Способ исследования крови

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Клаее 30 а, 1, ;

АВТОРСНОЕ СВИДЕТЕЛЬСТВО НА ИЗОБРЕТЕНИЕ

ОПИСАНИЕ способа исследования .крови.

Я<<К а,р„„, „,„, д, 29 ноября 1935 года (спр. о перв. № 181280).

О выдаче авторского «идетельст«а опубликоаано 31 .юл« l936 года.

В настоящее время предложено несколько способов счета кровяных пластинок (тромбоцитов), но большинство из них, как не удовлетворяющие требованию точности, не получило широкого распространения. Из наиболее часто применяемых способов нужно упомянутьлишьо способе Фонио (Fonio) с модификацией его по Неффу (Noeff) и способе Раденбурга(Ка1ц1епЬигр).

Исследование по способу Фонио отнимает очень много, времени, требует довольно большого лабораторного навыка и все же не дает гарантии в достаточной точности подсчета. Модификация по Неффу сокращает, правда, довольно значительно время исследования, но еще менее точна, чем оригинальный способ, и потому не может быть рекомендована.

Методика Раден бурга, состоящая в разведении крови в смесителе Зо/о-м раствором цитрата натрия в пропорции 1:200, очень проста, но требует очень длительной тренировки, так как тромбоциты в растворе лимоннокислого натрия несколько сморщиваются,. не имеют окраски и при близком соприкосновении с эритроцитами могут быть не замечены.

Предлагаемый способ отвечает двум основным требованиям: сделать подсчет тромбоцитов точным и легко осуще-, ствимым даже для MBJIo опытного ла- бораторного работника.

Подыскание более подходящих жид-., костей основного раствора для сохра<чо пения тромбоцитов и красителя произведено путем испытания целого ряда веществ. По испытании в качестве основных растворов хлористого натрия, лимоннокислого натрия, щавелевокислого натрия, фтористого натрия, сернокислой маг езии, лимоннокисло< о лития и др. выбор остановлен на поваренной соли. В качестве красящих веществ были испытаны эозин, метиленовая синь, конго красная, аурамин, раствор Люголя, красная кровяная соль, желтая кровяная соль, фуксин, маладитовая зелень и др., в результате чего выбрана, как резко выраженная протоплазматическая краска, малахитовая зелень, относящаяся к группе диаминотрифенилметановых красок, которые включаются в ряд розанилиновых красок.

Жидкость для подсчета тромбоцитов должна быть следующего состава:2,о-й водный раствор повареннойсоли — 53см, 1 /о-й водный раствор мнлахитовой зелени — 1 слР.

Изготовленную жидкость необходимо фильтровать через бумагу.. Жидкость при стоянии осадка краски не дает.

Надо заметить, ч го при таком соотношении составных частей жидкости достигается наилучшая видимость тромбоцитов. При этом особенно важно точно изготовлять 1%-й раствор малахитовой зелени.

Ход и сследо вания. В смеситель для эритроцитов до метки 0,5 быстро набирается кровь, а затем насасывается до метки 101 предлагаемая жидкость.

Наполнив смеситель, его слегка встряхивают. К счету можно приступить через 5 минут после взятия крови. Смеситель взбалтывается 1 минуту для получения р авномерной взвеси форменных элементов. Камера заряжается и оставляется стоять 3 минуты. Затем приступают к счету. Тромбоциты можно считать в течение 45 минут от начала взятия крови.

Для счета мы пользовались камерои Тома-Цейсса. Тромбоциты подсчить ваются в 10 или 15 больших квадратах (5 больших квадратов равны 80 маленьким). Вычисление общего числа тромбоцитов в 1 лм" производится так же, как и при подсчете эритроцитов.

Счет осуществляется легко, так как .тромбоциты в камере распределяются равномерно (при быстром взятии крови), они большей величины, чем при взятии крови по американскому способу и, кроме того, интенсивно окрашены в зеленый цв:т. Эритроциты получают слегка зеленов.чый о1тенок и м гут быть сосчитаны здесь же в первые

20 минут. Далее нас i упает частичное их растворение.

Возможность одновренного счисления эритропитов также является преимуществом способа.

В некоторых случаях гипертромб зцитоза находящиеся в группах пластинки тесно соприкасаются друг с другом, что затрудняет подсчег.

Если вызвать сморщивание пластинок, то промежутки между ними увели 1и-, ваются, и подсчет облегчается, что при водит к заключению, что в этом случае целесообразнее использовать кровь с раствором лимоннокислого натрия, несколько сморщивающего пластинки, прибавив к нему малахитовую зелень для окраски последних.

При такой модификации метода Pzденбурга тромбоциты хорошо окрашиваются в зеленый цвет, вследствие сморщивания лежат порознь и могут быть легко сосчитаны даже при резко выраженном гипертромбоцитозе.

Жидкость при этом приготовляется ех tempore по следующему рецепту:, 3 /о-й водный раствор лимоннокислого на1рия — 38 объемных частей (лучше ., пользоваться 3,5% — 4% — 4,5% — 5" î-ми растворами), 1 о-й водный раствор малахитовой зелени — 1 объемная часть.

Практически жидкость приготовляется так. При работе однокубиковой пипеткой в колбочку вносятся 3,8 гл лимоннокислого натрия. Сюда же до бав яется 0,1 с.я малахитовой зелени.

Смесь пропускается через бумажный фильтр.

С полученной комбинированной жидкостью производится исследован-ie.

Счет начинают через 15 минут после взятия крови. Зона счета — 30 минут.

Подсчет эритроцчтов, при одномоментном взятии крови, можно произвести в первые 15 — 20 минут, далее эритроциты начинают частично растворяться, что можно проследить, наблюдая появление теней.

Предлагаемая методика обладает большой точностью, онапроста и доступна, значительно ускогяет подсчет тромбоцитов, по сравнению с исследование:.: по Фонио, делает подсчет их более легко осуществимым, по сравнению с таковым при выполнении анализа но способу Раденбурга. Преимуществом предлагаемой методики является также возможность счисления эритро цито в про одномоментном взятии крови.

При резко выраженных гипертромбоцитозах наиболее целесообразно производить счет тромбоцитов по видоизмененному методу Раденбурга.

Предмет изобретения.

1, Способ исследования крови, отличающ;йся тем, что для окраски тромбоцигов применяют раствор хлористого натрия и малахитовой зелени.

2. Прием выполнения способа по п. 1, отличающийся тем, что раствор для окраски тромбоцитов состоит из 53 частей 2%-го раствора хлористого натрия и 1 части 1%-го раствора малахитовой зелени.

3. Видоизменение способа по пп. 1 и 2, отличающееся тем, что для окраски тромбоцитов применяют смесь из

38 о ъемов 3%-ro водного раствопа лимоннокислого натрия и 1 объема 1%-> о раствора малахитовой зелени.