Гипоталамический рилизинг-фактор гормона роста и способ его получения
Патент 480418
Авторы
Классы МПК
Гипоталамический рилизинг-фактор гормона роста и способ его получения
Иллюстрации
Реферат
О П И С А Н И Е (и) 480418
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союз Говотскик
Социал . стииеских
Pенпублик
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 24.07.73 (21) 1939652/28-13 с присоединением заявки Ме (5!) М. Кл. А 61k 17/00
Совета Министров СССР па делам изобретений и OTKpblTHN
Опубликовано 15,08.75. Бюллетень М 30
Дата опубликования описания 18.12.75 (53) УДК 615.361.34 (088.8) (72) Авторы изобретения
H. А. Юдаев и 3. Ф. Утешева (71) Заявитель
Институт экспериментальной эндокринологии и химии гормонов (54) ГИПОТАЛАМИЧЕСКИЙ РИЛИЗИНГ-ФАКТОР ГОРМОНА
РОСТА И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ
ГосУдарственный комитет (32) П ио и .„
Изобретение относится к медицине в частности к гормональным препаратам.
Предложено вещество, ранее в патентной и специальной литературе не описанное,— ги-, поталамический рилизинг-фактор гормона роста, представляющий собой пироглутамил-серил-глпцинамид структуры
НС СН СН,ОН
О =С CH — СΠ— NH — СН вЂ” СΠ— )Ф вЂ” СН вЂ” СΠ— NHз
Предложен способ получения гипоталамического рилизинг-фактора гормона роста, ранее в литературе также не описанный, который заключается в том, что для получения конечного продукта в химически чистом виде гипоталамические фрагменты крупного рогатого скота экстрагируют кислотой, например, уксусной, хроматографируют на катионообменнике, затем на органическом молекулярном сите в водном растворе или системе органических растворителей, например, аммонийно-ацетатной, с последующей лиофилизацией. При этом в качестве катионообменника используют, например, КМ-целлюлозу, а в качестве органического молекулярного сита используют, например, сефадекс Г-10 и Г-15.
Гипоталамический трипептид структуры— пироглутамил-серил-глицинамид стимулирует освобождение из гипофиза гормона роста у человека и некоторых животных и назван рилизинг-фактором ростового гормона. Этот трипептид в отличие от самого гормона роста представляет собой сравнительно несложное и, по-видимому, лишенное видовой специфичности соединение, которое может заменить гормон роста во многих сферах его при10 менения. Гипоталамический трипептид проявляет высокую биологическую активность при испытании его как in vitro, так и in vivo.
Трипептид в пико-граммовых дозах при инкубации ln ч11го с элюированными половинками
15 аденогипофизов увеличивает освобождение гормона роста в среду. Освобождающийся в среду ростовый гормон определяют с помощью электрофореза и полиакриламидном геле.
Опыты in vitro свидетельствуют о ярко выра20 женном специфическом эффекте этого трипептида: он действует непосредственно на гипофиз. Предложенное вещество может найти применение как для дифференциальной диагностики, так и для лечения заболеваний, свя25 занных с недостаточностью гормона роста в организме. Кроме того, оно может быть использовано для стимуляции анаболических процессов в организме человека при лечении неэндокринных заболеваний, связанных с на30 рушением трофических процессов. Трипептид
480418
Составитель С. Щенева
Техред Т. Миронова
Корректор Н. Лебедева
Редактор Л. Тюрина
Заказ 3062/2 Изд. № 1867 Тираж 559 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 не токсичен в остром и хроническом опытах в дозах, во много раз превышающих биологически активную дозу. Эксперименты, проведенные с помощью хроматографии и электрофореза, показали, что выделенное вещество является индивидуальным чистым пептидом. На основании определения аминокислотного состава и N-концевой аминогруппы и данных, полученных в результате последовательных реакций расщепления пептида по методу Эдмана, а также сопоставления с известными литературными данными по структуре рилизингфакторов других гормонов, установлена структура выделенного трипептида-пироглутамил-серил-глицинамида
НС CH СН-„ОН!
О-С СК вЂ” CO NH СН вЂ” СО W — CH СΠ— NH 161
Пр имер. Получение рилизинг-фактора гормона роста. 5000 r свежезамороженных гипоталамических фрагментов крупного рогатого скота гомогенизируют в охлажденном до — 15 С ацетоне и получают ацетонированный порошок ткани, который затем обрабатывают 2 М уксусной кислотой, Лиофилизированный уксусно-кислый экстракт подвергают гель-фильтрации на волокне с сефадексом Г-25. Активную фракцию с Rf 0,63 — 0,53, элюируемую 0,005 М аммонийно-ацетатным буфером рН 4,5, смешивают в стакане с КМцеллюлозой, суспензированной в этом буфере. Буфер отсасывают на воронке Бюхнера, целлюлозу промывают дважды этим буфером и аммонийно-ацетатным буфером рН 65. Активный материал элюируют с катионообменника 0,1М NaC1 рН 6,5 и лиофилизируют, после чего освобождают от солей, пропускают через колонку с сефадексом Г-15 в 0,005 М аммонийно-ацетатном буфере рН 4,5. Затем активную зону подвергают хроматографическому разделению на колонке с КМ-целлюлозой в условиях ступенчатой элюции. Активный материал адсорбируют па колонке из
0,005М буфера рН 4,5, элюируют 0,1 М NaC1 рН 6,5 и лиофилизируют, Сухой препарат подвергают дважды гельфильтрации в водном растворе на волокне с сефадексом Г-15, а затем с сефадексом Г-10, Активный материал лиофилизируют.
В составе активного препарата, элюируемого с колонки с сефадексом Г-10 с Rf 0,7, обнаружены с помощью автоматического аминокислотного микроанализатора Technicon три аминокислоты в эквимолярных соотношениях: серии, глутаминовая кислота и глицин.
Дансил-хлоридный метод показал, что N-кон15 цевая аминокислота пептида блокирована.
Предмет изобретения
1. Гипоталамический рилизинг-фактор гормона роста, представляющий собой пироглутамил-серил-глицинамид структуры
Н,С вЂ” СН, СН,ОН
О =С CH — CO-NH- СН вЂ” CO — М1 — CH — СО %I
25 . NH
2. Способ получения гипоталамического рилизинг-фактора гормона роста, о т л и ч а ющийся тем, что, с целью получения конеч30 ного продукта в химически-чистом виде, гипоталамические фрагменты крупного рогатого скота экстрагируют кислотой, например, уксусной, хроматографируют на катионообменнике, затем на органическом молекуляр35 ном сите в водном растворе или системе органических растворителей, например аммонийно-ацетатной с последующей лиофилизацией.
3. Способ по п. 2, отлич ающийся тем, 40 что в качестве катионообменника используют, например, КМ-целлюлозу.
4. Способ по п, 2, отличающийся тем, что в качестве органического молекулярного сита используют, например, сефадекс Г-10 и
45 Г-15.