Способ определения зараженности растений капусты

Способ определения зараженности растений капусты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

И. t

О П

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистимеских

Республик (») 477698

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 21.03.73 (21) 1896672/30-15 с присоединением заявки №(23) Приоритет -

Опубликовано 25.07.75 Бюллетень № 27

Дата опубликования описания 05 08 75 (51) М. Кл.А 01 и 13/00

Государственный номнтет

Совета Мнннстров СССР оо делам изобретений н открытий (53) УД 577. 158. 52 (088.8) (72) Авторы изобретения

В. А. Аксенова и О. Н. Кожанова (71) Заявитель Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. М. В. Ломоносова (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗАРАЖЕННОСТИ РАСТЕНИЙ э

КАПУСТЫ

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть применено в фитопаталогин и селекции.

Известен способ определения зараженности растения, при котором из гомогената тканей растений, например капусты, центрифугированием, высаливанием сернокислым аммонием, очисткой на биогеле выделяют пероксидазу и определяют ее активность. У зараженного растения активность перокси- 10 дазы, выделенной из него, выше, чем у здорового. Этот способ недостаточно надежен, поскольку он ограничивается лишь определением активности фермента и не исследует его свойств. 15

Целью изобретения является повышение точности и надежности определений зараженности растений.

Эта цель достигается тем, что из тканей растения, наттример капусты, выделяют 9

Пероксидазу и измеряют не только ее активность, но и термостабильность. По величине термостабильности фермента судят о степени зараженности растения и наличия в нем инфекции, например, серой гнили ка- 25 пусты. При заражении термостабильност, пероксидазы снижается более значительно у неустойчивых сортов растений.

Способ осуществляют следующим образом.

Для выделения препарата пероксидазы ткани капусты растирают в 0,05 М фосфатном буфере (pH 7,4) с 17% сахарозы, гомогенат отжимают через полотно и цент- рифугируют в течение 1 час при 40000 об/мин. Осадок отбрасывают, а центрифугат высаливают сернокислым аммонием при

30% насыщении. Выпавшие балластные белки удаляют центрнфугированием. Недосадочную жидкость насыщают сернокислым аммонием до 80% и осадок белка пероксидазы после центрифугирования растворяют в

3 мл 0,05 М фосфатного буфера (pH 7,4) и пропускают через колонку биогеля Р-60, насыщенную тем же буфером. Белок смывают буфером, и собирают фракции по 3 мл, в которых спектрофотометрически определяют содержание белка (по оптической плотности цри 280 нм) и гема (при 405 нм), а также активность пероксидазы с бенэиди47769 8

Составитель В.Аксанова

Ре лак со Р Д.Цинчук

Текред Я.Карандашова КоРРектоР А.Дзесова

H %8+

Тираж 619 Подписное

HHHHIIH:1 îñóäaðñòâåííîã0 комитета Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий

Москва, 113035, Раушская наб., 4

Предприятие «Патент», Москва, Г-59, Бережковская наб., 24 ном. фракции, содержащие пероксидазу, сли вают вместе и осаждают из них белок фермента при 80% насыщении сернокислым аммонием. Осадок собирают центрифугированием и диализуют в течение 4 час против

0,001 М фосфатного буфера (р Н 7,4).

Полученный препарат пероксидазы термостатирует нри разных температурах (20, 40, 50,60, 80 С) и определяют активо

; ность фермента известным способом с пирогаллолом или по окислению флорглюцина. Ако тивность пероксидазы при 20 С принимают за 1007 (контроль)та активность фермента при других температурах рассчитывают в процентах от контроля. Фермент здоровой и зараженной тканей при нагревании инакти» вируется в разной степени, Процент активности, сохраняющийся после нагревания фермента, по сравнению с контролем рассматривают как показатель термостабильности фермента. У зараженных растений термостабильность пероксидазы снижается по сравнению со здоровыми.

Предмет изобретения

Способ определения зараженности расте1О ний капусты, включающий приготовление и центрифугирование гомогената тканей капусты, выделение фермента, например пероксидазы, и определение его активности, отличающийс ятем, что, сце15 лью повышения точности определения, устанавливают термостабильность фермен1 та путем его термостатирования, по величине которого судят о зараженности капусты.