Штамм узлт-1-продуцент липолитических ферментов

Штамм узлт-1-продуцент липолитических ферментов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАКИИ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид ву (22) Заявлено 25.07.73 (21) 1954123/28-13 (51) M. Кл.

С 12k 3/00

С 1 2 ct 1 3/00 с присоединением заявки 1 —

Гасударственный намитет

Саввтв 1йиниатрав СССР аа делим изабретений и аткрытий (32) Приоритет

Опубликовано 25.04.75 Бюллетень ¹ 15

Дата опубликования описания 23.04 75 (53) УДК 577.15.08 (088. 81 (72) Авторы изобретения

М. 3. Закиров, И. Г. Султанова и К. Давранов (71) Заявитель

Отдел микробиологии АН Узбекской ССР (54) ШТАММ 8 Ь 1 ZOpu S ттт SCr O SpOr u 8 УзЛТ-1-ПРОДУЦЕНТ

ЛИПОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ) Изобретение относится к микробиологической промышленности, а точнее к получению нового штамма. КЬя Орив ел1СГОярОтыб

УзЛТ-1-продуцент липолитических ферментов.

Известны различные штаммы, используемые для приготовления липолитических фер-: ментов, например, Аберет уИ,и3аюа.твое на средах с различными источниками азота, Эти штаммы имеют невысокую термостойкость, что исключает проведение процесса при высоких температурах, а также затрудняет их хранение.

Цель изобретения — получение термофильных и термотолерантных штаммов— продуцентов липолитических ферментов.

Штамм 111тгт,ории д 1стоврот ц ц УзЛТ-1 выделен из смеси испорченных молочных продуктов с добавлением почвы и бактериологически очищен.

Морфология. На среде с кукурузным экстрактом и жиром воздушный мицелий хорошо развит, плотнопушистый, высотою

1,5-2 см, нежный, лет ко разрывается при

2 прикосновении и плохо смачивается водой, неокрашенный. Наиболее интенсивное спороношение наблюдается на 2-3 сутки, при этом мицелий становится серого цвета.

Ризоиды размербм 26-17 " 3,5-7,1 мкм, немногочисленные, простые, коричневого цвета. Столоны слабо выраженные.

Стилоспорангиеносцы коричневые без . промежуточных вздутий, в диаметре 5-20

1О мкм, длиной 100-150 мкм отходят по

1-3 от шейки ризоида или столоновидных гиф на 1-3 мкм. Диаметр стилоспорангий

30-100 мкм, Колонка приплюснуто-шаровидная, рази мером 30 х 25 мкм светлокоричневая.

Апофиза блюдцевидно-воронковидная. )

Спорангиоспоры эллиптические, гладкие, размером 3,5 х 3,3 мкм. Хламидосноры

;образуются при старении культуры, одиноч20 ные, различные по форме длиною до 40мкм. ! Зигоспоры шаровидные, в диаметре 5060 мкм рыжевато-коричневые. Копулирую щие отроги неодинаковые по форме и размерам, в основном противолежащие, в

М диаметре 20-40 мкм.

467 932

Процесс

Выход Активность, по белку, % о

Белок, мг

Активность, ед удельная обшая

Культуральная жидкос гь

565, 14 4905068,0

100

100

Осаждение

84,5

1106,8 4140538,8

43,8

Исаждени = сернокислым амм опием (30-90%) 5494,4. 81 7,7 5 449304 2,3

63,3 ( нии суточной культуры состоят из бесцеветного ползучего волокнистого мицелия, Высота войлока до 1-1,5 см.. Ha вторые, третьи сутки колонии становятся бежевыми, Мицелий нежный, ломкий и не смачивается водой.

Сусло-агар. Колонии суточной культуры белые, пушистые. Мицелий ползучий и на вторые сутки занимает всю поверхность чашки Петри.(На вторые сутки колонии становятся темно-серого цвета, а на поверхности в центре колонии остается войлок высотой около 0,5 см светло-серого цвета, Пшеничные отруби. Через сутки отруби полностью пронизаны белым мицелием . и серыми спорами.

Жидкие среды. На вышеуказанных жидких средах штамм образует мицелий в виде толстой войлочной пленки белого цвета, которая после сророобразования становится серой.

Отношение к источнику азота. Ассимилирует органический азот в виде пептона, кукурузного экстракта, дрожжевого автолизата, желатины, казеина. Наилучший рост и биосинтез липолитических ферментов происходит на среде„ содержащей в качестве источника азота кукурузный экстракт, слабее — с пептоном или дрожжевым автолизатом, а еше слабее — на средах, содержаших другие источники азота.

Слабо растет на средах, содержаших минеральный источник азота.

Отношение к источнику углерода. Штамм использует глюкозу, сахарозу, мальтозу, лактозу, глицерин, инозит, крахмал, а так же различные жиры и масла: хлопковое, оливковое, сливочное, касторовое, говяжий, и зопропиловым спиртом (1: 6) . 3741

4 бараний, рыбий, костный жиры, Растет на средах, оодержаших хлопковый шрот, шелуху, соапсток, саломас.

Отмечается слабый рост на эвквалиптовом масле.

Растет при температуре 25-52 С, оно тимум 42-47оС, рН среды 2,0-8,0, оптимум 5,0-6,0.

