Способ количественного определения днк-содержащих вирусов плесневых грибов

Способ количественного определения днк-содержащих вирусов плесневых грибов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е (ii) 465)GO

ИЗОБРЕТЕН Ия

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Сооиалистнческих

P8t !l/ниик (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 23.07.73 (21) 1972313/31-16 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 15,08.75. Бюллетень № 30

Дата опубликования описания 28.10.75 (51) М. Кл. С 121< 1/CO

Государственный комитет

Совета министров СССР .r)a делам изооретений и открытий (53) УДК 576.858(088.8) (72) Авторы изобретения

Г. А. Великодворская, А. Ф. Бобкова, Ю. Э. Бартошевич, Э. С. Лебедь и Т. И. Тихоненко

Всесоюзный научно-исследовательский институт антибиотиков и Институт вирусологии им. Д. И. Ивановского (71) Заявители (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТСОДЕРЖАЩИХ

ВИРУСОВ ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ

Лактоза

Глюкоза

МН41ЧОз

1,5

2,0

0,7 (штаммы № 39 и 91)

0,2

0,025

0,1

0,05

КНзРО4

XgSO„

1 аз8зОз

NaqSO4

10,Г(олученная культуральная жидкость имеет рН 6,8.

Для засева посевной среды используют споровый материал штамма, хранящегося на

15 пшене. Посевной материал через 48 час ферментации в количестве 20 переносят в колбы

Эрленмейера с 40 мл ферментационной среды следующего состава, вес. %.

Кукурузный экстракт

Лактоза

Глюкоза

MgSO4

КН4КОз

25

Маз304

КНзРО4

Мел технический

Хаз$зОз

Изобретение относится к области медицины.

В известной патентной и специальной литературе способы количественного определения дезоксирибонуклеиновых кисл отсодержащих вирусов плесневых грибов не описаны.

Сущность предложенного способа определения дезоксирибонуклеиновых кислотсодержащих вирусов плесневых грибов заключается в том, что вирусы титруют на бактериальных культурах.

ll р и м е р 1. Штамм 39. Высокоактивный продуцент пенициллина. Ь стойчив к повышенному содержанию Nki4NOq в среде (0,7 )о в посевной среде и 1,1% в ферментационной).

На 12 сутки роста на среде Райстрика при

24 С оливково-зеленые колонии, умеренно растущие, порошистые, хорошо спорулирующие, радиально складчатые с приподнятым кратерообразным центром, окрашенным несколько светлее. Растущий край белый, Диаметр колонии 27 — 28 мм.

Для получения культуральной жидкости и мицелия штамма № 39 предварительно в гечение 48 час выращивают посевной материал в колбах Эрленмейера, содержащих 100 мл среды следующего состава, вес. :

Мел технический 0,3

Курурузный экстракт 4,0

5,0

6,5

1,5

0,025

1,1 (штаммы № 39 и 91)

0,05

0,5

1,0

0,3

465100

Предмет изобретения

Состагптсль С. Малютина

Редактор T. Загребельная Текред 3. Тараненко

Корректор Л, Котова

Тираж 5" 9 Подписи:е

Lll Hll Ïl1 Гссударсгвенпого комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

ll3035, Москва, )К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Полученная культуральная кидкость имеет

pEI 6,2 — 6,3.

Для предупреждения вспенивания в ферментационную среду вносят кашалотовый жир (2,5% в каждую колбу). Ферментацию ведут на круговой качалке при 24 С.

Продолжительность ферментации 2 суток для выделения вирусов и б суток для определения антибиотической активности.

В процессе ферментации дробно дооавляют предшественник пенициллина — фенилаце-;амид. (Добавление четырехкратное в количестве 0,05% при передаче посевного материала и по 0,1% в последующие 3 суток ферментации, всего 0,35%, ферментация 6 суток).

При двухсуточной ферментации дчя выделения вирусог, фепилацетамид подают в количестве 0,05% при передаче посевного материала и 0,1% на первые сутки ферментации.

Ежесуточно контролируют стерильность посевных и ферментационных колб.

Определяют антибиотическую активность методом спектрофотометрии или иодометрии.

Мицелий в количестве 10 г сырого веса отмывают 0,1 М NBC1 на 0,05 М фосфатном буфере, рН 7,0, и разрушают на ультразвуковом диспергаторе в течение 2 мин при охлаждении, не допуская повышения температуры выше

30 С. Затем препараты разрушенного мицелия встряхивают с хлороформом в соотношении

1: 1 в течение 5 мин, центрифугируют в течение 30 мин и титруют, добавляя экстракт мицелия в количестве 0,3 — 0,5 мл в пробирку с 0,8%-ным агаром Хоттингера, в которой в качестве индикаторной культуры содержится

Escherichea coli «С» в количестве 0,2 мл в логарифмической фазе роста, эту смесь при

39 — -40 С выливают на чашку Петри с 15%ным агаром Хоттингера и равномерно распредел яют п о всей поверхности.

Через 5 час проводят подсчет негативных

5 колоний и определяют количество вирусных частиц на 1 г сырого веса мицелия.

Инфекционная активность препаратов, полученных из мицелия Penicillium chrysogeпшп — штамм ¹ 39, в отношении Escherilhea

;0 coli «С» составляет в среднем величину, рави гю 42 104.

Антибиотическая активность штамма составляет в среднем 10000 ед/мл.

Пример 2. Штамм № 91 устойчив к позы;5 шенной температуре 28 С.

На 12 сутки роста на среде Райстрика при температуре 24 C колонии светло-зеленые, быстрорастущие, с белым слегка приподнятым очень пушистым центром, с сильной радиаль20 ной складчатостью, с белым паутинистым краем. Обратная сторона колонии темно-бурая.

Диаметр колонии 34 — 36 мм.

Культуральну1о жидкость и экстракты мицелия получают аналогично примеру 1. Ин25 фекционность препаратов, полученных из мицелия Penicillium chrysogerlum — штамм № 91, в отношении Eseherichea coli «С» практически ие обнаруживается. Лнтибиотическая активность шггмма составляет 1000 ед/мл.

Способ количественного определения дезоксирибонуклеиновых кислотсодержащих виру35 сов плесневых грибов, отличающийся тем, гго вирусы титруют на оактериальпых культурах.