Способ количественного определения индивидуальных классов липидов

Способ количественного определения индивидуальных классов липидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И C А Н И Е (i»47I534

Союз Советских

Социалистических

Республик

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ фЪ (61) Завис имое от авт. свидетельства— (22) Заявлено 19.07.73 (21) 1951309/28-13 (51) М. Кл. 601п 33/06

С 12d 13/08 с присоединением заявки ¹â€”

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР по илам изобретений и открытий (32) Приоритет—

Опубликовано 25.05.75. Бюллетень ¹ 19

Дата опубликования описания 02.02.76 (53) УДК 664.033 (088 8) (72) Авторы изобретения

Д. И. Кузнецов и Л. И. Семенова

Институт питания АМН СССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ИНДИВИДУАЛЬНЫХ КЛАССОВ ЛИПИДОВ

Изобретение относится к аналитической химии.

Известен способ количественного определения индивидуальных классов липидов в биоматериалах, содержащих их, например, в пищевых продуктах, предусматривающий приготовление липидного экстракта из биоматериала, нанесение его на силикагель с последующим хроматографированием и определением количества индивидуальных классов липидов. После хроматографирования пластину с силикагелем обрабатывают или парами иода с последующим элюированием, упариванием .и взвешиванием липидов, или раствором бихромата калия в серной кислоте с целью обугливания липидов и последующего их определения визуальным или денситометрическим способом. Однако этот способ дает большие несистематические ошибки при определении.

С целью ускорения и повышения точности определения, предложено перед нанесением липидпого экстракта в силикагель вводить жирорастворимый азо- или оксазиновый краситель, Из жирорастворимых азокрасителей рекомендовано использовать метиловый красный, из оксазиновых красителей — сульфат нильского голубого.

Количество индивидуальных классов липидов можно определять по методу определения приведенных объемов их пятен.

При использовании жирорастворимых азои оксазиновых красителей интенсивность окрашивания определяемого класса индивидуальных липидов зависит только от их количества и не зависит от степени ненасыщенности.

Пример. Для приготовления пластины (13X18 см) для анализа состава липидов к

1,8 г суспендированного в спирте снлпкагеля прибавляют в виде спиртового раствора 1,5 мг кислотного азокрасителя — метилового крас15 ного (1,5 мл) или 3 мг сульфата нильского голубого (3 мл).

Полученную суспензию перемешивают на магнитной мешалке в течение 3 лшн до получения однородной массы, которую быстро

20 наносят на стеклянную пластину. После высыхания сорбента на воздухе пластины активируют в сушильном шкафу при 110= C в течение 30 мин.

Экстракт липидов в хлороформе плн дру25 гом подходящем растворителе наносят на приготовленную вышеуказанным способом пластину и проводят хроматографирование в подходящей системе растворителей, например гексан — эфир (70: 30).

З0 Пятна индивидуальных липидов проявля471534

S,. отн С ев

«-а b

) 4

Таблица 1

Количество вещества в пробе, мкг

Относительная ошибка в опыте, о о

Номер опыта

Исследуемое вещество найдено найдено найдено взято взято взято

20

Эруковая кислота

Изолпнолевая кислота

Тримаргарпн

34,7

+5,0 — 5,0 — 7,1 — 8,7

+ 15,8 — 5,0

57 60

22,4

41,7

71 — 1,4

21 20

8,8

42 43,5 — 12

+3,6

12кй . а Ь ются введенным в силикагель красителем через 2 — 3 мик после развития хроматограммы.

При введении в силикагель метилового красного наблюдают фиолетовые пятна липидов на малиновом поле пластины.

Для ослабления окраски поля пластину помещают на 30 сек в камеру, насыщенную парами аммиака (интервал рН изменения окраски этого красителя из красной в желтую составляет 4,2 — 6,2) .

При введении в сил ика гель сульфата нильского голубого проявляются светло-голубые пятна липидов на темно-синем поле пластины.

