Способ получения рифамицина в

Способ получения рифамицина в

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(ii) 464l28

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

Союэ Советских

Сойивлистичесних

Рееву лик (61) Зависимый от патента (51) М, Кл. С 12d 9/14 (22) Заявлено 01.11.73 (21) 1967383/31-16 (32) Приоритет 29.11.72 (31) 32248-А/72 (33) Италия

Опубликовано 15.03.75. Бюллетень № 10

Дата опубликования описания 16.07.75

Госудврст веннь;й комитет

Совета Министров СССР по делом изьоретвннй и открытий (53) УДК 615.779.931 (088.8) (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Кармине Ренато Паскуалуччи и Джузеппе зукко (Италия) Иностранная фирма

«Аркифар Индустри Кемике дель Трентино С.п.А.» (Италия) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РИФАМИЦИНА В

20

1

3,0

50 мг

4 мг

10 мг

2 мг

1 мг

До 1000 мл

1

Изобретение относится к области медицины.

Известен способ получения рифамицина В путем выращивания Streptomyces albovinaceous АТСС 12951 в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, и последующего выделения целевого продукта.

Для повышения выхода целевого продукта по предлагаемому способу в качестве продуцента используют штамм Streptomyces G5/À, Способ получения рифамицина В осуществляют следующим образом.

П ример 1. Культуру Streptomyces G5/А инокулируют в колбе Эрленмейера на 500 мл, содержащей 100 мл следующей среды, r:

Мясной экстракт 5

Дрожжевой экстракт 5

Пептон 5

Гидролизат казеина 3

Глюкоза 20

Хлористый натрий 15

Дистиллированная вода До 1000 мл рн 7,3

После 48 ч роста на встряхивателе при

28 С, 10 об. % продукта вегетативного роста переносят в 500 мл колбу Эрленмейера, оборудованную перегонкой и содержащей 100 мл следующей среды, r:

Глюкоза

Соевая мука

Мука земляных орехов

Сульфат аммония

КНгРО4

СаСОЗ

MgSO4 ° 7НгО

CuSO4 5НгО

ZnSO4 7НгО

10 Мп S04 ° 4НгО

FeSO4 7НгО

СаС1г. 6НгО

Молибдат аммония

Дисгиллировачная вода рН (доведено буферными растворами) 7

Инокулированные колбы инкубируют при

28 С на вращающемся встряхивателе при

250 об/мин с ходом на 5 см в течение 148—

20 156 ч. Выход рефамицина В составляет

4000 — 4500 мкг/мл.

П р и м ер 2. Микроорганизм Str., G 5/А выращивают при тех же условиях, что и в примере 1 для вегетативной фазы. В конеч25 ной фазе используют следующую ферментационную среду, r:

Мука земляных орехов 25

Соевая мука 10

Глюкоза 100,5

30 Пропиленгликоль 5

464128

9,5

4,9

0,85

0,001

0,004

0,002

0,05

0,01

До 1000 мл

Составитель С. Малютина

Редактор Л. Василькова Техред М. Семенов Корректор Л. Денисова

Заказ 1974/12 Изд. ¹ 1249 Тираж 529 Подписное

ЦНИР1ПР1 l осударстненното комитета Совета Министров СССР по дел.; нзооретеннй и открытий москва, )К-35, Раун скан наб., д. 4/5

Тннонра нл, нр. L,ап1 )loBB, 2

Глицерин

Тяжелый СаСОз (NH4) з504

КН РО4

Мд504 7Н20

Молибдат алюминия

Мп$04 ° 4Н О

СоС1 . 6НзО

7п$04 7Н О

FeSO4 7НзО

Вода

1 рН доводится буферами (6,6 — 6,7 после стерилизации).

Ферментацию проводят как и в примере 1.

Максимальный выход рифамицина В достигает 5400 мгк/мл. При хроматографическом анализе не обнаружено заметного количества продуктов, являющихся аналогами рифамицина.

Пример 3. Микроорганизмы Str., G 5/А выращивают в тех же условиях, что и в примере 1, но с использованием колб на 2000 мл, содержащих 500 мл среды. Через 48 ч используют три колбы для инокулирования

90 л той же среды в ферментаторе из нержавеющей стали. Вегетативный рост имеет место при перемешивании 500 об/мин и аэрации (объем в мин) при 28 C.

После 36 ч рост мицелий (по объему) достигает 7 /о, эту вторую вегетативную фазу используют для инокулирования ферментатора на 130 л, содержащего 900 л ферментационной среды.

Рост организмов наблюдают при 28 С при перемешивании и аэрации.

Через 150 ч ферментации спектрофотометрический титр составляет 5200/5500 мл. Хро5 матографический анализ показывает присутствие рифамицина В.

Общая характеристика культуры.

Споры и воздушный мицелий отсутствуют.

Вегетативный мицелий — от темно-коричне10 вого до светло-коричневого с оттенками оранжевого, темно-оранжевого цвета. Растворимые пигменты от темно-светло-коричневого до желтого с зеленым оттенком.

Для определения биохимических характе15 ристик используют следующие среды. Агаризованный яблочно-кислый Са — слабое переваривание. Агаризованный тирозин не гидролизуется. Желатин — без разжижения, без пигментации. Лакумусовое молоко — пептониза20 ция или коагуляция отсутствуют, Среда 6 по Шилингу и Готлибу (индикатор на базе ацетата свинца) — образование без пигментации. Дектрин и крахмал гидролизуются.

Предмет изобретения

Способ получения рифамицина В путем выращивания культуры — продуцента рода

Streptomyces в аэробных условиях на среде, 30 содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, и последующего выделения целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве продуцента используют

35 штамм Streptomyces G 5/А.