом случае берут навеску в 6 мг. Исходная активность культуры бактерий составляет 0,1 — 1,2 мг %

30 РяО .

460293

Предмет изобретения

Составитель Беляева

Техред О. Гуменюк

Редактор В, Блохина

Корректор О. Тюрина

Заказ 552/14 Изд. № 1078 Тираж 529 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 ной кислоты, который прибавляют небольшими порциями при перемешивании жидкости.

В зоне рН 4,0 — 3,5 появляются белые или слегка желтоватые хлопья белка, со временем выпадающие в осадок. Последний от надосадочной жидкости отделяют цвнтрифугированием и промывают дистиллированной водой. Промытый осадок фракционируют сульфатом аммони я из буферных растворов.

Осадок белков отделяют центрифугированием и промывают дистиллированной водой.

В таблице приведены результаты определения активности лецитиназных ферментных комплексов, выделенных фракционированием сульфатом аммония из различных буферных растворов.

Таким образом наибольшее количество лецитиназы концентрируется во II и Ш фракциях фосфатного буферного раствора, которые соответствуют 20 — 30 насыщению сульфатом аммония.

Выход лецитиназного фврмвнтного комплекса составляет 0,5 — 0,6 r на 1 л культуральной жидкости.

Способ выделения лецитиназного ферментного комплекса из культуральной жидкости, например, Bacillus thuringiensis путем фракционирования вго сульфатом аммония, отделения образующегося осадка и его промывки, отл.ичающийся тем, что, с целью упрощения выделения лецитиHàçIíîãо ферментного комплекса из культуральной жидкости, являющейся отходом производства бактериальных инсектицидов, перед фракционированием к культуральной жидкости при перемешивании добавляют 5 /о -ный раствор трихлоруксусной кислоты, полученный осадок

20 белков отделяют, промывают и фракционируют в фосфатном буфере при рН 7,5 — 8,0,