Количественное содержание индивидуальных классов липидов определяют по калибровочной кривой зависимости приведенной площади пятна от логарифма количества (мкг) вещества определенного класса липидов в этом пятне (см. табл. 1).

Прямолинейная зависимость на графике

Другим способом количество индивидуальных классов липидов определяют по способу определения приведенных объемов их пятен, который заключается в следующем: количественное содержание индивидуальных классов липидов находят фотоденситометрическим путем (см. табл. 2). Для этого с хроматографической пластины получают фотокопию контактным способом на штриховую пленку (фототехническая, ФТ-31), которую затем денситометрируют на приборе (например, МФ-4) .

На основании полученных фотоденситограмм строят калибровочную кривую в координатах: приведенный объем пятна (U„„, =

V, ) — логарифм количества вещества

V0 определяемого класса липидов (в мкг).

Объем пятна определяют по уравнению конуса с эллипсом в основании: для логарифма количества вещества сохраняется в интервале 0,6 — 2,0.

Приведенная площадь пятна (S„„, ) является отношением площади пятна от искомого количества определяемого липида (S,.) к стандартной площади пятна (S o), полученной от стандартного количества вещества того же класса липидов (20 мкг), т. е.

Площадь пятна определяют по уравнению

15 для площади эллипса:

20 где а и b — большая и малая оси эллипса.

25 (h — максимальное значение оптическои плотности фотокопии пятна на фотоденситограмме, а и b — основания пиков, полученных при сканировании пятна вдоль направления движения растворителя и перпендикулярно к направлению развития хроматограммы соответственно) .

Открываемый минимум каждого индивидуального класса липидов по измерению площади пятен (I вариант окончания анализа) равен 0,5 мкг, а открываемый минимум каждого индивидуального класса липидов фотоденситометрическим путем (II вариант окончания анализа) — 5 мкг.

Продолжительность анализа с I вариан40 том окончания не больше 40 мин, со II—

2 час.

471534

Таблица 2

Количество вещества в пообе, икг

Относительная ошибка в опыте, %

Номер опыг""

Исследтсмое вещество! (2 3 4 взято найдено (взято найдено ! взято найдено взято найдено

10 9,1

10: 7,6

Эруковая кислота й!аргарпновая кислота — 9 -1-5 2 (— 24 +14 — 12,5 0

39,8

57 57,5

40 40,7

+4,4 +4,7

19

72

-1-1,7 — 8,3

22,8

Изогпшолевая кислота 12 10,5 — 25 — 6,2

67,5

36;,27 (42 40

Трпмаргарип

10 11,2

58 j+12 +143 — 5 — 7,9

24

Предмет изобретения

Составитель Л. Минеева

Тсхред 3. Тараненко

Редактор А. Бер

Корректор В. Гутман

Заказ 1110/1645 Изд. М 750 Тираж 902 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, 5К-35, Раушская наб,, д. 4/5

Тип, Харьк. фил. пред. «Патент»

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает надежное количественное определение индивидуальных классов липидов, является достаточно быстрым и эффективным, а также позволяет получить достоверные данные по количественному соотношению индивидуальных классов липидов при анализе.

1. Способ количественного определения индивидуальных классов липидов в биоматериалах, содержащих их, например, в пищевых продуктах, предусматривающий приготовление липидного экстракта из биоматериала, нанесение его на силикагель с последующим хроматографированием и определением количества индивидуальных классов липидов, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения точности определения, перед на5 несением липидного экстракта в силикагель вводят жирорастворимый азо- или оксазиновый краситель.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что из жирорастворимых азокрасителей исполь1О зуют метиловый красный.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что из жирорастворимых оксазиновых красителей используют сульфат нильского голубого.

4. Способ:по пп. 1 — 3, отличающийся тем, 15 что колпче ство индивидуальных классов липидов определяют по методу определения приведенных объемов их пятен.