Штамм с1-продуцент -аспарагиназы
Патент 460748
Авторы
Классы МПК
Штамм с1-продуцент -аспарагиназы
Иллюстрации
Реферат
«.ч
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (ii) 46О748
Союз Советскл
Социалистических
Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 27.03.73 (21) 1898833/28-13 с присоединением ".аявки № (32) Приоритет
Опубликовано 15.08.75. Бюллетень № 30
Дата опубликования описания 28.10.75 (51) М. Кл. С 12d 13/10
С 12k 3/00
Государственный комитетСовета Министров СССР по селам изобретений и.открытий (53) УДК 577.15.08 (088.8) (72) Авторы изобретения
Е. И. Голуб, М. М. Гараев, H. Б. Романова, Г. И. Бурд и T. H. Большакова (71) Заявитель Всесоюзный научно-исследовательский институт антибиотиков (54) БПАММ ESCHERICHIA COLI CI — ПРОДУЦЕНТ
1;АСПАРАГИ НАЗЫ
Изобретение относится к медицинской и ферментной промышленности и направлено на получение активных штаммов — продуцентов
I -аспарагиназы.
Известны штаммы Escherichia coli CI-inpoдуценты 1 -аспарагиназы.
Ферментативная активность этих штаммов составляет около 2 международных единиц (МЕ) L-аспарагиназы на 1 мг сухого веществ а б а ктер ий.
Предлагаемый штамм отличается от известных морфологическими и физиологическими свойствами, обладает более высоким уровнем биосинтеза фермента и характеризуется повышенной устойчивостью ситеза 1 -аспарагиназы к наличию углеводов в питательной среде.
Штамм Е. coli CI образует в среднем 3,4—
4,0 МЕ/мг 1-аспарагиназы.
Штамм имеет следующую характеристику.
Морфология.
Палочки размером 1Х2 мкм, грамотрицательны.
Физиологические признаки.
Колонии, образуемые при культивировании в течение 18 час при 37 С: а) на 1,5%-ной мясо-пептонной агаризованной среде выпуклые, матовые, неправильной округлой формы с неоформленным центром; б) на агаризованной среде, содержащей кукурузный экстракт, колонии конусовидные, матовые, неправильной округлой формы в диаметре 2 мм; в) на агаризованной среде, содержащей в качестве источника углерода 2% глюкозы, ко5 лонии выпуклые, блестящие, неправильной округлой формы в диаметре 1 мм; г) на агаризованной среде, содержащей в качестве источника углерода 2% глицерина, колонии матовые, неправильной округлой форlo мы без ободка в диаметре 0,8 мм.
Штамм образует индол, дает отрицательную реакцию фогес-Проскауера.
Отношение к источнику углерода.
15 Усваивает глюкозу, фруктозу, галактозу, лактозу, арабинозу, мальтозу, глицерин. Не усваивает сахарозу, нитрат и маннит.
Факультативный аэроб. Оптимальная температура роста 37 — 42 С.
20 Пример использования данного штамма для получения L-аспарагиназы.
Культивирование в лабораторных условиях проводят в колбах емкостью 750 мл, содержащих 100 мл ферментационной среды, в тече25 ние 18 — 20 час на подвесной качалке, делающей 270 об/мин.
Ферментационная среда состоит из 4% (по сухому весу) кукурузного экстракта, содержащего меньше 0,2% углеводов, с добавкой 0,1%
30 сульфата аммония.
460748
Š— аспарагиназная активность
Данные лабораторных и полупроизводственных испытаний
Ме/мг
Ме/мл
2,2
3,6
2,1
4,0
11,0
19,0
9,0
19,0 исходный штамм штамм С! исходный штамм
Штамм CI
Составитель Л. Минеева
Техред 3. Тараненко
Корректор Л. Котова
Редактор Л. Василькова
Заказ 2587,3 Изд. № 1675 Тираж 529 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2
Засев производят из расчета 0,04 мг клеток (по сухому весу) на 1 мл питательной среды.
Культивирование в полупроизводственных условиях ведут в ферментерах емкостью 100 л на той же ферментационной среде.
В таблице показано сравнение L-аспарагиназной активности исходного штамма и штамма Cl.
В отличие от исходных штаммов предлагаемый штамм обладает большей активностью.
В отличие от всех других, описанных в литературе штаммов Е. coli, продуцентов 1-аспарагиназы, штамм CI имеет то преимущество, что является более устойчивым к репрессорному влиянию глюкозы на биосинтез 1-аспарагиназы.
Предмет изобретения
Штамм Escherichia coli CI-продуцент I -аспарагиназы.
Штамм хранится в музее культур ВНИИА за Хв 1527.
Морфология.
5 Палочки размером 1 2 мкм, грамотрицательны.
Физиологические признаки.
Колонии, образуемые при культивировании в течение 18 час при 37 С:
10 а) на 1,5% -ной мясо-пептонной агаризованной среде выпуклые, матовые, неправильной округлой формы с неоформленным центром; б) на агаризованной среде, содержащей кукурузный экстракт, колонии конусовидные, 15 матовые, неправильной округлой формы в диаметре 2 мм; в) на агаризованной среде, содержащей в качестве источника углерода 2 глюкозы, колонии выпуклые, блестящие, неправильной
20 округлой формы в диаметре 1 мм;
r) на агаризованной среде, содержащей в качестве источника углерода 2% глицерина, колонии матовые, неправильной округлой формы без ободка в диаметре 0,8 мм.
Штамм образует индол, дает отрицательную реакцию фогес-Проскауера.
Отношение к источнику углерода.
Усваивает глюкозу, фруктозу, галактозу, 30 лактозу, арабинозу, мальтозу, глицерин. Не усваивает сахарозу, цитрат и маннит.
Факультативный аэроб. Оптимальная температура роста 37 — 42 С.