Гриб целесообрзно вырашивать на жиду кой среде, содержащей 5% хлопкового шрота при рН 5,0-5,0 в течение 15-20 час.

Липолитическая активность на данной среде равна 10-12 мл 0,1 н KOH на 1 мл.

При определении активности культуральщ ную жидкость необходимо разводить водой в 25-50 раз.

Штамм RhtzoyuS ю1сго ро и8 УзЛ 1-1 вырашивают в глубинных условиях при

45 С на среде, состояшей из 2% кукурузр) ного экстракта, 1% хлопкового масла и водопроводной воды при рН 5,5 в течение

24-48 час.

Липолитическую активность определяют по методу Микико Иваи.

Активность липазы выражают в миллилитрах. 0„1 Н раствора шелочи, израсходованной на титрирование жирных кислот, полученных при гидролизе оливкового масла под действием 1 мл культуральной жидкости в условиях опыта.

Липолитическая активность культуральной жидкости гриба при выращивании на вышеуказанной среде составляет 350 мл

0,1 í. KOH на 100 мл культуральной жидкости.

Ферментный препарат липазы получают, из культуральной жидкости методом осажI дения изопропиловым спиртом, взятом в ,О соотношении 1: 6, а также высаливанием (фракция 30-90%) сернокислым аммонием.

Выход и активность полученных препаратов представлены в таблице.

467932 полностью пронизаны белым мицелием и

Предмет изобретения серыми спорами.

Жидкие среды. На вышеуказанных жидких средах образует мицелий в виде толстой пленки белого цвета, которая после спорообразования становится серой.

Отношение к источнику азота. Ассими5

Таким образом, выход препарата при осаждении изопропиловым спиртом меньше, чем при осаждении сернокислым аммонием, я удельная активность выше на 300 ед, следовательно, в первом случае осаждается более чистый препарат липазы.

Культуральная жидкость и ферментные препараты активны при рН 3-10, при этом: липолитическач активность имеет два экстремума рН в кислом и щелочном зна- l0 чениях при максимумах активности при рН 4,2 и 7,8.

Оптимальная температура действия фер-; мента 40-45оС. При 50 С фермент утрачивает активность на 50% за 2 час и 75 / is за 8 час при 60 С вЂ” на 50 .:, за 40мин о и на 75% за 3 час, а при 70оС фермент инактивируется полностью за 20 мин.

Штамм 861 БОрц$ 1п1сГ0$РОГЦ&

-1 продуцепт липолитических ферментов. экстрактом и жиром воздушный мицелий хорошо развит, плотнопушистый, высотою

1,5-2 см, нежный, легко разрывается при прикосновении и плохо смачивается водой, неокрашенный. Наиболее интенсивное спороцошение достигается на 2-3 сутки, нри этом мицелий становится серого пвета.

Ризоиды размером 26-71 х 3,5-7,1 мкм, немногочисленные, простые, коричневого цветя. Столопы слабо выряженные, 35

Стилоспорангиеносцы коричневые без промежуточных вздутий, в диаметре 520 мкм, отходят от шейки ризоида или стопоповпдцых гпф ня 1-3 мкй.Диаметр стилоспорянгии 30-100 мкм, Колонка, @ прппгпоснуто-шаровидная размером 30 х 25 мк, светло-коричневая.

Л пофизя блюдцев идно-воронк овидная.

Споряпгиоспоры эллиптические, гладкие, римером 3,5 х 3,3 мкй,Хламидоспоры образуются прп старении культуры, одиночные, различные по форме длиною до 40 мкм. Зигоспоры шаровидные в диаметре 50-60 мкм рыжевато-коричневые. Копулируюшие отро1 и неодинаковые Ilo форме и размерам, в осНоВНоМ противолежащие, в диаметре 2040 мкм.

:\ ). нии суточной культуры состоят из безцвет.ного ползучего волокнистого мицелия. Высота войлока до 1-1,5 см„На вторые, третьи сутки колонии становятся бежевыми.

Мицелий нежный, ломкий и не смачивается водой.

Сусло-агар. Колонии суточной культуры белые, пушистые. Мицелий ползучий и на вторые сутки занимает всю поверхность чашки Петри. На вторые сутки колонии становятся темно-серого цвета, а ня поверхности в центре колонии остается войлок высотою около 0,5 см. светло-серого цве-, та.

Пшеничные отруби, Через сутки отруби лирует органический азот в виде пептона, кукурузного экстракта, дрожжевого автолизата, желятины, казеина.

Наилучший рост и биосинтез липолитических ферментов происходит на среде, содержащей в качестве источника азота кукурузный экстракт, слабее-с пептоном или дрожжевым автолизятом, и еще слабее на средах, содержащих другие источники азота. Слабо растет на средах, содержапшх минеральный источник азота.

Отношение к источнику углерода.

Штамм использует глюкозу, сяхярозу, мальтозу, глицерин, инозит„ крахмал, я также различные жиры и масла: хлопковое, оливковое, сливочное, касторовое масла,, говяжий, рыбий, косточный жиры, Растет . на средах, содержащих хлопковый шрот, шелуху, соапсток, саломас.

Отмечается слабый рост на эвкалиптовом масле. Растет при температуре 2552 С (оптимум 42 47 C), рН среды 2,0-:

8,0 (оптимум 5,0-6,0).