Способ совместного получения протамин-сульфата и дезоксирибонуклеиновой кислоты

Способ совместного получения протамин-сульфата и дезоксирибонуклеиновой кислоты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

iii1 473726

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Республик

i/<л+фЬЬ,. (G1) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 15.09.72 (21) 1828486/28-13 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 14.06.75. Бюллетенo ¹ 22

Дата опубликования описания 18.09.75 (51) Ч. Кл. С 07g 7/00

С 07 51/50

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

{53);ч ДК 615.739.6 (088.8) (72) Авторы изобретения

Н. И. Супрунов, В. А. Рассказов, Б. А. Алексеенко и В. И, Головлев (71) Заявитель

Институт биологически активных веществ Дальневосточдщ научного центра АН СССР г (54) СПОСОБ СОВМЕСТНОГО ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТАМИН4

СУЛЬФАТА И ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ

Изобретение относится к области медицины.

Известен способ получения протаминсульфата из молок лососевых рыб, заключающийся в том, что молоки варят, измельчают, обрабатывают ацетоном, экстрагируют серной кислотой и водой, экстракты объединяют, нагревают до 80 С и очищают путем добавления активированного угля, затем раствор обессоливают при помощи ионообменных смол и ацетоном осаждают целевой продукт из элюата.

Известен также способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты, заключающийся и том, что молоки измельчают в присутствии этанола, удаляют спирт, к остатку прибавляют холодную воду и кристаллический хлористый натрий, массу нагревают до 75 — 80 С, отфильтровывают осадок и выделгнот целево . продукт из фильтрата осаждением этанолом.

Предлагаемый способ позволяет одновременно получить протаминсульфат и дезоксирибонуклеиновую кислоту. Это достигается тем, что измельченные молоки, например, лососевых рыб экстрагируют раствором хлористого натрия и выделяют дезоксирибонуклеиновую кислоту из экстракта известными приемами, а отработанные молоки экстрагнруют серной кислото";еляют протаминсульфат известными приемами.

Пример. Отделение РНК. 1 кг свежемороженных молок кеты с содержанием в них протаминсульфата 7,5% и ДНК 21% измельчают в мясорубке, загружают в экстрактор с

5:.е .içëêîé, заливают 3 л 0,15 М раствора хлористого ii;. ::рия и тгцательно перемешивают в течение 10 мин при 0 — 10 С.

Извлечение. Сливают декантацией и промывку проводят еще дважды. Гомогенат про10 пускают через проточную центрифугу и отделяют РНК.

Получение ДНК. После отделения РНК остаток переносят в экстрактор, заливают 5 л

2М раствора хлористого натрия и перемеши15 вают в тече,»е 30 мнн при той же температуре. К раствору добавляют равный объем эта;юла (1: 1) и центрпфугируют. Осадок, содертка. 1нй Д11К, для очистки смешивают в соотношении 1: 1 со смесью хлороформ-изоамило20 вь:,"; спирт (24: 1) н перемешивают в течение

15 мин прн 0 — 10=С. Очистку ДНК проводят трижды. Смесь центрифугируют. Водную фазу оорабатывают этанолом в соотношении

1: 1 и оса>. д,".ют Д1!К. Для удаления хлори25 стого натрия ДНК трпждьг (по 500 мл) про3:ывают 70%-ным раствором этанола, затем

500 мл 96 1 „ -ного э,енола. Сушку ДНК ведут сз cсью сшlрт-эфир (1: 1) . ДНК осторожно переносят ià эмалированный противень и су

30 L a". в сушильном шкафу прп 30 С, 473720

Составитель С. Малютина

Текред 3. Тараненко

Редактор А. Пейсоченко

1(орректоры: T. Фисенко и А. Степанова

Заказ 2259 15 Изд. ¹ 1541 Тираж 529 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Выход целевого продукта от исходного сырого сырья составляет 11,3%.

Получение протаминсульфата. Остаток после отделения ДНК центрифугированием обрабатывают 5% -ным раствором серной кислоты в соотношении 1: 5 (вес: объем) и при медленном перемешивании оставляют на

ЗО мин. Затем раствор подают в центрифугу для отделения кислых белков. Полученный раствор переносят на друк-фильтр и протаминсульфат осаждают ацетоном в соотношении 1: 3. Осадок сырца протаминсульфата очищают многократным растворением в горячей воде, подщелоченной 25%-ным раствором аммиака до рН 8 — 9, и центрифугированием при 100 об/мин.

Очищенный раствор протаминсульфата смешивают с ацетоном в соотношении 1: 2 и препарат отделяют на друк-фильтре. Протаминсульфат сушат в сушильном шкафу при ЗО—

40 C.

5 Выход протаминсульфата от исходного сырья составляет 4,6%.

Предмет изобретения

Способ совместного получения протамин10 сульфата и дезоксирибонуклеиновой кислоты, отличающийся тем, что измельченные молоки, например, лососевых рыб экстрагируют раствором хлористого натрия и выделяют дезоксирибонуклеиновую кислоту из экстрак15 та известными приемами, а отработанные молоки экстрагируют серной кислотой и выделяют протаминсульфат известными приемами.