Способ превращения бревикарина в бревиколлин

Способ превращения бревикарина в бревиколлин

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ИИЕ

О П пц 469744 союз Советских

Социалистических

Республик

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 29.03.73 (21) 1897682/31-16 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 05.05.75. Бюллетень ¹ 17

Дата опубликования описания 08.08.75 (51) М. Кл. С 12d 13/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР до делам изобретении н открытий (53) УДК 615.32(088.8) (72) Авторы изобретения Г. К. Скрябин, Л. А. Головлева, И. В. Терентьева, Г. В. Лазурьевский, Г. А. Садырина, Г. E. Шмотина, М. Ю. Нефедова, В. М. Аданин и И. И. Червин (7I) Заявитель Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР (54) СПОСОБ ПРЕВРАЩЕНИЯ БРЕВИКАРИНА В БРЕВИКОЛЛИН

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к получению медицинских препаратов.

Известен способ получения бревиколлина из листьев осоки парвской.

Целью изобретения является способ превращения бревикарина в бревиколлин.

Для достижения этой цели найдены активные культуры грибов из рода Penicillium u

Rhizopus. Трансформацию осуществляют с помощью культуры Penicillium Skrjabinii Schmotina et Golovleva sp nov ИБФМ F 382 или

Rhizopus oryzae Went et Prin ИБФМ F 386.

Культуру выращивают на среде, содержа цей источник углерода, азота и минеральные соли. Процесс идет при атмосферном давлении, температура 24 — 28 С.

Описание штамма Penicillium sl rjabinii

Schmotina et Golovleva sp nov ИБФМ F382.

Гриб выделен из почвы близ поселка Мухинка (под Благовещенском) Амурской области, образцы почвы собраны в 1971 году Л.А.

Головлевой.

Культура F 382 хранится в коллекции культур микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР.

Колонии на агаризованной среде Чапека на

12 — 14 день 3,8 — 4,6 см в диаметре, бархатистые, радиально-бороздчатые, бугристые, в центре морщинистые, бледно-розоватые, с краем зернистым и гладким, слабо зональным, синевато-зеленым, зеленым, матово-зеленым или хризолитовым и бесцветным ореолом погру5 женного мицелия; обратная сторона кремовая, с. возрастом переходящая в бледно-терракотовую, с лимонно-желтой, серо-желтой и белесоватой прикраевой и краевой зоной, радиальноскладчатая. Эксудат бесцветный или кремо1о вый, ограничен или отсутствует. Запах приятный, грибной (напоминает запах сырых груздей) .

Конидиеносцы прямые, простые с расширенным апикальным концом (4 — 5 р), силь15 но бородавчатые, возникают от субстрата или как боковые ветви от воздушных гриф, 27—

500 (600) 2,1 — 3 р,. Кисточки комнактныс, преимущественно бивертициллятпыс на фоне моновертициллятных и асимметричных (с од2О ной боковой веточкой); веточки, прижатые или отходящие, по одной в кисточке, бородавчатые

26,4 — 32 (40) Q2,4 — 3 (3,2) ц. метулы параллельные или слегка расходящиеся, вздутые на апикальном конце (4ц), бородавчатые (3 — 4—

25 6 — 8) 7,7 — 16,1 (— 20,3) 2,1 — 2,8 (— 3) р, стеригмы в компактной кисточке (6 — 8), бутылковидные с конидиерождающей трубкой до

2р,, бородавчатые 7,7 — 10,5 (19) ;2,1 — 3 (3,5) ц; конидии эллиптические, но встречаЗо ются и круглые или почти такие, бородавча469744

Составитель С. Малютина

Корректор А. Галахова

Редактор Т. Каранова

Техред А. Камышникова

Подписное

Тираж 529

Заказ 1922/13

Изд. № 669

Типография, пр. Сапунова, 2 тые 1,8 — 2,4)с,3,5 (5,0) и, образуют цепочки

50 — 100@ длины.

Колонии на сусло-агаре на 10 день 4,7—

5,4 см в диаметре, прижатые, зернистые, с несколько приподнятым бархатистым центром и неравномерно радиально расходящимися от него и постепенно сужающимися к краю колонии выпуклыми пушистыми секторами. Цвет колонии — смесь темно-зеленого со свинцовосерым, секторов — свинцово-серый, центра и узкой краевой полосы — белый; обратная сторона в центре радиально-складчатая, сигарного цвета. Эксудат ограничен, быстро обрастает мицелием, образуя бугорки. Запах приятный, грибной.

