Способ получения сорбента

Способ получения сорбента

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

- 1 и»» j (;

»»»

ОПИС

ИЗОБРЕТЕНИЯ (i i1 476285

Союз Советских

Социалистнческит

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 08.02.74 (21) 1996709/23-5 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 05.07.75. Бюллетень ¹ 25

Дата опубликования описания 13.11.75 (51) М. Кл. С 08f 27/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР

4l0 делам изобретений и открытий (53) УДК 661.183.1.23 (088.8) (72) Авторы изобретения В, С. Веса, В. И. Палубинскас, A. А. Глемжа и И. П. Беляускайте (71) Заявитель Центральная научно-исследовательская лаборатория Вильнюсского опытно-промышленного завода ферментных препаратов (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА

Изобретение касается получения ионообменных смол, используемых в качестве сорбентов, а такхке применяемых для других целей.

Известен способ получения сорбента путем взаимодействия хлорсульфонированного сополимера стирола и дивинилбензола с аминокислотой — и-аминобензойпой кислотой.

Недостаток этого способа заключается в отсутствии у получаемого при этом сорбента сорбционной способности по протеолитически активным белкам.

С целью создания сорбента с высокой сорбционной способностью по протеолитически активным белкам, пригодного для очистки протеаз, предлагается способ получения сорбента путем взаимодействия стирола и дивинилбензола с аминокислотой — N- (n-аминобензил --1 -тирозином.

Исходный сополимер получают известным способом путем сульфохлорирования сополимера стирола и дивинилбензола.

N- (n-аминобензил) -1 -тирозин получают взаимодействием и-питробензилбромида с метиловым эфиром 1-тирозина с последуюшим восстановлением с помощью гидр осульфита натрия.

Реакцию проводят в среде диоксапа при комнатной температуре и рН среды около 8.

Полученный сорбент промывают щелочью, водой, разбавленной .соляной кислотой и водой до нейтральной реакции.

Синтезированный сорбент обладает высокой активностью в сорбции бактериальных протеаз, продуцпруемых Вас, Subtilis в интервале рН 5,6 — 10, легко отмывается от примеси посторонних белков и хорошо регенерируется. Выход протеаз по активности 61—

100% по белку 95 — 100 »0.

10 Максимальная удельная активность протеаз за одну операцию сорбции — десорбции повышается в 20 раз. Синтезированный сорбент»может быть использован для получения высокоочищенных протеаз, отделения протеаз

15 от других ферментов для хроматографического расщепления paveìàòoâ и в других целях.

Пример.

A. Получение N- (n-аминобензил) -1 -тирози2о на. 23,05 г (0,1 моль) метилового эфира 1тирозина гидрохлорида, 21,6 r (0,1 моль) п-нитробензилбромида, 60 г (0,3 моль) калия двууглекислого, 20 мл воды, 120 мл диоксана, 5 г иодпстого калия перемешивают

25 9,5 час прп 50 С, после чего 2/3 реакционной смеси отгоняют в вакууме. Оставшееся маслообразное вещество растворяют в 50 мл конц, НС1 и добавляют несколько миллилитров воды. При этом выпадает гидрохлорид зо метилового эфира N-(n-нитробензил)-1 -тиро476285

Составитель С. Васюков

Техред 3. Тараненко

Корректор М. Лейзерман

Редактор Л. Ушакова

Заказ 2690/13 Изд. № 863 Тираж 496 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 зина в виде кристаллов, которые перекристаллизовывают из спирта.

Выход 87,6%, т. пл. гидрохлорида 186—

190 С (с разлож.)

Найдено, % . N 8,82.

Вычислено, % . .N 8,48.

3,655 г (0,01 моль) гидрохлорида растворяют в 66 мл смеси спирта с водой (1: 1) и добавляют 3,75 (0,067 моль) едкого кали, раство1ренного в 7 мл воды. Полученный раствор смешивают с 9,5 r (0,057 моль) гидросульфита натрия, растворенного в 33 мл воды, и после нагревания в течение 10 мин при 30 — 40 С отфильтровывают. Растворитель отгоняют в вакууме до появления помутнения. Оставшееся маслообразное вещество отделяют и обрабатывают 100 мл спирта. Полученные кристаллы имеют т. пл, 199,5 С (с разлож.) ..

Найдено, N 8,92.

Вычислено, %.. N 9,33.

Б. Конденсация. К 80 мл раствора, полученного после восстановления 0,012 моль замещенного тирозина без его выделения, добавляют 48 мл диоксана, 1 r хлорсульфонированного сополимера стирола и дивинилбепзола (0,5%). Смесь перемешивают при комнатной температуре 15 час, рН среды поддерживают около 8 2 н. едким натром. Полученную смолу отфильтровывают, промывают 2 н. щелочью, водой, разбавленной соляной кислотой и водой до нейтральной реакции. В

ИК-спектре имеются полосы поглощения в области 1160, 1340, 1600 и 1620 см †. Содерж ание N — 2,76%, аналитическая объемьая емкость (АОЕ) — 2,0 мг. экв./г.

В. Испытание сорбента. 2 г смолы загружают в колонку (Я 1+5 см), уравновешивают 0,01М универсальным буфером с рН 7,0 и наносят 4 мл раствора (в том же буфере) ферментного препарата протосубтилина à — 10 х, полученного из Вас. Subtilis с протеолитической активностью 409 ед./1 г

10 белка при рН 7,5. Концентрация белка

2,5 мг/мл. Протеолитическую активность устанавливают модифицированным методом

Ансона, концентрацию белка — методом Лоури. При элюации 30 мл указанного буфера вымываются протеолитически неактивные белки в интервале рН 5,6 — 10,0, а также красящие вещества, Протеолитические ферменты элюируются 120 мл IN раствором хлористого натрия в том же универсальном буфере.

Общая протеолитическая активность полученного фермента 1606 ед./ 1 г белка при рН 7,5.

Очистку протеолитических ферментов можно проводить также непосредственно из культуральной жидкости Вас. Subtilis и из

25 водного раствора ферментного препарата, Предмет изобретения

Способ получения сорбента путем взаимодействия хлорсульфонированного сополимера

30 стирола и дивинилбензола с аминокислотой, отличающийся тем, что, с целью создания сорбента с высокой сорбционной способностью по протеолитически активным белкам, в качестве аминокислоты используют N- (n35 аминобензил) -L-тирозин.