Способ получения антибиотика

Способ получения антибиотика

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И",С;;А"Н- И Е

ИЗОБРЕТЕН ИЯ (ii) 469265

Союз Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕНТУ (61) Зависимый от патента (22) Заявлено 13.04.70 (21) 1428119/30-15 (51) М. Кл. С 12d 9/14 (32) Приоритет 14.04.69 (31) 815652 (33) США

Опубликовано 30.04.75. Бюллетень ¹ 16

Государственный комитет

Совета Министров СССР (53) УДК 615.779.9 (088.8) по делам изобретений и открытий

Дата опубликования описания 03.09.75 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Мартин Пауль Кунстман и Джон Норман Портер (США) Иностранная фирма

«Американ Цианамид Компани» (США) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА

Изобретение относится к способам получения антибиотиков сельскохозяйственного назначения путем культивирования продуцентов группы Streptomyces.

Предлагается способ получения антибиотика на основе культивирования Streptomyces eburosporeus u. sp. (NRRL 3582) в аэробных условиях на жидкой питательной среде, содержащей источники усвояемого углерода, усвояемого азота и минеральные соли, при температуре 25 — 29 С в течение времени, необходимого для придания культуральной среде существенной антимикробной активности.

Способ включает также выделение антибиотика и, при необходимости, его очистку.

Получаемый антибиотик предназначен в качестве добавки к корму и/или питью для домашних животных и птицы.

Антибиотик условно назван АМ 374.

Морфологические свойства культуры Str.

eburosporeus.

Рост на средах большинства типов средний, значительный на картофельно-декстрозном

arape, незначительный на агаровом растворе

Чапека.

Разбросанный воздушный мицелий образует длинные изогнутые и спутанные цепи эллиптических и удлиненных спор размером 0,5— — 0,6+1,0 — 1,3 мк. Поверхность спор гладкая.

Цвет мицелия в большинстве сред беловатый, переходит в цвет слоновой кости до очень светлых оттенков в областях формирования спор.

5 Растворимые пигменты желтоватые в различных средах, отсутствуют в растворе Чапека, в аспарагиново-декстрозном arape и на среде крахмал — неорганические соли — агар.

Обратный цвет в большинстве сред желто10 ватых тонов.

Физиологические признаки.

Нитраты не восстанавливает. Желатнну разжижает полностью за 7 дней. На железо-пептоновом arape меланин не образует.

1о Хорошо усваивает t-арабинозу, а-фруктозу, у-инозитол, лактозу, а-маннитол, а-мелибиозу, салицин, а-треголозу, а-ксилозу; плохо усваивает или совсем не усваивает 1-рамнозу, адонитол, а-мелезитозу, а-раффинозу и саха20 розу.

На основании результатов исследования общих характеристик микроорганизм включен в род стрептомицетов. Сравнение культуры

NRRL 3582 с известными образцами стреп25 томицетов показало сходство основных таксономических признаков.

Некоторые характеристики Str. allidoflavus и Str. adorifer совпали с соответствующими характеристиками культуры NRRL 3582, одна30 ко исследования показали наличие принципи-.

469265

3582 относится к типу Rectus — Flexibilis, в то время, как морфология двух других образцов относится к типу Spira.

Таким образом, культура МЯКИН 3582 на5 столько отличается от других стрептомицетов, что вполне может быть выделена в отдельный вид.

Таблица 1

Str. eburosporeus

ККК(3582

Str. alltdofiavus

Показатель

St r. adorif er

Короткие, спиралеобразные

Сферические

Спорофоры форма спор

Длинные, спутанные и изогнутые

От эллиптических до удлиненных

Полное

В большинстве желтоватые

}Келтоватый; воздушный мнцелий беловатый, редкий

Быстрое

В большинстве желтоватые

Медленное

В большинстве коричневатые

От кремового до коричневого; воздушный мицелий обильный, кремового цвета

Разжижение желатина

Растворимые пигменты

Коричневатый; воздушный мицелий становится беловатожелтым

Рост на аспарагиндекстрозном агаре

Мука соевая

Церелоза

Натрий хлористый

Карбонат кальция

Растворимые дистилляты зерна

Вода

10

10

До 1000 (мл) .

