Способ получения трипаномицина

Способ получения трипаномицина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

I ..8СО)о "HRf. я) тент))o-тч.х;)ичeс)«."С3

О П И С А й"и я

ИЗОБРЕТЕН Ия

))1) 468953

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства— (22) Заявлено 03.03.70 (21) 1411108/31-16 с присоединением заявки № (51) М. Кл. С 12d 9!14

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изаоретений и открытий (32) Приоритет 05.03.69 (31) WP30h 138378 (33) ГДР

Опубликовано 30.04.75. Бюллетень;¹ 16 (53) УДК 615.779.931 (088.8) Дата опубликования описания 19.11.75 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Вернер Флек и Дитрих Штраус (ГДР) Иностранное предприятие а Феб Иенафарм» (ГДР) (71) Заявитель

Изобретение относится к области производства антибиотиков, Предложен способ получения трипаномицина, ранее в патентной и специальной литературе пе описанный и заключающийся в том, что культуру Streptomi diastatochromogenes IMETJA 10081 выращивают в аэробных условиях в течение 2 — 6 дней при 25— — 37 С на среде, содер>кащей источники углерода, азота и минеральные соли, мицелий и 10 фильтрат культуральной жидкости экстрагируют органическим растворителем и выделяют целевой продукт известными приемами, причем выращивание осуществляют в присутствии солей железа. 15

Антибиотик трипаномицин представляет собой комплексное аморфное вещество, имеющее красно-коричневую окраску, хорошо растворимое в хлороформе, ацетоне, диметилформамиде, менее растворимое в спиртах, 2О эфирах, бензоле, плохо растворимое в воде и обладающее своиствами индикатора.

Как свежая ферментациопная жидкость штамма JA 10081, так и выделенный из нее антибиотик трипаномицип замедляют развитие непатогенных и патогенных протозойных бактерий in vitro u )n vivo, Uocardien, Actinomyces, граммполо>кительных бактерий и устойчивых L-форм, а также замедляют ооразованис граммотрицательных бактерий. 3О

По отношению к дрожжам, нитевидным грибкам и Basidiomyces замедляющее действие антибиотика незначительно или совершенно не проявляется.

Антибиотик трипапомицнн и его производные, продукты его гидролитического разложения и смесь этих веществ могут найти применение в качестве химиотерапевтических средств против протозойных заболеваний.

Используемые для получения трипаномицина микроорганизмы схожи со штаммом

207 (АТСС 12309), который описан как тип вида Streptomvces diàstàtoñhromogånås (Rrsinsky) Ваксманом и Генрици в 1948 r. u

Ваксманом в 1961 г. и хранится в коллекции штаммов Иенского института микробиологии и экспериментальной терапии Академии На. ук в Берлине под ¹ JA 10081. Штамм

1.ЧЕТКА 10081 выделен из ооразца итальянской земли. Образец земли взят с о, Капри из виноградника деревни Апакапри и характеризуется такими >Ке морфологическими, макроскопическими, микроскопическими и оио химическими характеристиками, которые описаны Ваксманом (1961 г.) для Str. diastatochromogenes.

Предлагаемый способ состоит в том, что в жидкой питательной среде, содержащей источники углерода и азота, а также минеральную соль, культивируют при аэробных (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРИПАНОМИЦИНА

3 условиях штамм Streptomi причем под этим штаммом подразумевают штамм

IMETJA 10081, подобный но описаниго

Streptomi ees diastatoc1>romngenes (Ваксма г, 1961 г.),его мутанты или разновидности.

Культивирование штамма производят в подходящей питательной среде в течение 2 — б дней при температуре от 25 до 37 С, в токе воздуха и при перемешивании, причем в питательную среду добавляют соли тяжелых ме1аллов. После отделения мицелия антибиотик выделяют с помощью экстракции растворителем, как из культурального фильтрата, так и из хгицелл. Переводят его в водную фазу, непосредственно за этим повторно экстрагируют из водного нео- ищенного концентрата органическим растворителем, а затем осаждают продукт из неочищенного концентрата низкокипящей фракцией углеводородов. I loлученный антибиотик обозначается как трипаномицин.

