Способ получения пироглутамил-серил-глицинамида

Способ получения пироглутамил-серил-глицинамида

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

.f

"Ф - - ° 1

О П И С А" Й Й. Е.

ИЗОБРЕТЕНИЯ

tt tt 469687

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 27.07,73 (21) 1939296/23-4 (51) М, Кл. С 07с 103/52 с присоединением =-аявки №

Государстсенный комитет

Соеета Министров СССР (23) Приоритет

Опубликовано 05.05.75. Бюллетень ¹ 17

Дата опубликования описания 31.07.75 (53) УДК 547.964.4.07 (088.8) ло делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Н. А. 1Одаев, 3. Ф. Утешева, 1О. П. 1цвачкин и А. П. Смирнова

Институт экспериментальной эндокринологии и химии гормонов AMH СССР (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПИРОГЛУТАМИЛСЕРИЛГЛ И ЦИ НАМ ИДА

Изобретение относится к спосоО получения путем полного химического синтеза пептида, являющегося стимулятором освобождения ростового гормона, представляющего собой пироглутамил-серил-глицинамид, который может найти применение в медицине.

Указанный пептид может быть выделен из гипоталамуса животных.

Предлагаемый способ получения пироглутамил-серил-глицинамида основан на известных в химии пептидов методах с использованием доступных производных глицина, серина, глутамина или глутаминовой кислоты или пироглутаминовой кислоты.

Способ заключается в том, что известным методом, например карбодиимидным, конденсируют в любой возможной последовательности в растворе или гетерогенной смеси соответственно защигценные или незащищенные по аминогруппе, карбоксилу и функциональным группам производные аминокислот: глицина, серина, глутамина, глутаминовой или пироглутаминовой кислоты, причем в любой момент синтеза амидируют остаток глицина и образуют остаток пироглутаминовой кислоты с последующим удалением защитнь х групп и выделением целевого продукта известными методами.

Реакцию конденсации мо>к to проводить при использовании любых извести х реагентов, обесп чивающих образование петидных связей, например различных карбодиимидов, at тивированных эфиров, азидов и смешанных

a;; t идридов.

5 Обы шо синтез ведут с применением нерастворимого или растворимого полимерного носителя. Все азпгиокислоты, кроме глицина, имеют 1 -конфигурацию.

Пример. Синтез пироглутамил-серил-гли10 цинамида.

В круглодонную колбу, снабженную обратным холодилыtèttîì, вносят 20 г хлорметилированного сополимера стирола с 1% дивинилбензола (содержа ие хлора 7%), прибавля15 ют 150 мл безводного этанола, 6,5 г трет-бутилоксикарбонилглицина и 7,5 мл безводного триэтиламипа. Реакционную смесь нагревают при температуре кипения 48 час, поддерживая рН 7,0 — 7,5. Затем твердую фазу отде20 ляют фильтрованием, вещество промывают на фильтре безводным этанолом (3 Q 100 мл), хлористым метиленом (3 Q 150 мл), метанолом (3 X 150 мл), диэтиловым эфиром (1 150 мл), петролейным эфиром

25 (1 ; 50 мл) и высушавают в вакуум-эксикаторе над пятиокисыо фосфора в течение 30 мин.

Сухое вещество помещают в реактор, прибавляют к нему 200 мл 10%-ного раствора хлористого водорода в сухом диоксане и смесь

30 выдерживают 30 мин при 20 С (стадия де469687

Заказ 1823)5

Подписное

Изд. № 668

Тираж 529

Типография, пр. Сапунова, 2 блокирования). Далее смесь фильтруют, вещество в реакторе промывают последовательно сухим диоксаном (3 Р, 200 мл), метанолом (3 )(200 мл), диэтиловым эфиром (3 ); 200 мл), петролейным эфиром (3 )() 200 мл) и высушивают 30 мин в вакууме.

После этого к веществу приливают 20 мл

3%-ного раствора триэтиламина в диоксане, смесь выдерживают 10 мин при 20 С (стадия нейтрализации) и фильтруют.