В каждый чан засевают от 3 до 10% посевного материала, полученного указанным выше способом, Аэрацию осуществляют из расчета

0,5 — 1,0 л стерильного воздуха на 1 л пита20 тельной среды в 1 час.

Г1еремешивание среды проводят со скоростью 200 — 400 об/мин, температуру поддерживают в диапазоне 25 — 29 С, предпочтительно около 28 С. Брожение ведут в течение

25 65 — 90 час.

После брожения смесь, содержащую антибиотик, фильтруют при рН для удаления мицелия. Фильтрацию можно проводить с помощью диатомовой земли или любого другого

30 фильтрующего средства.

Осадок мицелия промывают водой, а вытяжку промывной воды осуществляют вместе с фильтром. Активный антибиотик адсорбируется на Дарко G-60 или на другом подходя35 щем виде растительного или животного угля с использованием, например, 0,5% (вес/объем) адсорбента. Активный антибиотик, оставшийся на угле, может быть элюирован путем перемешивания угля в течение -30 мин с

40 40%-ным водным раствором ацетона, доведенного с помощью концентрированной серной кислоты до рН 2. Объем элюата составляет — 1/4 первоначального объема.

Концентрирование элюата производят при

45 пониженном давлении; объем жидкой фазы составляет — 1/20 первоначального объема.

Величина рН этой фазы устанавливается 5,5 с помощью гидроокиси бария, а образующийся осадок сульфата бария удаляют фильтрацией, 20

До 1000 (мл) . альных различий между этими культурами (см. табл. 1)

Кроме того, следует отметить, что для культуры МЯКИН 3582 характерно большее ограничение роста в различных средах и более разбросанный характер спорообразования.

Из табл. 1 видно, что морфология ARRL

Выращивать Str. eburosporeus можно в одной из многочисленных жидких сред, которые содержат: ассимилируемый источник углерода (крахмал, сахар, кормовая патока, глицерин и т. д.), ассимилируемый источник азота (протеин, гидролизат протеина, полипептиды, аминокислоты, кукурузный экстракт и т. д.), неорганические анионы и катионы (калий, натрий, кальций, сульфат, фосфат, хлорид и т, д.).

Следы таких элементов, как бор, молибден, медь и т. д. попадают в среду в составе нримесей других компонентов.

Аэрацию в чанах и бутылях осуществляют путем принудительной подачи стерильного воздуха в среду, В случае необходимости может быть добавлен пеногаситель, например

1%-ный раствор октодекана в опеомаргарине из свиного сала.

Приготов ение маточной культуры.

Культуру Str. eburosporeus высевают в колбы объемом 500 мл, заливая в них по 100 мл стерильной жидкой среды с соскобами или смывами спор со скошенного агара.

Обычно используют среду следующего состава (г):

Кормовая патока

Глюкоза

Бактопептон

Вода

Колбы ставят на инкубацию (температура

25 — 29 С, преимущественно 28 С, перемешивание) на 20 — 48 час, Полученную культуру используют для ипокуляции среды того же состава, разлитой по

1 л и по 12 л в стеклянные ферментеры, объемом 2 и 20 л соответственно, Брожение ведут 20 — 48 час при интенсивной аэрации. Полученный инокулиум используют для инокуляции бродильных чанов.

Для получения антибиотика используют среду ледующего состава (г):

Длинные, прямые, ветвящиеся; образуют спирали

Сферические

469265

Таблица 2

Чини»а тьная ингибирующая концентрация, мГгг мл

Тест-микроорганизм антибигилроотик лиза

АМ 374, А)f 374

6,20

3,10

6,20

3,10

3,10

6. 20

6,20

6,20

1,25

6,20

6,20

0,62

3,10

6,20

6, 0

6,20

250, 250

i 250

j 250

i 250 250, 250

250

Объем фильтрата снижают до 400 — 800 мл.

