Способ получения антибиотика

Способ получения антибиотика

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н::И-Й () щ5602

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советскнх

С04иьлистйчвскмх

Республик

К ПАТЕНТУ (61) Зависимый от патентов (22} Заявлено04.01.72 (21) 1733327/28-13 (51) М. Кл.

С 12(1 9/00 (32) (1риорнтет07.01,71(31) 181/71 (33 ) Швейцария

Государственный кве(втвт

Соввта Мнннстров (:CCO по делам нзооретвнвй к отнрытнй (53) УДК

615,779.932 (088.8) (43) Опубликовано 25.09 75.Бюллетень № 35 (45) Дата опубликования описания 19.03.7 (72) Авторы Иностранцы изобретения Аннемарн Клоссе и Ханс-Херманн Тнле (фРГ) Иностранная фирма

"Сандос АГ (Швейцария) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА

Изобретение относится. к фармацевтической иромь(шлениости.

Прецложенный способ получения антибиотика заключается в том, что культуру

Chaetomiu О(ОЬОВцт kuaze ех 1 r(

Выращивание осуществляют при 12-37 С и РН 5,7-6,0 в течение 6-12 суток.

Новый штамм вица СЛае1опъ(и(-(((fooosu(((kunze еХ Ггieg обнаРужен в по !

6 венной пробе из Кюснахта (Швейцария}, часть которой была отдана на хранение в

Unite(t 8tateS В ра tamest of (((()т icutCu.ra (((о(Ьет л Осй(.еа iоп Reseorch, ала

Deve(орыяпЙ Div isien )

20 в r. Пеория в штате Иллинойс (США) поц номером N(Щ 3877, Новый н.тамм вица С((ворот(т((4ю фоеови(г k((nze еу F(ies выращивают на агаре из солоцового 25 и црожжевого экстрактов при 12-37 С (прецпочтительно при 27 С). На питательной среце он образует воэцушный мине.(ий белого-светло-серого цвета и светлый субстратный мицелий. Через несколько цией после инкубации образуются темные перетеции, окрашенные в оливково-коричневый цвет. Обратная сторона колонии и субстрат окрашены в коричневый цвет.

В чистой культуре, например, иа солоцовом агаре при температуре 12 30 С гриб легко образует илоцовые тела, а при более высоких температурах в течение 810 суток. В зависимости от условий куш туры плоцовые тела окрашены в зелеиыйоливково-зеленый цвет, который иерехоци r в темно-коричневый. Они шарооб((азны. Их циаметр 200-300 мкм. На верхушке плодовые тела имеют округлую пору. Нх периций состоит из коричневых клеток, сросшихся меанцрически. Они имеют илотиун оболочку. Пору окружают многочисленные волоски коричнево-зеленого цвета, выхоцящие из наружного слоя клеток. Ilo л(ере

4856О2

Мальтозу

Бобовую муку

Пептон

Дрожжевой экстрат.

KH РО

2 4

М SО4 7Н О

Ca(NO )

3 2

ЯаС1

« еЯО > 7Н О

4 2

2ь С1

Мг С1 ° 4Н О

Сц$ О 5Н О

СаС1 6Н О

2 2

10,0

1,0

0,5

0,5

0,5

0,5

0,1

0,05

0,01

0,01

0,005

0,005

3 удаления от поры их количество уменьшается.

У основания их диаметр составляет цо

4,5 мкм, кверху их диаметр состаыщет до

3 мкм. Они имеют ярко выраженную волны и стую форму, несут многочисленные шййы и во всю цлину разцеляются перегородками.

Аски с растянутым основанием, по форме напоминающие булаву, выхоцят из внутреннего основания перетеция. Аски заключены в тонкую оболочку, которая разрушается до созревания аскопор (по восемь в кажцой аске). Аскопоры оцноклеточны, по форме они напоминают лимон с >5 заостренными оконцами. Сначала они бесцветны, а затем окрашиваются в красноватый, а в конце в темно-бурый цвет. На оцном конце они имеют легко заметную пору прорастания. Длина спор 9-12 мкм. ширина 6-9 мкм.

Новый штамм NRR Z 3877 выращивают на многих питательных срецах.

Источником углероца цля нового штамма являются глюкоза, сахароза, крахмал, лактоза, цекстрин, источником азота - органические и неорганические аэотсодержешие соецинения, например, пептон, црож жевой и мясной экстракты, сульфат аммония, нитрат аммония, аминокислоты и обыч-, ные минеральные соли и микроэлементы.

