Способ получения водонерастворимого препарата нуклеиновой кислоты

Способ получения водонерастворимого препарата нуклеиновой кислоты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

пп 462 824

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 27.04.73 (21) 1917904/23-4 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 05.03.75. Бюллетень № 9

Дата опубликования описания 18.08.75 (51) М. Кл. С 07с1 51/50

Государственный комитет

Совета Министров СССР пв делам изобретений (53) УДК 547.963.32 (088.8) и открытий (72) Авторы изобретения

Б. М. Куриненко и Ф. Ф. Шаги-Мухаметова (71) Заявитель Казанский государственный университет им. В. И. Ульянова-Ленина (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОНЕРАСТВОРИМОГ

ПРЕПАРАТА НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ

ЦПТБ фа@ ЯЯ,-131 Я

Изобретение относится к усо вершенствованному способу получения водонерастворимого препарата нуклеиновой кислоты.

Известен способ получения водонерастворимого препарата нуклеиновой кислоты путем связывания ее с предварительно активированным гидрофильным носителем, например с полисахаридом, активированным цианбромидом или карбодиимидом.

Однако известный способ пригоден только для связывания денатурированной нуклеиновой кислоты.

С целью по вышения содержания нативной

ДНК предложено активировать носитель цианурхлоридом.

Получение водонерастворимого препарата нуклеиновой кислоты включает стадии активации носителя и связывания нуклеиновой кислоты с активированным носителем.

В качестве нерастворимого носителя обычно используют сефадекс 6-75. К отмытому последовательно холодной дистиллированной водой и 0,1 М боратным буфером сефадексу G-75 добавляют цианурхлорид В ацетоне. Активацию проводят в течение 30 мин на холоду, стабилизируя рН. добавлением 4 н. раствора едкого натра.

Активированный сефадекс промывают раствором ацетона, дистиллированной водой и обратным буфером, после чего приливают к нему раствор нативной ДНК. Стадию связывания нуклеиновой кислоты проводят при тщательном перемешивании. Для удаления непрореагиро вавших высокореактивных хло5 ридных групп цианурхлорида, полученные препараты промывают 1 М аммиачным буфером и хранят при 4 С.

Содержание нуклеиновой кислоты в полученных препаратах 50 — 70%.

Пример. 300 мг сефадекса G-75 мешируют дистиллированной водой, оставляют на ночь для набухания, промывают 0,1 М боратным буфером (рН 9,6) и добавляют 200 мг

15 цианурхлорида в 5 мл ацетона. Затем сразу же прикапывают 4 н. раствор едкого натра до стабилизации рН 11. Активацию проводят в течение 30 мин при 10 С.

Активированный сефадекс отмывают ацето20 ном, дистиллированной водой, 0,1 М боратным буфером и добавляют 5 мл раствора нативной тимусной ДНК (2 мг/мл), выделенной по методу Бенинга с последующей очисткой по

Мармуру. Далее смесь при тщательном пере25 мешивании выдерживают 16 час при 37 С.

Полученные препараты промывают последовательно 100 мл 1 М аммиачного буфера и

1000 — 1500 мл дистиллированной воды.

Обычно содержание нуклеино вой кислоты

gp в полученных препаратах составляет 50 — 70/о.

462S24

Предмет изобретения

Составитель Е. Соколова

Техред Е. Борисова Корректор И. Позняковская

Редактор 3. Горбунова

Заказ 1965/16 Изд. № 481 Тираж 529 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сап нова, 2

Способ получения водонерастворимого препарата нуклеиновой кислоты путем связывания ее с предварительно активированным ги4 дрофильным носителем, отличающийся тем, что, с целью по вьннения содержания нативной ДНК, носитель активируют цианурхлоридом.