После этого концентрат превращают в суспензию подкисленной окиси алюминия, используя — 1/5 количества окиси алюминия (в граммах) по сравнению с объемом концентрата. Суспензию сливают через подходящую колонну подкисленной окиси алюминия (с использованием примерно десятикратного количества окиси алюминия по сравнению с загрмжаемым), увлажненной метанолом.

Активный антибиотик смывают с колонны водным раствором метанола (концентрация

25 — 50 /О ) . Соответствующие активные фракции собирают, смешивают и концентрируют в малом объеме ()1 л) при пониженном давлении. Величину рН указанного концентрированного вещества устанав.пивают 6,0 — 6.,5 с помощью гидроокиси бария. Затем повторно удаляют путем фильтрации осадок сульфата бария, после чего лиофи чизир1 ют чистый фильтрат до сырого антибиотика АМ 374.

После лиофилизации материал подвергается дальнейшей очистке с помощью хроматографии на колонне с соответствующей ионообменной смолой, например, СМ Сефадекс С-25 (Н-форма) . Промывку колонны осуществляют, например, разведенным раствором серной кислоты.

Элюат, содержащий активный антибиотик, поглощение которого .чежит в области

280 ммк, доводят до рН 6,3 с помощью гидпоокиси бария. Образующийся осадок сульфата бария учаляют фильтрованием, а фильтрат концентрируют в объеме — 30 — 80 мл, рН раствора чстанавчивают 8,0 с помощью смолы

IR45 (ОН вЂ” ). Затем удаляют фильтрованием.

Фильтрат добавляют к большому количеств ацетона при перемешивании.

Формируемый осадок выделяют фильтрованием, промывают ацетоном и высушивают при средней температуре и пониженном давлении ло получения антибиотика AM 374 в основной форме.

Микроаналитическую пробу готовят путем осаждения АМ 374 из метанольного или этанольного ацетона и высушивания осадка при глчбоком вакууме (10 мм — ) и температуре

100 С в течение двух суток. Основной антибиотик АМ 374, приготовленный указанным способом, имеет следующий э,чементарный состав (вес. ):

Углерод 54,82

Кислород 29,01

Азот 7,60

Водород 7.10

Хлор 2,47.

Материал не имеет определенной точки плавления, постепенно разлагается прп температуре, превышающей 250 С; (ct) o 102 -2,9" (c=1,045, в воде).

Максимум ультрафиолетового спектра приходится на:

282 ммк (Elc» — — 42) в кислых растворах.

282 ммк (E!Ä, =42,5) в нейтральных растворах, 1

305 ммк (E!, „=51.5) в основных растворах, 1

260 ммк (Е|,м =92) в основных растворах.

Спектр поглощения основного АМ 374 в гранулах КВг, приготовленных стандартным способом, имеет длины волн (мк):

3,0; 3,45: 6.0; 6,20; 6,30; 6,67; 6,68; 7,05; 7,22;

7,35sh; 7,52; 7,67; 8,2; 8,65sh; 8,85; 9,45; 9,75;

9,90; 10,45sh; 11,07; 11,5; 12,0; 12,35; 13,35;

14.4.

В раствооитслях (pH 6.0), чказа ных ниже, при использовании Вас. subtil!s или СогупеЬас1ег1пгп xегоsis в качестве тест-организмов значения Rr следующие; 5 -ный водный раствор хлористого алюминия (XH

Антибиотик АМ 374 легко растворяется в воде и диметилсульфоксиде, плохо растворяется в метаноле и еще в меньшей степени в этаноле.

