Способ получения препарата орнитозного гемагглютинина

Способ получения препарата орнитозного гемагглютинина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советск-.х

Социалксткмескмх

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт, свидетельства— (22) Заявлено 26.03.73 (21) 1896443/31-16 с присоединением заявки ¹â€” (51) М.Кл. С 12k 7/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (32) Приоритет—

Огл бликовано 30.03.75, (53) УДК 612.118.221. .2(088.8) Дата опубликования описания 20.10.75 (72) Авпор изобретения

Л. А. Вишнякова

Ленинградский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера (7l) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ОРНИТОЗНОГО

ГЕМАГГЛ ЮТИ Н И HA

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для диагностики заболеваний группы пситтакоза-венерической лимфогранулсмы-трахомы.

Известен способ получения препарата орнитозного гсмагглютинина путем заражения куриных эмбрионов возбудителем орннтоза, отсасывания аллантоисной жидкости и ее двукратной обработки в течение 1 часа при

37 С Р-пропиолактеном в разведении 1: 2000.

С целью повьпнения активности и стабиль. ности препарата аллантоисную жидкость охлажда|от до 0 С, обрабатывают р-пропиолактоном в соотношении 1: 3000 — 1: 4000 к ее обьему и выдерживают в течение 1 — 5 суток при температуре от — 20 до +4 Ñ.

Пример 1. Заражают 8 — 9-дневные развивающиеся куриные эмбрионы (КЗ) в аллантоисную полость желточным мешком

КЭ, инфицированным возбудителем орнитоза или пситтакоза, в разведении 1: 100. Через 5 дней инкубации при 37 С куриные эмбрионы помещают на 12 час в рефрижератор при 4 С, паралслльно де.па(от посев для контроля на наличие посторонней бактериальной флоры.

Чсрсз 48 час пробирки со стерильной аллантоисной жидкостью центрифугируют при

3000 об,. мин в течение 15 мин с целью удаления клеточных элементов и слизи. Лллантоисную жидкость сливают, измеряют ее общее

2 количество (объем) и охлаждают в тающем льде до 0 С.

Разведение $-пропиолактона делают на

0,01 М фосфатном буферном растворе с 0,85"0

МаС1 рИ вЂ” 7,0, также охлажденном до 0 С, в соотношении 1: 100, который добавляют к обьему обрабатываемой охлажденной жидкости в соотношении 1: 20 — 1: 30 так, чтобы конечная концентрация Р-пропиолактона доio стигала соотношения 1:2000 — 1:3000. После тщательного смешивания в течение 3 — 5 мнн в та ощем льде сосуд с аллантоисной жидкостью помещают в комнатный рефрижератор, поддерживающий температуру в пределах 2-4 С, на 3 — 5 дней. Затем препарат подвергают лиофIfльиой сушке или хранят прн — 20 С.

Пример 2. Способ получения и обработки аллантоисной жидкости отличается тем, что общий слив ее цснтрифугируют прн

20 10000 — 13000 об/мин в течение 1 — 1,5 1ас при 0 С в центрифуге ЦЛР-1.

1-1адосадочный слой, содержащий все исходное количество гемагглютинина и 10з 4воз 5 будитсля орнитоза, в отличие от 10 LD:o в целой аллантоисной жидкости также измеряют, охлаждают до 0 С в тающем льде и обрабатывают Р-пропиолактоном в соотношении

1: 3000 -- 1: 4000 (конечное разведение), вы3J держивают сугки при 4 С или 72 час при

465423

Составитель С. Малютина

Техред 3. Тараненко!

- едактор Е. Дайч

Корректор О. Тюрина

Заказ 4362 Изд. М 1325

ЦНИИПИ Государственного комитета по делам изобретений

Москва, +-35, Рву искал

МОТ, Загорский филиал

3 — 20 С, подвергают лиофильной сушкс и хранят при — 20 С.

Осажденный возбудитель может быть использован для приготовления различных вирусных препаратов (антигенов, аллергена, вакцин).

Все пробы контролируются на наличие живого возубдителя путем внутрицеребрального введения 0,03 мл препаратов белым мышам 5--7 гр. с последующим через 7 дней слепым пассажем, Срок наблюдения за животными 14 дней. По отсутствию гибели животных и возбудителя в мазках-отпечатках судят о стерильности препаратов.

Титр гемагглютинина в препаратах (послс обработки Р-пропиолактоном и лиофильной сушки) снижался по сравнению с исходной

4 концентрацией его в 2 — 4 раза. Гемагглюти. пирующая активность лиофилизированных препаратов не изменилась в течение года.

5 Предмет изобретения

Способ получения препарата орнитозного гсмагглютинина путем заражения куриных эмбрионов возбудителем орнитоза, отсасыва1О ния аллантоисной жидкости, обработки ее

Р-пропиолактоном и лиофилизации, отлича ои(ийся тем, что, с целью повышения активности и стабильности препарата, аллантоисну1о жидкость охлаждают до 0 С, обрабатывают

15 р-пропиолактоном в соотношении 1: 3000—

1: 4000 к ее объему и выдерживают в течение

1 — 5 суток при температуре от — 20 до +4 C.

Тираж 529 11одписное

Совета Министров СССР и открьпий иаб., д. 4/5