Способ стимулирования образования -эндотоксина
Иллюстрации
Реферат
g J .=- б
О П И С А Н И Е < >47I099
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
Сеюа Советских
Социалистическим
Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 09.02.73 (21) 1882392/30-15 с присоединением заявки №вЂ” (32) Приоритет—
Опубликовано 25.05.75. Бюллетень № 19
Дата опубликования описания 27,12.75 (51) М. Кл. А 01п 15i00
С 126 7/00
Государственный комитет
Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 576.851.5:
:576.8.097. .29 (088.8) (72) Автор изобретения
Г. M. Иванов
Красноярский государственный университет (71) Заявитель (54) СПОСОБ СТИМУЛИРОВАНИЯ ОБРАЗОВАНИЯ б-ЭНДОТОКСИ НА
Изобретение относится к технической микробиологии, а именно,к методам химического управления механизмами биосинтеза и может быть использовано для повышения титра кристаллов 6-эндотооос1и на в бактер иальных препаратах, изготовляемых из бактерий пруппы Bacillus thuringiensis.
Известен способ ловышения титра кристаллов б-эндотоксина,в бактериальных зтрепаратах:путем приме нен ия благоприятных для продуцзврова ния кристаллов питательных сред.
Цель изобретения — увеличение размеров кристаллов б-эндотоксина и счх титра.
Для этого в известные питательные середы, благоприятные цля кристаллообразования, например, картофельную среду (картофельный отвар — 1 л, пептон — 10 г, сахар — 5 г, поваренная соль — следы, сухой агадир — 20%, рН вЂ” 7,2); минеральную среду (пептон—
30 г, Na2HPO4 — 5 г, КН2Р04 — 1 г, NaCl—
2 г, MgSO4 — 0,1 г, источник, сахара — 2 г, агар — 1,5%,,вода — 1000 мл); среду для промышленного разведения (сахароза — 2,5%, 1 ку курузный экстракт — 2,5 — 3,5%; КН Р04—
0,68% и др.) вносят, производные акридина (акрид иновый оранжевый, акридиновый желтый) в концентрации 5 — 100 мкгlмл.
Увеличение .размеров иристаллов указывает на повышение активности культур Bacillus thuringiensis.
Число кристаллов,на одну эндоспору увеличиваетоя от 1,16 до 1,69 (при концентрациях краоителей от 5 до 100 мкг/мл). У штаммов (слабых звродуцентов,кристаллов) это числ.) увеличивается от 0,56 до 1,03.
В таблице приведены результаты,измерений размерсв кристаллов 6-эндото)ксина, синтезированного Bacillus thuringiensis, в опытах с применением акридинового желтого (биомеприческая обработка приведена по Н. П.
Плохинскому (1961), td определена к контролю) .
Макси малино переносимые концентрации акриди новых красителей .для разных штаммов Bacillus thuringiensis различны и увеличиваются в зависимости от содержания в питательной среде усвояемых сахарав.
471099
12,01
tiI = 2,6
13,3) v =160+160 — 2=318
v =159+159 — 2=316
Варианты опытов
Параметры кристаллов
md т (лж) Контроль
160
0,54
0,0213
0,0216 ширина длина
160
1,24
12,7
0,0263
50 мкг/мл
160
0,03383
0,03275
0,97
0,43 ширина длина
160
1,62
0,0246
0,38
1 1,6
100 мкг/мл
159
0,0157
0,0259
1,02
0,48
0,02646
0,03372
18,3 ширина длина
1,85!
0,61
18,2
Размеры )ористаплло, синтезированных при действии акридинового красителя, отличаютоя от размеров кристаллов, синтезированных в среде краоителя.
Пример осуществления способа.
1. С использованием агаризованной картоф ел ь ной ср еды.
Готовят растворы п роизводных акриди а (начрпмер акридинового желтого) с концентрацией 50 мг/мл, 100 л)г/мл и 200 мг/мл. До
)стерилизации приготовленной картофельной среды на 1 л ее (середы) добавляют 1 мл производного акридина с концентрацией
50 л)г/мл и получают .картофельную среду, содержащую 50 мкг/,ил производного акридина, или добавляют 1 мл раствора производ ного акридина Iñ концентрацией 100 мг/мл и ,получают картофельную среду с конце нпрацией 100 мкг/л л п роизводного а кридина, либо добавляют 1 мл раствора производного акридина с концентрацией 200 мг/л)л и получают .картофельную среду Ic ко нцентрацией
200 мкг/мл производного ацридина.