Данные о противомикробной активности

AN 374 и его гидролизата приведены в табл. 2

Stt phrfococcus aureus АТСС 653$р

Staphylococcus аureus М 69

Staf1hvf coccus aureus, Rose

ATCC 14154

Sfaphvlococcus aureus, Smfth

Аз СС 13709

51геptococcus p»ogcncs C 203

Streptococcus f;iccaffs А CC 8043

Streptococcus sp неге»олитический о

БГгеptococcus sn. -.-rc»oauòu÷cct»!é

Хз 80

Муcohactcrfum зшс;иatis ЛТГГ 607

Salmon-ffa typhosa А ГС 6539

Proteus i ulgaris АТСС 9484

Escherishia со11 .1У

Kfebsteffa pne»moniae штамм АД

Escherichia соИ 311

Entегоhacter aегоgcnes M 75

Pseudomonas aегоglnosa АТСГ 10145

Противомикробную активность ш 1чо антибиотика АМ 374 испытывают на мышах (20 в каждом вapuaíòå), которых заражают

Staphylococcus auieus (штамм Смита и штамм

Роуз), Streptococcus piogenes С 203 и Diplococcus pueumoniac SV I. Учет результатов производят через 14 дней после заражения.

Все мыши, которым вводился антибиотик АМ

374, живы; из зараженных контрольных мы469265 шей, не подвергавшихся лечению, 95 — 100ото погибли в течение 5 дней после заражения.

Противомикробную активность продукта гидролиза АМ 374 in vivo испытывают на 5 мышах, которых заражают Staphylococcus

aureus (штамм Смита) . Учет результатов проводят через 14 дней. Всем мышам вводили продукт гидролиза АМ 374, все мыши выжили.

Способ получения антибиотика АМ 374 осуществляют следующим образом.

Приготавливают среду состава (г):

Кормовая патока

Глюкоза

Бактопептон

Вода

10

До 100 (мл) .

Смыв или соскоб с косого агара Str, eburosporeus использчют для инокуляции двух колб (объем 500 мл), каждая из которых содержит 100 мл указанной среды. Содержимое колб перемешив|пот 48 час ппи темпепатчре

28 С. Полчченньтй инокули и пепеносят в стеклянный |1тепментеп (об ьем 19 л1, содержащий 12 л стерильной среды. Аэпапию стерильным воздухом пповолят в течение всего пепиода роста (-48 час), после чего содепжимое ферментера использутот для засева бродильного чана (объемом 300 л) .

Среда для брожения содер>кттт (г):

Мука соевая

Церелоза

Хлопистый натрий

Капбонат калы|ил

Растворимый дистпллят зерна 5

Воды До 1000 (мл) .

10

Ппиготовленную средч стерилизуют ппи

120 С папом пол давлепием 6.8 кг в течение 45 — 60 мтттт. После степи,тизапии пН спелы 66. Затем 300 л степильной спеды, находящейся в чане. засевают 12 л инокчличча. по.|тчтеттттого палее.

Бпо>кеттие лповодят ппи 28 С с использованием масла Холаг 1.С-8 в качестве пеногасителя. Интенсивность аэпации 0.5 л степильного воздчха на 1 л смеси в 1 мин. Смесь пепемешивают со скоростью 300 об!мин пропеллепной мешалкой. По истечении 70 час брожение заканчивается.

300 л смеси после брожения фильтп: т через фильтр 2О(т (вес/объем) с диатомовой землей, предварительно доведл рН д 6.0 с помощью гидпоокиси натрия.

Активный антибиотик в вытяжке фильтпата и ппомьтвн ю вод адсорбипчют на 900 г

Дапко Ст-60: из счспеттзтттт чгля iëaëFIToò пветньте включеттил пчтем пепеметттттваттил с -30 -, 40 lo-ного водного паствопа ацетона. Активттчю часть отделяют 0Т уг,TFI. перемешивая с 75 л

40ото-ного водного паствора ацетона. доведенного с помощью концентрированной серпой

10 кислоты до рН 2,0. Суспензию фильтруют, =мыв концентрируют до объема -4 л, рН доводят до 5,2 гидроокисью бария. Осадок сульфата бария отфильтровывают, фпльтрат концентрируют до объема -700 мл. Из этого концентрата при;отовляют суспензи|о со

100 r подкисленной окиси алюминия, которую затем сливают на колонну, содержащую 1 кг подкисленной окиси алюминия в метаноле.