Вещество в реакторе промывают последовательно хлористым метиленом (3 к, 200 мл), метанолом (3 )(200 мл), диэтиловым эфиром (3 к, 200 мл), петролейным эфиром (3)(200 мл), после чего высушивают в вакууме в присутствии пятиокиси фосфора в течение 30 мин. Затем при 0 С приливают раствор 8,6 r трет.-бутилоксикарбонил-О-бензилсерина в 150 мл хлористого метилена, смесь выдерживают 10 мин и прибавляют к ней предварительно охлажденный раствор 6 r дициклогексилкарбодиимида в 50 мл хлористого метилена. После перемешивания смесь выдерживают 18 час при 20 С, затем фильтруют, промывают вещество в реакторе смесью хлороформ-метанол (2: 1) (3 Q 200 мл), метанолом (3 )(200 мл), диэтиловым эфиром (3 )(200 мл) и петролейным эфиром (3 200 мл), после чего проводят описанные выше стадии деблокирования и нейтрализации. Далее прибавляют при 0 С раствор 10,4 г п-нитрофенилового эфира трет.-бутилоксикарбонилглутамина в 220 мл безводного диметилформамида, смесь выдерживают 24 час при

20 С, фильтруют и последовательно промывают диметилформамидом (5 X 250 мл), метанолом (3 )(200 мл), диэтиловым эфиром (3 Q 200 мл), петролейным эфиром (3 К 200 мл), после чего проводят стадии деблокирования и нейтрализации, как описано выше. К полученному веществу приливают

250 мл насыщенного при 0 C раствор аммиака в безводном метаноле и смесь выдерживают

48 час при 5 С, после чего нерастворившееся вещество отфильтровывают, промывают безводным метанолом (3+200 мл), промывную жидкость присоединяют к основному фильтрату и объединенный раствор упаривают в вакууме.

Остаток растворяют в 40 мл метанола и полученный раствор выливают в 500 мл сухого эфира. Выпавшее в осадок вещество отделяют и высушивают в вакууме. Затем 1 г полученного вещества растворяют в 100 мн метанола и уксусной кислоты (1: 1), к образовавшемуся раствору прибавляют 200 мг свежеприготовленной палладиевой черни и смесь гидрируют 2 час при 20 С и атмосферном давлении. Далее палладиевый катализатор отфильтровывают, раствор упаривают в вакууме и от остатка трижды отгоняют порции метанола (50 мл) для удаления следов уксусной кислоты. После этого остаток растворяют в

40 мл метанола и раствор приливают к 400 мл эфира. Выпавшее в осадок вещество отделяют, высушивают и растворяют в 50 мл воды.

Полученный раствор кипятят 10 час в колбе с обратным холодильником, а затем упаривают. Следы воды отделяют азеотронной отгонкой с этанолом, остаток обрабатывают кипящим этилацетатом (50 мл )< 2), растворяют в 40 мл метанола и раствор приливают к 400 мл безводного диэтилового эфира. Выделившееся в осадок вещество отфильтровывают, промывают и высушивают. Полученное вещество подвергают противоточному распределению в системе н.-бутанол — уксусная кислота — вода (4: 1: 5) (500 переносов, К. 0.16) . Затем 220 мг образовавшегося вещества растворяют в 2 мл воды и водный раствор пропускают через колонку (30 Q 2 см) с ионообменной смолой Дауэкс 50 р, 8 (Н+форма), собирая фракции по 10 мл. Фракции

5 и 6 объединяют, упаривают в вакууме, остаток растворяют в 20 мл метанола и высушивают прибавлением к 200 мл эфира. Получают 165 мг (73%) индивидуального пироглутамил-серил-глицинамида (РФРГ), Rf

0,26 (н.-бутанол — уксусная кислота — вода, 4: 1: 5); Rf 0,51 (н.-бутанол — пиридин — уксусная кислота — вода, 15: 10: 3: 12) (БХ); Rf

0,38 (вт.-бутанол — муравьиная кислота — вода, 75: 13,5: 11,5), 0,60 (н.-бутанол — пиридин— уксусная кислота — вода, 15; 10: 3: 12), 0,43 (н,-бутанол — уксусная кислота — вода, 4; 1:1) (ТСХ), Электрофоретическая подвижность—

0,2 (система пир идин — уксусная кислота— вода, рН 6,5, стандарт отнесения гистидин); (lD — 34 (с 1,0, вода); (а1 о — 23 (с 1,0, уксусная кислотa). Аминокислотный анализ:

Гли 1,0; Сер 0,82; Глу 1,0, Предмет изобретения

1. Способ получения пироглутамилсерилглицинамида, отличающийся тем, что конденсируют в любой возможной последовательности в растворе или гетерогенной смеси соответственно защищенные или незащищенные по аминогруппе, карбоксилу и функциональные группам производные аминокислот: глицина, серина, глутамина, глутаминовой или пироглутаминовой кислоты любым известным методом, например карбодиимидным, причем в любой момент синтеза амидируIQT остаток глицина и образуют остаток пироглутаминовой кислоты с последующим удалением защитных групп и выделением целевого продукта известными методами.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что процесс ведут с использованием нерастворимого или растворимого полимерного носителя.

3. Способ по пп. 1 и 2, отл и ч а ю щи и ся тем, что в качестве конденсирующего агента используют симметрично или несимметрично

N,N -дизамещенные карбодиимиды.