Способ получения меченых тритием нуклеозид-5-триофосфатов
Патент 462467
Авторы
Способ получения меченых тритием нуклеозид-5-триофосфатов
Иллюстрации
Реферат
(1
1
1 .ю.=Ф
Союз Советских
Социалистимеских
Республик
О П И С А Н И Е () 462467
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено13.07 73 (21)1949384/23-4 с присоединением заявки № (23) Приоритет (51) М. Кл.е
С 07 Н 19/00
С 07 В 23/00
Гасудврствениый намитет
Саввтв ееииистрав СССР па делам изааретеиий и открытий (43) Опубликовано25.10.76.Бюллетень №39 (53) УДК 547.857. .7.07 (088.8) (45) Дата опубликования описания 15.02.77 (72) Авторы изобретения О.В. Лавров, Н.С. Марченков, К.С. Михайлов и Н.Ф. Мясоедов (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМ
НУКЛЕОЗИД-5 -ТРИФОСФ АТОВ
Изобретение относится к области получения меченных тритием препаратов биологического назначения. Эти соединения находят широкое применение в молекулярной биологии. 5
Ключевой стадией при синтезе этих соединений является введение меченного ато— ма (трития) в нуклеозид-5 -монофосфаты.
Известен способ получения меченных тритием нуклеозид-5 -трифосфатов обработкой 1О соответствующего бромпроизводного нуклеозид-5 -монофосфата газообразным тритием в условиях высокочастотного электри— ческого разряда. Выделенный меченный триI тием нуклеозид-5 -монофосфат далее биохи 15 мически фосфорилируется до соответствую1 щего нуклеозид — 5 -трифосфата одновременно с радиохимической очисткой.
Однако известный способ сопровождается сильной деструкцией маркируемого соедя— нения, что снижает удельную активность и чистоту целевого продукта и требует применения специальной аппаратуры и высокопроцентного трития. 25
Цель изобретения — повышение удельной активности и радиохимической чистоты целевого продукта.
Для этого обработку бромпроизводного
1 нуклеозид-5 -монофосфата тритием проводят при 50-150оС с промежуточным выделением меченного тритием нуклеотида и его последующим ферментативным фосфорилирова— нием, совмещенным с радиохимической очисткой.
Достоинством способа также является возможность получения препарата заданной удельной активности регулировкой концентрации трития в газовой смеси.
Образующиеся побочно меченные тритием нуклеозиды могут быть превращены в целевой продукт трифосфорилированием либо использованы по иному назначению.
I
Пример 42- мг 5-бромцитидин-5—
-монофосфата адсорбируют на 350 мг палладиевого катализатора (10О/о палладия на активированном угле "Норит"). Обработку газообразным тритием проводят при 100оС
Продолжительность реакции в атмосфере
50О/о-ного трития 2 час. По окончании ре462467
А„= 29Д
Составитель И, Обручников
Редактор А. Купрякова Техред Г. Родак Корректор Н абурка
Заказ 5442/171 Тираж 575 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 акции продукты десорбируют с катализатора
100 мл 1Ж -ного водного пиридина и лабильный тритий замещают на водород путем трехкратного изотопного уравновешивания с водой. Сухой остаток после отгонки последней порции воды растворяют в 15 мл дистиллированной воды и нанОсят на колонну, содержащую дауэкс lх8 в формиатной форме (1,2õ20,0 см). Колонну промывают
150 мл дистиллированной воды, при этом выходит четкий пик цитидина-5(Т). Затем при элюации 150 мл 0,25 н,муравьиной
У кислоты выходит четкий пик цитидин-5—
-монофосфата-5(Т). Далее выделяют 57
-бром — цитидин-5 -монофосфат-Т(6 ), используя для элюации 2, 2 н. муравьинуюкислоту. Битидин-5(Т) концентрируют в ваку уме при 37 С. Цитидин-5-монофосфат-5(Т) о концентрируют с помощью активированного
У"лЯ В опыте получают 31тс цитидина- Э« кю и
-5 (Т) с удельной активностью 7,4 l4 Mohb
113 tnc цитидин-5 -монофос ата — 5(Т) с удельной активностью 5,86 ллл„ ль и юРи !
9 m с 5-бром — цитидин-5 -монофосфатаКЮРИ
-Т(«) с удельной активностью 0,2ммолЬ в
Полученный препарат цитидин-5 -монофосфата-5(Т) фосфорилируют, используя
1,0 мл стандартного ферментного раствора, до цитидин-5 -трифосфата-5(Т). Продукты ц) фосфорилирования разделяют ионообменной хроматографией на колонке (3,0х30 см) с
ДЭАЭ вЂ” целлюлозой А-25 в бикарбонатной форме. Для элюации применяют линейный градиент триэтиламмонийбикарбонатного бу- Q фера рН 8,6 (0,1-0,6 м). Соответствующие фракции собирают, обессоливают при помощи сефадекса КМ-25 в Н -форме и
+ концентрируют в вакууме. Получают 86т««с цитидин-5 -трифосфата-5(Т) с удельной ак,- фО тивностью 4,12 . Теоретически, по кюри м моль
4 формуле, удельная активность препарата должна составить 4,7
Кюри ммоль
Т т+ Н+ «ОЪ1
Мп Ст
2. 100 где А ул — теоретически достигаемая удельная активность маркируемого соединения в данных экспериментальных услови ях, кюри/ммо ть;
7 — количество трития в исходном газе, ммоль;
Я вЂ” количество водорода в исходном газе, ммоль;
М вЂ” исходное количество 5-бром« цитидин-5 -монофосфата, ммоль; п=4 — число атомов водорода в лабильных положениях молекулы 5-бромцити дин-5 -монофосфата; (— количество катализатора, мг.
Полученный препарат цитидин-5 -трифос» фата-5(Т) хроматографически однороден и радиохимически чист.
Формула изобретения
Способ получения меченных тритием нук 1 леозид-5 -трифосфатов обработкой адсорби рованного на палладиевом катализаторе соответствующего бромпроизводного нуклео7 зид-5 -монофосфата газообразным тритием, выделением меченного тритием нуклеозид-5 -монофосфата и его биохимическим фос» форилированием, совмещенным с радиохими ческой очисткой, отличающийся тем, что, с целью повышения удельной активности и радиохимической чистоты целевого продукта, обработку бромпроизводного
« нуклеозид-5 -монофосфата тритием проводят при 50-150оС.