Подкисленную окись алюминия приготовляют путем окисления водной суспензии глинозема

Мерка концентрированной серной кислотой до получения постоянного значения рН 3,0, фильтрования, промывки водой и метанолом

I5 и воздушной сушки. Затем колонну последовательно промывают 5 л метанола, 60 л 50О!О-ного водного раствора метанола, 10 л 25О/О-,ного водного раствора метанола.

Соответсттвующтте фракции, содержащие

20 антибиотик АМ 374 и определенные пробой на С. xегоsis, смешивают и концентрируют при пониженном давлении до объема

-500 мл, после чего доводят рН до 6,2 с помощью гидроокиси бария. Осадок сульфата

25 бария отфильтровывают. Затем лиофидт|зируют фильтрат для получения 5,1 г сыпого ант .биотика АМ 374 (при чистоте от 20 до

50%).

Полученные таким образом 51 r антиби30 отика АМ 374 растворяют в 30 мл воды и используют в колонне с СМ Сефадексом С-25 (форма Н+). Из 250 г Сефадекса приготовляют суспензию в -3 л воды с доведением рН ло 2,0 концентрированной серной кислотой.

Избыточную воду сцеживают, а смолу несколько раз промывают водой. Суспензию сливают в колонну (внутренний диаметр

7,6 см) и дополнительно промывают 5 л воды для удаления избыточной кислоты.

40 Колоннч промывают 5 л воды, затем 4 л воды с рН 1,4, а затем дополнительно ° 4 л воды с рН, доведенным до 1,4 концентрированной серной кислотой. Фракции (— 100 мл каждая) собирают, после чего измеряют био45 логическую активность (С. xегоsis) и поглощение ультрафиолетовых лучей (280 ммк) при разведении этих фракций от 1 до 100.

Фракции 58 — 80, содержащие большую часть антибиотика, объединяют. Величину рН этой вытяжки доводят до 6,3 с помощью гидроокиси бария, осадок сульфата бария отфильтровывают с помощью диатомовой земли. Объем фильтрата доводят до -200 мл, затем его лиофилизпруют и получают 1,5 г сырого антибиотика.

Сырой антибиотик растворяют в 50 мл воды, и доводят рН раствора до 8,2 с помощью

IR45 (ОН- форма).

Суспензию фильтруют, фильтрат лиофили50 зипчют. Полчченньтй м тетттал ат тво" лю в

40 мл воды. после чего осаждают антибиотик

400 мл ацетона. Кристаллический осадок отфильтровывают и растворяют в |малом ко|пи честве метанола. Добавляют ацетон, и в ocRдок выпадает очи|ценный антибиотттк

469265

10 способом хлорттд элементарный со52,20

28.02

7,24

6,33

G,21.

AN 374, который собирают фильтрованием.

Выход 1,18 г.

Микроаналитическую пробу приготовляют путем осаждения АМ 374, полученного указанным выше способом, из этанольного ацетона и высушивания осадка в глубоком вакууме (10 — мм рт. ст) при температуре 100 С в течение двух дней.

Преобразование основного АМ 374 в сульфат AM 374.

150 мг основного антибиотика AM 374 растворяют в 70 мл подогретого метанола, к которому добавляют одну каплю смеси метанол+концентрированная серная кислота (1: 1). PH водного раствора АМ 374 6,3. Осадок отфильтровывают и промывают метанолом и ацетоном и получают 98 мг сульфата

АМ 374.

Микроаналитическую пробу готовят, как указано выше.

Сульфат АМ 374 имеет следующий элементарный состав (вес. о/о):

Углерод 52,68

Водород 5,85

Кислород 30,35

Азот 7,32

Сера 1,45

Хлор 2,35. (а)в =104+-2,8 (с=1,075, в воде). Максимум ультрафиолетового спектра приходится на:

282 ммк (Е1, „— — 44) в кислых растворах, 282 ммк (Етс — — 43) в нейтральных растворах, 1 о

305 ммк (Е1,„=48) в основных растворах, $11 260 ммк (Е1,;„=85) в основных растворах.

