Способ получения ферментного препарата для свертывания молока

Способ получения ферментного препарата для свертывания молока

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

!

О П И С А Н И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 07.09.73 (21) 1960071/28-13 с присоединением заявки № (51) М. Кл. С 12d 13/10

ГосУдаРственный комитет (23) Пр, р, Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Опубликовано 25.05.75. Бюллетень ¹ 19

Дата опубликования описания 03.09.75 (53) УДК 577.15.08 (088.8) (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

И. Я. Веселов, T. А. Смирнова и H. А. Балашова

Московский ордена Трудового Красного Знамени технологический институт пищевой промышленности (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА

ДЛЯ СВЕРТЫВАНИЯ МОЛОКА

15

Изобретение относится к ферментной промышленностии, Известны способы получения ферментного препарата для свертывания молока путем культивирования микроорганизмов, относящихся к виду Bacillus polymyxa, на питательной среде, содержащей источники углерода, однозамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний и углекислый кальций, с последующим отделением клеток микроорганизмов от культуральной среды, например центрифугированием и выделением фермента из фугата, например высаливанием сульфатом аммония до концентрации 0,3 — 0,8% насыщения.

Однако такой препарат наряду с молокосвертывающей активностью обладает и высоким протеолитическим действием на казеин.

При использовании этого препарата при производстве сыра образуется мягкое сырное зерно, которое плохо вымешивается.

Цель изобретения — увеличение активности получаемого фермента и снижение активности одновременно продуцируемых протеолитических ферментов.

Для этого из вида Bacillus polymyxa используют штамм 13 — 13, в качестве источника углерода используют крахмал, а в питательную среду дополнительно вводят пептон, двузамещенный фосф ори окисл ый калий, сернокислый марганец и сернокислое железо, при этом указанные компоненты вводят в среду а следующих соотношениях (% ):

Крахмал 2,0

Пептон 1,0

Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,5

Однозамещенный фосфорнокислый калий 0,5

Сернокислый магний 0,05

Сернокислый марганец 0,05

Сернокислое железо 0,001

Углекислый кальций 0,2

Остальное вода

Целесообразно перед отделением клеток микроорганизмов в культуральную жидкость добавлять хлористый кальций до концентрации 0,05 М.

20 Предлагаемый способ заключается в том, что осуществляют глубинное культивирование

Bacillus polymyxa, в частности штамма 13—

13, на питательной среде, содержащей источник углерода, в частности крахмал в коли25 честве 2%, источник азота — 1 % пептона и минеральные соли, такие как КН Р04, К НР04, МдЯ04, Мпс04, — F< 0„, СаС03— в количествах, соответственно равных (%):

0,5; 0,5; 0,05; 0,05; 0,001 и 0,2, в течение 1—

Зо 4 суток.

471380

35

60

0,5

0,05

Затем в культуральную жидкость добавляют хлористый кальций до содержания 0,05 М и центрифугируют; клетки микроорганизмов удаляют.

Из фугата фермент осаждают сернокислым аммонием. Полученный осадок растворяют в воде и диализуют.

Пример Штамм Bacillus polymyxa 13—

13 выращивают на стерильной питательной среде, содержащей 2 /о крахмала, 1 /о пептона, 0,5 /о фосфорнокислого однозамещенного калия, 0,5 /о двухзамещенного фосфорнокислого калия, 0 05 /о сернокислого марганца, 0,05 /о сернокислого магния, 0,001 /о сернокислого железа и 0,2o углекислого кальция в течение 4 суток при 20 — 25 С.

Молокосвертывающая активность полученной культуральной жидкости 3500 ед/мл, протеолитическая — 0,80 ед/мл.

В культуральную жидкость вводят хлористый кальций до содержания 0,05 М и центрифугируют, клетки микроорганизмов удаляют, а из фугата выделяют фермент.

Для этого в него добавляют сернокислый аммоний в концентрации 0,3 — 0,8 насыщения.