Описание штамма Rhizopus oryzae Went et

P пп И Б ФМ F 386.

Колонии гриба высокие, пушистые с хорошо развитым воздушным вегетативным мицелием, серые в центре и темно-серые или буровато-серые по краям, спороносящие. Стилоспорангии вариабельны по размерам 49,5—

231п, и более, в зрелости темные с расплывающейся в молочной кислоте оболочкой. Колонка шаровидная 51 — 165п, в дм или сплюснутая 12 10 р,. Лпофиза блюдцевидная. Стилоспорангиеносцы прямые или извилистые 10—

20 и, в дм, простые, часто и с раздвоенной, тройчато- или неправильно мутовчаторазветвленной верхушкой и обычно с промежуточным вздутием в месте ответвления, буроватые до 500ц дл., отходят по 1 — 3 от шейки ризоида или столоновидных гиф.

Спорангиеспоры шаровидные, эллиптическишаровидные, эллиптические неправильноугловатые. 3 — 7 — 8 и, в дм., часто прорастают, находясь еще в стилоспорангии, от чего последний приобретает вид клубочка. Хламидоспоры шаровидные, эллиптические, цилиндрические 49,2+23,1 п„промежуточные и одиночные.

Культура хранится под Хо F386 в коллекции культур Института биохимии и физиологии микроорганизмов AH СССР.

Пример 1. Культуру Penicillium sp. выращивают в течение двух суток на агаризованной среде Чапека состава (в г/л):

МаМОз 3,0

КСI 0,5 мдзо4 0,5

КН Р04 1,0

FeSO4 0,01

Сахароза 20

Вода дистиллированная до l л.

Трансформацию бревикарина осуществляют на среде Чапека, разлитой в колбы Эрленмейера на 250 мл по 50 мл. В качестве ростового

50 субстрата используют сахарозу. В качестве трансформируемого — бревикарин (250 мг) .

Культивирование производят в термостате, в покое при температуре 24 — 29 С, в течение

6 — 7 дней. Н а седьмые сутки культур ал ьную жидкость центрифугируют, упаривают фильтрат в вакууме досуха. Сухой остаток обраба тывают теплым спиртом, тердый остаток после обработки спиртом растворяют в 1N соляной кислоте. Отфугованный мицелий промывают несколько раз соляной кислотой. Кислотные растворы объединяют, подщелачивают аммиаком до рН 9 и извлекают эфиром 7 раз по 10 мл. Эфирный раствор промывают водой, эфир отгоняют в вакууме. Остаток растворяют в небольшом количестве метанола и хроматографируют на пластинах (12)(15) в тонком незакрепленном слое окиси алюминия (II степ. активности) в смеси растворителей хлороформ с 4% метанола, параллельно со свидетелями — бревиколлином и бревикарином. В УФ-свете обнаруживают две резко различные зоны: одна — соответствующая бревиколлину (Rf 0,56) и другая — «пристартовая», размытая и неоднородная полоса, включающая зону неизменного бревикарина. Полосу, соответствующую бревиколлину, собирают, и продукт элюируют бензолом. Растворитель отгоняют в вакууме. Плотный вспенившийся остаток (100 мг, 51,3%) кристаллизуют дважды из ацетона.

После выделения описанным способом продукт трансформации анализируют различными методами: температура плавления 223—

224 С, т. пл, смешанной пробы не дает депрессии, угол вращения в спирте (ао) — 144, УФ-спектр — Л„„,, 222, 288, 339 и 532 нм в спирте и Лм,в, 262, 306, 372 нм в спирте, подкисленном НС1. ИК-, ЯМР- и масс-спектры полностью соответствуют спектрам бревиколлина.

П р и мер 2. Культуру гриба Rhizopus oryzae выращивают в течение двух суток íà агаризованной среде Чапека. Трансформацию бревикарина осуществляют на среде Чапека, разлитой по 50 мл в колбы Эрленмейера на

250 мл, с 1% сахарозы и 250 мг бревикарина.

Процесс трансформации и выделение готового продукта ведут по методике, описанной в примере 1.

Предмет изобретения

Способ превращения бревикарина в бревиколлин, отличающийся тем, что трансформацию осуществляют с помощью культуры

PenicilIium Skrjabinii Schmotina et Golovleva

sp nov ИБФМ F 382 или Rhizopus oryzae Went

et Рпп ИБФМ F 386.