Спектр поглощения AN 374 инт11ракрасного излучения в гранулах КВг, приготовленных стандартным способом. имеет следующтте длины волн (мк). 3,0: 3.45: 5.75 sh: 5.90 sh;

5,99; 6.03; 6.20; 6.32; 6,67; 6,78 sh; 6.87; 7.05;

7,20; 7,53; 7.65; 8.25; 8,65 sh; 8,87: 9,45: 9,73;

9,88 sh; 10,45; 11,05; 12,0; 12,35; 13,3; 14,4.

Преобразование основного AN 364 в хлорид

АМ 374.

20 r. базового антибиотика АМ 374 растворяют в 10 мл 0,1 н. соляной кислоты, концентрируют раствор до объема -2 мл при пониженном давлении. В процессе концентрации формируется микрокристаллический осадок, который после фильтрования повторно растворяют в минимальном количестве волы и снова переводят в осадок с помощью ацетона. После фильтрования осадок промывают дополнительным количеством ацетона и получают 116 мг хлорида АМ 374.

Микпочттялитт чет кчю ппп6у ппт отптт. т т путем осаждения из водного раствора ацетона и высушивания осадка в глубоком вакууме (10 — мм рт. ст.) при 100 С s течение двух суток.

Приготовленный таким

АМ 374 имеет следующий став (вес. ):

Углерод

Кислород

Азот

Хлор

Вочород

10 (г)й 106+-2.8 (с=!,057. в воде). Максимум ультрафиолетового спектра приходится на:

282 ммк (Е1,,, =42) в кислых растворах, 1":

1 ;

282 ммк (Е1, „=39,5) в нейтральных растворах, 1:

305 ммк (Ет, „=52) в основных растворах, 1";

sh 260 ммк (Е1,,, =-92) в основных растворахх.

Спектр поглощения хлоридом AN 374 инфракрасного излучения в гранулах КВг, приготовленных стандартным методом, имеет следующие длины волн (мк): 3,0; 3,27: 3.40;

25 5.75 sh.. 5,90 sh: 5.98: 6.15: 6.28: 6.65; 6.82 sh;

7.03; 7.15: 7.50; 7.6 : 8.25: 8.60: 8,83: 9.42; 9.70;

9,8R: 10.45 sh: 1.05; 11.9; 12,3; 13,3: 14.37.

Продукт гидролиза основного АМ 374 в кислой среде.

30 1 г базового антибиотика AM 374 раствпояют в 7.5 мл кттпящей воды. и 3 раствоп добавлятот 1.25 мл 5 í. соляной кислоты. Полученный раствор кипятят 2 — 3 мин. зятем чобавляют 2 мл 3 н. соляной кислоты. После охлаждения раствор Фи "IbTpvIoT и промывают осадок 3 мл 5 н, соляной кчслоты. Да.чеp осаток снова растворяют в воле и коттттентрттруют до остатка. Эту операптпо осуществляют еще дважды. после чего остаток осаждают пз вод40 ного паствопа ацетона. и по,чучают 516 мг прпчукта гттдпплттза АМ 374 в кислой спсле.

М11кроаналтттттческую пробу готовят, как указано выше.

Полученный пполукт гттдпо,лиза AN 374

45 имеет следующий элементар: ый состав (вес о/о )

Углевод 52.50

Кислород 25,48

Азот 8.32

Хлор 7,10

Водород 6.60. ()D = — 69+-3,6 (с=0,839, в воде). Максимум ультрафиолетового спектра приходится на:

280 ммк (Е1,,, =46) в кислых растворах, 1.

280 ммк (Ет,, —— 51,5) в нейтральных растворах, 1".

60 300 ммк (E I„, = — 86) в основных раствора, sh 260 ммк (FI„, =143) в основных раст1" ворах.

