Способ получения протеолитических ферментов

Способ получения протеолитических ферментов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Воеоок знаи матен .:о-- >х : -"- @

О П И С Аа"-И"И -"Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ (н1 467 ) ОЗ

С:1оз Советских

Социалистических

Реепублик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 22.02.73 (21) 1885433/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 15.04.75. Бюллетень № 14

Дата опубликования описания 31.07.75 (51) М. Кл. С 12d 13/10

Государственный комитет

Совета Министров СССР ло делам изобретений и открытий (53) УДК 576.15.08 (088.8) (72) Авторы изобретения

А. Ф. Гончаров, В. В. Хилимон и М. А. Гончарова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ

ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к технологии получения кормовых протеаз и может быть использовано в сельском хозяйстве.

Известен способ получения протеолитических ферментов путем культивирования микроорганизмов, относящихся к роду Bacillus, на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, с последующим выделением ферментов из культуральной жидкости.

С целью увеличения активности продуцируемых ферментов по предлагаемому способу из микроорганизмов, относящихся к роду Bacillus используют вид idosus.

Из вида Вас. idosus используют штамм

1002.

Кормовые протеазы этого штамма образуются без выделения сероводорода и аммиака.

Наращивание микробной массы штамма

Вас. idosus ¹ 1002 позволяет накапливать в жидких средах экзопротеазы с протеолитической активностью (ПА) 10000 — 12000 ед/л, а клеточная масса и ее экстракты за счет эндопротеоз увеличивают ПА более чем в 20 раз (Il0 методу водно-спиртового титрования).

ПА всей культуральной мыссы имеет прямую зависимость от количественного накопления микроорганизмов-продуцентов в среде.

Пример. Посевной материал продуцента выращивают на рыбном бульоне, на МПБ, на бульонах из отходов рыбной и мясной промышленности, на мясо-костном бульоне, на бульоне Хоттингера с суслом, на бульонах (отварах) из трупов животных, на растительных (сенных) отварах, на производственных

5 средах Намура.

Производственное наращивание культуральной массы налажено в условиях хозяйства на бульонах из трупов животных.

Можно использовать все трупы животных

10 со снятой кожей и удаленным желудочно-кишечным трактом. В зимний период трупы замораживают и используют по мере надобности.

Трупы в разрубленном виде погружают в

15 специальный котел с герметичной крышкой и манометром. Трупную массу заливают водой (1: 2 или 1: 3) и варят под давлением 0,5 атм в течение 5 — б ч.

При таком режиме трупы не только надеж20 но обезвреживаются от патогенных микроорганизмов, но и хорошо развариваются, а кости легко отделяются.

Всю бульонную массу вместе с остатками мышечных волокон в горячем виде перелива25 ют в специальные котлы, например молочные танки емкостью 0,5 т. В 3TII танки заливают (или лучше перекачивают) горячий (не ниже

80 С) бульон в количестве 100 — 300 л.

Крышку герметично закрывают, а трубку в

30 ней — стерильной ватной пробкой. Бульон ос467103

Предмет изобретения

Составитель Л. Минеева

Техред 3. Тараненко Корректор И. Позняковская

Редактор В. Блохина

Заказ 1802/!4 Изд. ¹ 1880 Тираж 529 Подписное

Е НИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 тавляют для остывания на 3 — 7 ч до снижения температуры до 20 — 30 С. Посевную культуру штамма-продуцента в количестве 200—

250 г в возрасте 3 — 5 суток переливают в танк при соблюдении правил асептики.

В танке штамм инкубируют в течение 3 — 4 суток при оптимальной температуре, после чего через кран (снизу) отбирают пробу культуральной жидкости для проверки на ПА и дальнейшего использования культуральной жидкости в корм.

Дозы нативной культуры в корм животным определяют в соответствии с ПА культуральной жидкости.

В зимний период культуральну:о жидкость перед использованием можно подвергать трехкратному замораживанию — оттаиванию с целью разрушения микробных клеток н обогащения культуральной жидкости эндопротеазами, При смешивании кул туральной жидкости с кормами последние должны иметь температуру, не прев ы ш а ю щую 40 С.

Белки кормов животного и растительного происхождения подвергают воздействию экзои эндопротеаз микроба-продуцепта.

В процессе скармливания фермептированных кормов действие протеаз вырастает за счет последующего разрушения микробных клеток продуцента в желудочно-кишечном тракте животных.

Характеристика штамма.

М о р ф о л о г и я. Палочки тонкие, прямые

2 — 3 )(0,6 мкм, подвижные; споры овальные, толще диаметра материнской клетки, образуют утолщения, подобные вздутию, без строго определенного положения в клетке, хотя чаще эти вздутия образуются в центре.

Физиология и биохимические с в о и с т в а. Штамм хорошо растет на органических и синтетических средах.

На плотных средах образует суховатые колонии или сплошной налет в виде матовых наложений, плоских, с мелкими морщинами на поверхности возвышений.

На картофельной среде образует желтовато-белый, мелкоморщинистый, складчатый налет. Желатиновый столбик при посеве уколом разжижает в течение 1 — 1,5 суток.

Молоко свертывает и быстро пептонизирует, а на поверхности образует толстоватую морщинистую пленку, края которой вползают на стенку пробирки.

На мясо-пептонном бульоне (МПБ) образует серую пленку в складках. Муть на бульоне отмечается в первые сутки инкубации.

На дпе пробирки в осадке преобладают одиночные палочки.

Отношение к источнику углер од а: разлагает крахмал, образует кислоту на средах с глюкозой, сахарозой и мальтозой.

Отношение к источникам азота: усваивает белок соединительной ткани, коллаген, миозин и промежуточное вещество.

Коагулированную кровяную сыворотку животных при 56 — 60 С разжижает на вторые сутки. Сероводорода, аммиака и индола не образует. Нитраты восстанавливает.

Лучший рост штамма наблюдается на рыбном бульоне, а затем на МПБ и на бульонах из отходов рыбной и мясной промышленности, а такгке на бульоне Хотингера с суслом, на бульоне с желатиной в количестве от 5 до

15/p, на бульоне с лактозой, дрожжевой среде с кашалотовым жиром, <а растительных отварах, включая сенной отвар и сок растений, кормовых, луговых трав, сок сенажа и силосуемой массы, на производственной среде

Намура и некоторых ее модификациях.

На этих средах при оптимальной температуре и рН в теченпе 1 — 3 суток продуцирует кислые протеазы с ПА до 10000 — 12000 ед/л, а в клеточпых экстрактах, в особенности при трех и более кратных замораживаниях и оттаиваниях, ПА может возрастать более чем в

20 — 30 раз.

Увеличение ПА отмечено при добавках к среде сусла и коллагена.

Отношение к кислороду: выраженный аэрофил.

Температурный оптимум роста в пределах

20 — 25 С.

Оптимальный рН 4,5 — 6,5.

По Гр а му кр асится положительно.

1. Способ получения протеолитических ферментов путем культивирования микроорганизмов, относящихся к роду Bacillus, на питательной среде, содержащей источники углерода, азота с последующим выделением ферментов из культуральной жидкости, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью увеличения активности продуцируемых ферментов, из микроорганизмов, относящихся к роду Bacillus, используют вид idosus.

2. Способ по п. 1, отл и ч а ю щи и с я тем, что из вида Bacillus idosus используют штамм

1002.