Внесенный производный акридина перемеБ)ивают. Середы стерилизуют при .да влении
1 атм:в течение 20 мин. Готовую питательную среду разливают .в чашки Петри, делают покев Bacillus thu).ingiensis и культивируют в
aoicолютной темноте,в течение 10 суток при температуре 30 С.
Результаты: и н =екти ци)дн ость культур ы
Bacillus thuringiensis, выращенный на картофельной среде с 75 мкг/мл акридинового оранжевого, увеличивается lno сравнению с инсекпицидностью этой .культуры, .выращен ной на картофельной среде,,не содержащей ак)ридиновый оранжевый, на 22,3% дополнительноо.
2. С использованием жидкой питательной среды,для;промышленного разведения.
V, 1 л этой среды добавляют 1 мл раствора акридинового оранжевого концентрацией
50 мг/мл II получают среду с концентрацией акридинового оранжевого 50 мкг/мл. Для получения среды, содержащей 75 мкг/мл, поступают следующим образом: к 1 л середы для промышленного .разведения добавляют 1 мл раствора акридинового оранжевого концентрацией 75 лг/л)л. Акридиновый оранжевый перемешивают со средой. Среду стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм в течение 30 мин.
Для saiceIIa 100 мл питательной среды берут 1 мл инокулята, содержащего 15 10 спор в 1 мл. Культивирование Bacillus thuringien15 sis ведут на магнитной качалке в абсолютной темноте в течение 10 суток при темпе ратуре 30 С. Затем измеряют средний объем кристаллов б-эндотоксина, Определяют .отношение числа, кристаллов к числу спор и титр кристаллов б-эндотоксина.
Объем кристаллов .на среде для промышленного разведения, содержащей 50 мкг/л л акридинового оранжевого, в 1,2 раза оольше, чем объем кри сталлов б-эндотоксина на среде, не содержащей акридиновый оранжевый; объем 9cpHIcTaJIJIoâ б-эндотоксина яа среде с
75 мкг/мл а!кридинового оранжевого в 1,7 раза больше, чем на среде без акридичового оранже.вого.
Отноше ни е числа,кристалло)в к числу спор на среде оез акридинового оранжевого равно
1,2; на среде, содержащей 50 мкг/мл акридинового оранжевого, равно 1,5 и на среде с
75 л кг/мл акриди|но)вого оранжевого — 1,7.
Титр, кристаллов б-эндотоксина на среде длч промышленного раз ведения, содержащей
50 мкг/мл акридинового оранжевого, увеличился по сравнению с титром кристаллов на среде оез акридино вого оранжевого в 1,6,ра40 за, а на среде с 75 л)кг/мл а:кридинового о ра1нжевого увеличился .в 2 раза.
471099
Составитель Г, Иванов
Техред Л. Казачкова
Корректор И. Симкнна
Редактор Н. Козлова
Заказ 937/1418 Изд. № 829 Тираж 619 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, )К-35, Раушская наб., д. 4/о
Тип. Харьк. фил. пред. «Патент»
Титр спор в результате выращивания культуры в присутствии акридинового оранжевого не уменьшается,по сравнению с титром спор на среде без акридинового оранжевого, а напротив, имеет тенденцию,к увеличению. Так, титр спор на среде для;промышленного разведения, содержащей акридиновый оранжевый в концентрации от 50 мкг/л1л до 75 мкг/мл, увеличился на 4. 10 — 8. 10 .
3. Стимулирование биооинтеза б-эндотоксина прои сходит также на минеральной среде при добавлении в нее производных акр идина.
Предмет изю бретения
Способ стимулирования юбразова ния б-эндотоксина при;культи вировании Вас111пв thu.
ringiensis .на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и .минеральные соли, отличающийся тем, что, с целью увели10 чения;размеров кристаллов б-эндотоксина,и их титра, в питательную среду дополнительно вносят производные акридина в концентрации 5 — 100 мкг/мл.