Спектр поглощения продуктом гидролиза

АМ 374 инфракрасного излучения в грану469265

12

20

Таблица 3

Коэффициентт Увеличение

Вьокивa- I п нвеса

Кол чество

Доза Привес за керма (г1 часте;"1, млн. 20 суток, г привеса

Отноп ение веса корма к привесу, о

Добавка в корм емости

29 30

30 30

39 40

18 20

1,70

1,62

1.75

1,63

266

284

288

302

ЛМ 374(H)

ЛМ 374(Н>

6,8

4,9

4,9

2,0

0,5

1,2

0,3

0,1

0,5.

355

40 лах КВг, приготовленных стандартным с:io<:пб",. . i имеет ."..fry юп(пе лл.шы олн (i :<): 3,0; „:0 .h; 3.-"3; 5.75 в1т; БЯ2 sh:, 6 0; 6.::5 h: 6.25;

6, 8 sh; 6,68; 6.85; 7,03; 7,18; 7,5; 7,67; 7,95 з1ц

830; 8,55sh; 886:, 915; 945; 99; 1045

11 1. 11 55 с1q 11 g. 13 1 1 4

Предлагаемый антпопотш< предназначен в качестзе добавки к корму пли питью для домашних животных и птицы.

П р ii м с р 1. Основной рацион домашней

I тпцы включает следующие компоненты (г/кг живого веса):

Кукурузное зерно:восковой спелости 514

Масло соевое (44% ) с мукой 300

Клейковнна зерна с мукой 50

Рыбная м ка Менхадена (60%) 50

Жир (NRG-50) 40

Оо".--- я<сцпяя люпсрповяя мука (17% )

Известь (33% кальция)

Дикальцнйфосфат

Хлористый натрий

Минеральные примеси

Витамины 5.

Пример 2. Опыт проводят аналогично примеру 1. Рацион цыплят содержит (%):

Зерно кукурузное восковой спелости 51,4

Масло соевое (44%) с мукой 30,0

Клейковина зерна с мукой 5,0

Рыбная мука Менхадена (60%) 5,0

5Кир (М1<Ст-50) 4,0

Обезвоженная люцерновая мука (17% )

Известь (33% кальция)

Дикальцпйфосфат

Хлористый натрий

Минеральные примеси

В и та м .. .. ы

В состав минеральных примесей входят (%): кальций 25,5, марганец 6,0, железо 2,0, цинк 2,0, йод 0,12, кобальт 0,2.

Используют комплекс витаминов в следующих количествах (на 1 кг корма): витамин

А 3300 ед.; витамин Дз 1100 ед.; витамин

F, 22,,2 2 еед .; хлористый холин 500 мг; О? -метионин 500мг; этоксикин 125г; мгиниаци 27,5г; пантотеновая кислота 8,7 мг; рибофлавин

4,4 мг; фолиевая кислота 1,43 мг; менадпон

1,1 мг; витамин В;з 0,011 мг.

Б cîñiàв пiíеральных примесей входя1 . ): мя,-:янсц 6 О, йо", 0,12. железо 2,0, медь

О,;":. цинк 2.0, коояльт 0.02 и кальций 25.5.

C.»i ñn витаминов содержит на 1 кг корма:

5 125 мг бутилированчого гидрокситолуола;

50 мг DL-метионпна; 3300 ед. витамина А;

1100 сд. витамина Дз, 2,2 ед. витамина Е; !! ., и, -гямпн В .; 4,4 мг miбоди анина; !

27.6 мг нпяцпна; 8,8 мг гантотсновой кислоты;

10:;0»: хлоппля;:о ппа; 1,43 мг Фолневой кпс.-:о, ы 1.1, . i ;iiÿäöîè;. бпсульфпта натрпя—

lIn 5 Г зерна ку к lру зы.

Суточных цыплят (б самцов и б самок) по15 мещают in обогреваемые брудеры в помещении, в котором поддерживается температура

-24 С. Цыплят взвешивают перед началом экс ерпмента и по истечении 20 суток. Корм и воду подают adlihitum.

