Способ очистки сыворотки
Иллюстрации
Показать всеРеферат
пп 477580
Со св Советских
Социалистических
Республик
К ПАТЕНТУ (61) Зависимое от патент» (22) Заявлено 29.09.67 (2) ) 1186878/28-13 (5! ) М. Кл. С 12k 5 00 (32) Приоритет 05.11.66 (31) В 897041Va/30х (33) ФРГ
Государственный комитет
Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Опубликовано 15.07.75. Бюллетень № 26 (53) УДК 576.8,097 (088.8) Дата опубликования описания 16.10.75 (72) Автор изобретения
Иностранец
Вольфганг Штефан (ФРГ) Иностранная фирма
«Биотест-Серум Институт ГмбХ» (ФРГ) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОЧИСТКИ СЫВОРОТКИ
Изобретение относится к микробиологии.
Известен способ стерилизации сывороток фильтрацией и ультрафиолетовым облучением.
Однако известный способ не обеспечивает необходимой чистоты препарата.
Для повышения чистоты препарата сыворотку соединяют с коллоидной кремниевой кислотой в соотношении 250 — 500 мг на 1 г белка при рН 6,5 — 8,0.
Пример 1. В бутылку (1 л) наливают
20 г коллоидной кремниевой кислоты и 200 г стеклянных бус (диаметр 0,4 см), закрывают марлей и 2 ч при 180 С стерилизуют горячим воздухом, Подлежащую обработке сыворотку (pH 7,5) вводят при стерильных условиях.
После закрытия бутылку в течение 4 ч вращают со скоростью 40 — 50 об/мин «через голову». Эффективность адсорбинования зависит в значительной мере от скорости вращения. Потом нагревают 4 ч при 45 С в водяной бане без движения или качания и после охлаждения центрифугируют в течение 30 мин при
5000 об/мин. После ультрафиолетового облучения в аппаратуре типа Дилль стерильно фильтруют. После четырех недель хранения при +5 С можно отфильтровать от случайно образовавшегося незначительного осадка.
Осадок кремниевой кислоты можно переработать следующим образом: ооъемный осадок замораживают при — 20 С, оттаивают при комнатной температуре и центрифугируют
15 мин при 5000 об/мин. Остаток, который бумажно- и иммунэлектрофоретически практи5 чески имеет тот же самый состав, как и главное количество адсорбпрованной сыворотки или плазмы, после ультрафиолетового облучения стерильно фильтруют и после четырехнедельного хранения при 5 С дополнительно
10 фильтруют.
Полученные сыворотки как остро, так и хронически токсически переносимы и свободны от пирогена.
Пример 2. 1 л человеческой сыворотки
15 (физиологическое значение рН 7,5) с 20 r стерилизованной горячим воздухом коллоидной кремниевой кислоты хорошо размешивают в течение 4 ч при 45 С, после охлаждения центрифугируют 30 мин при 5000 об/мин, потом
20 подвергают ультрафиолетовому облучению и стерильно фильтруют. После четырехнедельного хранения при 5 С отфильтровывают от случайно образовавшегося незначительного осадка.
25 Пример 3. 1 л человеческой АСД-плазмы устанавливают на 5,5О/о протеина и при значении рН 6,5 хорошо смешивают с 30 г стерилизованной горячим воздухом коллоидной кремниевой кислоты 4 ч при 45 С, центрифу477580
Предмет изобретения
Составитель В. Остапчук
Техред 3. Тараненко
Корректор H. Учакина
Редактор Л. Струве
Заказ 2422/16 Изд. Кз 1595 Тираж 529 Подписное
ЦНИИПИ Государственного, комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 гируют, облучают ультрафиолетовыми лучами и стерильно фильтруют. После четырехнедельного хранения при 5 С отфильтровывают от случайно образовавшегося незначительного осадка.
Пример 4. 1 л человеческой АСД-сыворотки устанавливают па 5,5 протеина и при значении рН 6,5 хорошо смешивают с коллоидной кремниевой кислотой 4 ч при комнатной температуре и затем 4 ч нагревают при 45 С.
После охлаждения центрифугируют 30 мин при 5000 об/мин, облучают ультрафиолетовыми лучами и стерильно фильтруют. После четырехчасового хранения при 5 С отфильтровывают от случайно образовавшегося осадка.
Пример 5. 1 л цитратной плазмы (протеин: 5,0%, рН 7,5) размешивают с 20 г аэрозила 380 при 45 С в течение 4 ч. Центрифугпруют в течение 20 мин при 5000 об/мин и сливают верхнюю фазу.
П р и м ер 6. 1 л плазмы (протеин: 7,0, рН
7,5) размешивают с 20 г аэрозпла 380 в течение 4 ч при 45 С. Центрифугируют в течение 20 мин при 5000 об/мин, сливают верхнюю фазу и стерильно фильтруют через фильтр типа Зейтц-EKS-1. Затем облучают адсорбированную сыворотку ультрафиолетовыми лучами.
Пример 7. 1 л человеческой сыворотки при значении рН 7 хорошо размешивают с
20 r стерилизованной горячим воздухом коллоидной кремниевой кислоты в течение 3 ч при 30 С и после охлаждения центрифугируют в течение 30 мин при 5000 об/мин, облучают ультрафиолетовыми лучами и фильтруют через фильтр из подходящего материала и с соответствующим размером пор. По истечении четырехнедельного хранения при 5 С отфильтровывают случайно образовавшийся малый осадок. ,Пример 8. 1 л человеческой сыворотки при значении рН 7 хороию размешивают с
20 г стерилизированной горячим воздухом коллоидной кремниевой кислоты в течение 4 ч при 15 С и после охлаждения цептрифугируют в течение 30 мин при 6000 об/мин, облучают ультрафиолетовыми лучами и фильтруют через фильтровые слои, содержащие асбест, непроницаемый для бактерий, и с подходящим размером,пор. По истечении четырехпедельного хранения при 5 С отфильтровывают случайно образовавшийся малый осадок, П р н м е р 9. Способ, приведенный в примере 8, повторяется при 5 С, причем размешивание продолжают 6 ч.
Употребляемая коллоидная кремниевая кислота имеет следующие свойства:
Насыпной вес 20 †1 (предпочтительно
15 40 — 60),г/л.
Величина частиц 3 — 60 (предпочтительно
3 — 15) ммк.
Удельная поверхность 100 — 500 (предпочтительно 340 — 420),м /г.
20 Коллоидную кремниевую кислоту смешивают с сывороткой .посредством вращения адсорбционных сосудов со скоростью 10 — 50 (предпочтительно 30) об/мнн; посредством размешивания при 10 — 50 (предпочтительно
25 30) об/мин.
Подходящими вставными фильтрами являются, например, целлюлозно-асбестовые фильтры с размерами пор 0,8 — 8 (предпочтительно
0,9 — 1,2) мк при фильтрационном давлении от
ЗО 0 5 до 4 атмосфер. Кроме того, применяют . мембранные фильтры с размерами пор от 0,05 до 0,5 (предпочтительно 0,2) мк при фильтрационном давлении 1 — 10 (предпочтительно 5) атмосфер.
Способ очистки сыворотки путем обработки сорбентом, фильтрации и ультрафиолетового
40 облучения, отлич ающийся тем, что, с целью повышения чистоты препарата, сыворотку соединяют с коллоидной кремниевой кислотой в соотношении 250 — 500 мг на 1 r белка при рН 6,5 — 8,0.