Образовавшийся осадок отделяют и растворяют в воде, а затем диализуют против дистиллированной воды при температуре 0 — 5 С в течение 24 час. Полученный диализат лиофильно высушивают. Получают ферментный препарат, представляющий собой порошок светло-серого цвета, растворимый в воде.

Выход препарата по активности 90 /о.

Молокосвертывающая активность препарата 300000 ед/г, протеолитическая — 60 ед/г.

Молокосвертывающую активность определяют по времени свертывания 100 мл молока в 1 мл 1 /О-ного раствора препарата и выражают в единицах активности.

За единицу активности молокосвертывающего (сычужного) фермента принято количество частей молока, свертывающихся одной частью фермента при 35 С в течение 40 мин.

Протеолитическую активность (ПА) определяют стандартным методом на казеине по

Гаммерстену при рН б,5 (рН вЂ” молока).

За единицу ПА принято такое количество фермента, которое за 1 мин при 30 С катализирует переход в неосаждаемое ТХУ состояние количество субстрата, содержащее 1 мк моль тирозина.

Характеристика используемого штамма Bacillus polymyxa 13 — 13.

Штамм выделен из пастер изованного молока.

При определении вида использовали определитель ЦЕОН.

В настоящее время штамм хранится в музее культур микроорганизмов кафедры технической микробиологии МПИПП.

М о р ф о л о г и я. Палочки размером 0,45

+1,75 — 7,0 мкм. Подвижные, перитрихи. Палочки располагаются поодиночке и цепочками. Грамположительны.

Культуральные признаки

При выращивании на мясном, сусловом, крахмало-аммиачном, почвенном агаре — колонии круглые, серовато-белые, мелкозернистые, блестящие, дольчатые.

На косом агаре образует пышный, серовато-белый налет.

При росте на желатине образуются серовато-белые колонии, плоские, расплывающиеся, блестящие, просвечивающие.

На желатине уколом культура образует слабый, белый, толстый, поверхностный налет.

Наблюдается мешковидное разжижение.

На картофеле растет нежным, серовато-белым налетом.

При выращивании бактерий на жидких средах (мясном бульоне по Готтингеру, суслобульоне, средах с углеводами) на поверхности образуется сероватая пленка. Наблюдается помутнение среды и хлопьевидный осадок.

Физиологические признаки

В аэробных условиях сбраживает глюкозу, лактозу, галактозу, ксилозу, арабинозу, мальтозу, сахарозу, фруктозу и крахмал с образованием кислоты и газа. желатин раз>ки>кает.

Крахмал гидролизует.

При росте на средах с крахмалом клетки образуют гранулозу, дающую синюю окраску при обработке иодным раствором.

Является факультативным аэробом, П редм ет изобретения

1. Способ получения ферментного препарата для свертывания молока путем культивирования микроорганизмов, относящихся к виду Bacillus polymyxa на питательной среде, содержащей источник углерода, однозамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний и углекислый кальций, с последующим отделением клеток микроорганизмов и выделением фермента из культуральной жидкости, например высаливанием сульфатом аммония до 0,3 — 0,8 /о насыщения, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью увеличения активности получаемого фермента и снижения активности одновременно продуцируемых протеолитических ферментов, из микроорганизмов Bacillus polymyxa используют штамм

13 — 13, в качестве источника углерода— крахмал, а в питательную среду дополнительно вводят пептон, двузамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый марганец и сернокислое железо, при этом указанные компоненты вводят в среду в следующих соотношениях ():

Крахмал 2,0

Пептон 1,0

Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,5

Однозамещенный фосфорнокислый калий

Сернокислый магний

471380

Составитель Т. Полянская

Текред 3. Тараненко

Корректор Л Денисова

Редактор А. Бер

Заказ 2424(15 Изд. ЛЪ 751 Тираж 529 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 415

Типография, пр. Сапунова, 2

Сернокислый марганец 0,05

Сернокислое железо 0,001

Углекислый кальций 0,2

Вода Остальное

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что перед отделением клеток в культуральную жидкость вводят хлористый кальций до концентрации 0,05 М.