Контрольная группа птиц получает лишь указанный выше корм, а остальные помимо него получают антибиотик АМ 374 (Н-форма) в различной дозе. Результаты приведены в

25 табл. 3

1 сз " льт" ты прпвсдепы в тяо,л, 4.

Антибиотик АМ 374 удобно применять в виде стандартных фармацевтических таблеток, 30 каждая из которых содержит (мг):

АМ 374 50

Лактоза 225

Кукурузный крахмал (для смеси)

Кукурузный крахмал (для пасты) 25

Стеарат магния 5

Для приготовления пасты 100 г кукурузного крахмала суспендируют в 800 мл воды, после чего нагревают с перемешивянием. Пасту применяют для гранулирования смешанного

45 порошка. При необходимости используют дополни тельное количество воды. Влажные гранулы пропускают через экран № 8 и высушивают при 120 С. Сухие гранулы пропускают черсз экран № 16 и смазывают стеаратом

50 магния. Затем гранулированный материал прессуют в таблетки весом 355 мг на соответствующей таблеточной машине.

469265

14

Таблица 4

Количество

Доза Привес за корма (г) частей, млн.: ?О суток, г привеса !

Коз ффи- i Отношение циент Увел. ление веса корма зы:кива- I привеса, " призссУ, емости д!!

Добавка в корм

29 30

28 30

30 ЗО

30 30

28 ЗЭ

39 40 0 20

20 20

18 20 0 0

13,3

7,6

4,9

6,9

Пенициллин

Паизон

АМ 374(Н)

А 290Д

Пенициллин

Паизон

АNi 3741H)

А 290Д

18,4

12,0

6,8

6,0

10.0

0,3

4,9

8,3

2,9

0,0

7,4

2 9 ч а н и е. Увеличение привеса в процентах рассчитызают следуюгцим образом:

315> 100 — — 100 =- 18,4.

266

Отношение веса корма к привесу в процентах рассчитывают аналогично:

При ме

1,70к 100

100 = 13,3.

1,50

Предмет изобретения

141

Составитель М. Дранишников

Редактор H. Спиридонова Техрсд Г. Дворина

Корректор Е. Рогайлина

Заказ 1820/3 Изд. ¹ 1475 Тираж 529 Подш.снос

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4!5

Типография, пр. Сапунова, 2

266

3I5

298

284

282

288

217

289

302

312

Активный ингредиент — АМ 374 — может быть расфасован и в капсулы с 71вердой оболочкой. Оптимальный состав ингредиентов в капсуле следующий (мг):

АМ 374 50

Лактоза 90

Стеарат магния 1

Пример 3. Для приготовления раствора, содержащего АМ 374, используют следующие

<Омпоненты, %:

АМ 374 1,00

Гель магний-алюминиевого силиката 0,50

Сахароза 60,00

Метилпарабен 0,80

Пропил парабен 0,02

Вкусовая добавка По мере надобности

Дистиллированная вода До 100.

Из приведенных примеров видно, что получаемый по предложенному способу антибио1,70

1,50

1,58

1,62

1,59

1,75

1,70

1,63

1,70 тик является ценной добавкой к корму пли питью для домашних животных и птицы, Способ получения антибиотика на осно ве культивирования продуцента 11з группы Stlep10 10m) ces B азробных A 0.70BII Ix на жпдк011 Iiliтятельной срсде, содержящс11 источники усВОЯемого УглеРОда, 3 свОЯемого азота ll ми11еральные соли, прп температуре 25 — 29 С в течение времени. необходимого для придания

15 среде существенной антимикробной активноcTII, включающий выделение автибиотпка и при необходимости его очистку, о тл и ч а юшийся тем, что, с целью получения антиб:iотика, предназначе1гного в качестве добазки

20 K I<0 p xi ) I II II 711 ных пли пт:1цы, в качсстзе продуце IT3 используют Stl.eptomyces eblil ospol eIIs u. sp. (ХКК1 3582).