Способ получения полинуклеотидов
Иллюстрации
Показать всеРеферат
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ »1 46!927
Союз Советских
Социалистических
Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 26.07.73 (21) 1954540!23-4 с присоединением заявки № (32) Приоритет
Опубликовано 28.02.75. Бюллетень ¹ 8
Дата опубликования описания 26.09.75 (51) М. Кл. С 070 51/50
Гасударственный комитет
Совета Министров СССР ло делам изобретений и открытий (53) УДК 547.963.32 (088.8) (72) Лвторы изобретения У. Я. Микстайс и И. P. Чаксте (71) Заявитель Латвийский филиал Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института химических реактивов и особо чистых химических веществ (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИНУКЛЕОТИДОВ
О ц
INR, На — F — ОН С
ОН
0 4С 0 В
С1
Но т
Ho — Р=О!
ОН,C 0 В
Изобретение усовершенствует спосоо получения полинуклеотидов.
Известен способ получения полинуклеотидов путем химической полимеризации нуклеозидфосфатов в присутствии различных активирующих агентов, например дициклогексилкарбодиимида.
С целью обеспечения высокой полимеризационной способности и упрощения процесса предложено в качестве производных нуклеозидфосфатов использовать хлорапгидриды нуклеозидмоносфорных кислот и полимериза5 цию проводить преимущественно в присутствии оснований, например третичных аминов.
Согласно настоящему изобретению способ осуществляют по следующей схеме:
Ho — p=o
OHMIC 0 В
НО
461927
NRg в(С2нб)Ь1 ) / \
НCN О
Предмет изобретения
Составитель Е. Соколова
Техред О. Гуменюк
Редактор E. Дайн
Корректоры: Л. Денискииа и И. Позняковская
Заказ 2086/4 Изд. М 1250 Тираж 530 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, К-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 где Х обозначает хлор, водород;
Y — водород, оксигруппа;
 — гетероциклическое основание;
N — метилморфолин.
В качестве исходных веществ можно использовать как моно-, так и дихлорангидриды нуклеозидмонофосфорных кислот.
Преимущество применения хлорангидридов и в том, что они лучше растворяются в органических растворителях. В отличие от известных способов при проведении процесса с дихлорангидридами реакция не слишком чувствительна к небольшим количествам воды, так как при взаимодействии дихлорангидрида с молярным количеством воды образуется также реакционноспособный монохлорангидрид.
Третичные амины являются акцепторами выделяющегося хлористого водорода и активаторами хлора в хлорангидридах, они не вызывают побочных реакций.
Пример 1. 4,01 г (10 мм) дихлорангидрида гуанозин-5 -монофосфорной кислоты, полученного при хлорфосфорилиравании гуанозина, растворяют в 18 мл триметилфосфата. К раствору добавляют 0,018 мл (10 мм) воды и смесь перемешивают 3 час при комнатной температуре. К раствору монохлорангидрида гуанозин-5 -монофосфорной кислоты при комнатной температуре добавляют 0,5 мл триэтиламина. Через час смесь обрабатывают
50 мл эфира. Осадок растворяют в 20 мл воды и переосаждают 200 мл спирта.
Продукт исследован методами бумажной и ионообменной хроматографий и электрофореза на бумаге. Анализ данных показывает наличие полинуклеотидов различной степени полимеризации. Наличие фосфодиэфирных связей доказано также методом электрометрического титрования.
Прим ер 2. 3,62 г (10 мм) дихлорангидрида уридин-5 -монофосфорной кислоты, полученного при фосфорилировании уридина, рас5
35 творяют в 15 мл триметилфосфата, раствор охлаждают до 5 С и при этой температуре добавляют 0,5 мл пиридина, оставляют час при комнатной температуре. Смесь обрабатывают 100 мл эфира, осадок растворяют в
15 мл воды, добавляют 1 мл 2 и, раствора гидроокиси натрия и переосаждают 300 мл спирта.
Продукт исследуют, как описано в примере 1. Анализ данных показывает наличие полинуклеотидов различной степени полимеризации.
Пример 3. 3,85 r (10 мм) дихлорангидрида дезоксигуанозин-5 -монофосфорной кислоты, полученной при фосфорилировании дезоксигуанозина, растворяют в 11 мл триметилфосфата, раствор охлаждают до 10 С и прн этой температуре добавляют 0,5 мл триэтиламина. Через час смесь обрабатывают 100 мл эфира. Осадок растворяют в 10 мл воды и переосаждают 300 мл спирта.
Продукт исследован, как описано в примере 1. Анализ данных показывает наличие полинуклеотидов различной степени полимеризации.
Пример 4. 3,67 г (10 мм) монохлорангидрида дезоксигуанозин-5 -монофосфорной кислоты растворяют в 11 мл триметилфосфата, раствор охлаждают до 10 С мл эфира. Осадок растворяют в 10 мл воды и обрабатывают 100 мл эфира. Осадок растворяют в 10 мл воды и переосаждают 300 мл спирта.
Продукт исследован как описано в примере
1. Анализ данных показывает наличие полинуклеотидов различной степени полимеризации.
1. Способ получения полинуклеотидов путем химической полимеризации производных нуклеозидфосфатов, отличающийся тем, что, с целью обеспечения высокой полимеризационной способности и упрощения процесса, в качестве производных пуклеозидфосфатов применяют хлорангидриды нуклеозидмонофосфорных кислот.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что полимеризацию проводят в присутствии оснований, например третичных аминов.