Пр им ер 1. В две бутылки с крутыми стенками емкостью 500 мл помещают по 80 мл питательной среды для предварительного культивирования следующего состава (/О):

Глюкоза 1,5

Соевая мука 1,5

Карбонат кальция 0,1

Хлористый натрий 0,5

Первичный фосфат калия 0,03

Водопроводная вода До 1 (л)

Производят фракционную стерилизацию

3 раза по 30 мин при температуре 100 С. После стерилизации рН ссставляет 6,3.

В каждую бутыль вводят по 1/10 части суспензии спор, которую получают посредством смешения стерильного раствора поваренной соли с четырнадцатидневной культурой

IMETJA 10081, культивированной в пробирке на питательной среде состава (о/О):

Сахароза 0,300

Декстрин 1,500

Мочевина 0,010

Дрожжевой экстракт 0,100

Пептон 0,500

Хлористый натрий 0,050

Сульфат железа 0,001

Первичный фосфат калия 0,050

Агар (промытый) 2,000

Дистиллированная вода Остальное

Проводят стерилизацию 40 мин при 116"С.

После стерилизации рН культуральной жидкости составляет 6,5 — 7,0. Инкубацию проводят 48 час при температуре 28 С и перемешивании.

8 мл приготовленной указанным способом культуральной жидкости засевают в бутыли, в которых находится по 80 мл питательнойй среды следующего состава ("-/О ):

Глюкоза 3,0

Соевая мука 2,0

Карбонат кальция 0,3

Хлористый натрий 0,5

Водопроводная вода Остальное

408953

Предмет изобретения

00 1. Способ получения триг|аномнцнпа, от.гичигогггийся тем, что культуру Streptnmyces

diastatnchrcнгюгепеs 1МЕТЛА 10081 выращивают в аэрîоных условия.; на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, мицелий и фильтрат культу4

Стерилизацию проводят 35 мин при 1 10 С.

После стерилизации рН составляет 6,3.

Инкубируют при температуре 28 С и перемешивании со скоростью 180 обгмин. 1-Iаиб>ольшее содержание трипаномицина наблюдают по истечении 96 час (150 мг/мл) ферм етации.

Определение активности производят с помощью известного микробиологического спо1О соба, при котором испытание основывается на диффузии агара и при котором величина замедляющего действия на размножение температурных вирусов в бактериях является мерой активности антибиотика.

15 Пример 2. Опыт проводят аналогично примеру 1, но на производящей питательной среде состава (О/ ):

Глюкоза 3,000

Соевая мука 3,000

20 Карбонат кальция 0,300

Хлористый натрий 0,300

Хлорное железо 0,025

Водопроводная вода Остальное

После стерилизации рН равно 6,5.

2: Наивысшее содержание трипаномицин» наблюдают по истечении 100 ча" — 170 мг/мл.

Пример 3. Опыт проводят a»aлогичпо примеру 2, но среда предварительного выращивания и ферментационная среда имеют

30 другие составы.

Среда предварительного выращивания (o):

Пептон 0,60

Сухие дрожжи 0,30

1-Iитрат кальция, гидрат 0,05

Водопроводная вода Остальное

Стерилизацию проводят 20 мин при

120 С. После стерилизации pI-1 среды равно

7,2.

"*0 Ферментацнонная питательная среда ("/О):

Глюкоза 3,000

Сг ие дрожжи 0,300

Хлористый натрий 0,300

Вторичный фосфат калия 0,100

Карбопат кальция 0,150

Сульфат магния 0,010

Сульфат железа 0,002

Сульфат цинка 0,002

Сульфат меди 0,001

50 Водопроводная вода Остальное

РН ферментационной среды равно 7,0.

Стерилизацию прoâoäÿò обычным образом.

Наивысшее содер>кание трипаномицина

5>:гостигается по истечении 120 час ферментаи ни — 160 м г/мл.

5 ральной жидкости экстрагируют органическим растворителем и выделяют целевой продукт известными приемами.

2. Способ HO п. 1, отлпчающийгя тем, что

468953

6 выращивание осуществляют в течение 2 — б дней при температуре 25 — 37 С.

3. Способ по пп. 1 и 2, отлачаюп!пйся тем, что выращивание осуществляют в присутст5 вии солей железа.

Составитель С. Малютина

Редактор Н. Спиридонова Текред Л. Казачкова Корректор Н. Лебедева

3 гааз 4902 Изд. М 14!7 Тираж 529 Подписное

11Н!1!!П1! 1 осударственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

МОТ, Загорский филиал