Для получения нового антибиотика жицкую питательную срецу заражают суспен( зией спор нового штамма вица, СЬаеЬрч ит ъ фоьозмч и культуру инкубируют в течение 6-12 суток (прецпочтительно 10 суток) при температуре 12-37 С (предпочтительно при о о

27 С) и значении рН 5,7-6,0.Выращивание провоцят в аэробных условиях в куль40 туре на поверхностном слое срецы или в погруженной культуре со встряхиванием, или в ферментаторах с вцуванием возцуха или азота и перемешиванием. После полу46 чения антибиотика его фильтруют и получают известными способами экстракиии и/или адсорбции иэ культуральной жицкости или из мицелия. Новый антибиотик выделяют из неочищенного экстракта хроматографическим путем, с помощью кристаллизации или путем противоточного распрецеления.

Одним из методов является экстракция бб фильтра с помощью энтиленхлорица, но используют и цругие органические растворители, например бензол,,хлороформ, бутилацетат, метиленхлориц, бутанол или уксусный эфир. Затем из экстрактов уцаляют-растворитель, например, путем перегонки, а остаток очищают хромотографическим путем на адсорбиругоших средствах, например глиноземе, силикагеле, силикате магния, или путем противоточного распределения и/или кристаллизации..

Новый антибиотик находит применение в качестве лекарственного средства.

Он оказывает тормозящее действие на развитие отека, обладает свойствами, прецотврашаюшимй язвы, оказывает иммуносунрессивное цействие на иммунитет клеток.

Новый антибиотик применяют как в чистой кристаллической или аморфной форме, так и в виде Неочищенного концентрата, а также в соответствуюших лекарственных формах дл я оральн ого, энтерального ил и парэнтерального введения.

Пример В ферменаторе 10 л питательного раствора, содержащего на

1 л (в г): и деминерализованную воду, заражается суспензией спор штамма NM2 3877 и инкубируется с аэрацией 1,0 л воздуха (мин) л питательного растворев при перемешивании 300 об/мин в течение 10 суток при 27 С и значении рН 5,7.

Затем раствор фильтру ют, п олу ч ают около 9 л культурального фильтра и около 1 кг мицелия, Культуральный фильтрат экстрагирукт этиленхлорицом три ) аза по

9 л, Затем органические фазы промыва от воцой цва раза по 4 л, сушат иа сульфате натрия и упаривают rlocyxe, После

485602

=О, 78 b пир ицине. (г):

11ерелозу

Пептон

Солоцовый экстрат

Дрожжевой акстрат

КН PO

2 4

М ЗО 7Н 0

Агар-агар

2

15

Составитель Mалютнна

РедактоР А Яер Тех Ред Г.Курилко КоРРектоР Л.Котова

Изд. 1тЪ .f ÎÌ> Тираж 529 Подписное

Заказ Дф8

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий

Москва, 113035, Раушская наб., 4

Предпрнятне сПатент», Москва, Г-59, Бережковская наб., 24

5 обезжиривания петролейным эфиром сырой экстрат хроматографируют на селикагеле.

Новый антибиотик элюируют смесью хлороформа и метанола (98:2) н цля очистки перекристаллизовывают из простого эфира, из уксусного эфира и цва раза из хлороформа.

Дополнительное количество чистого антибиотика получают из мнцелия. Мнцелий обрабатывают три раза 90%-ным метанолом/по 1 л/ в измельчнтеле ультратурраке.

Растворенный мицелий фильтруют, метанол отгоняют из фильтрата, а воцный раствор экстрагируют этиленхлорнцом три раза по 0,5 л. Этиленхлорицные растворы промывают 0,3 л воцы, сушат на сульфате натрия, упаривают цосуха. Полученный сырой экстракт обезжирнвают и хроматографируют, затем получают новый антибиотик.

Суспензию спор получают следующим образом.

Питательную среду, соцержащую на 1 л и деминерализованную воцу, заражают штаммом NR32 3877 и инкубируют 12 суток при 27 С. о

Выросший на этой питательной среце мицелий суспенцируют в физиологическом раств о ре.

Новый антибиотик имеет слецующую ха5 рактеристику.

Желтые кристаллы, которые плавятся прн 1 о при 172-182 С, образуя при этом новые кристаллы с температурой плавления 238 С (с разложением).

10 Уцельное вращение: $al) = -376 /C=

20 о

15, Элементарный анализ,%: С 73, 1; Н 6,81

М 5,3; О 15,1.

Уфч=пектр: максимумы прн 221nm /leaf

=1,96, 274пгп/ щЕ=1., 16/, 280пщlй =1, 16/, 20 290nrg hyE=1,09/

ИК-спектр: полосы при 3450, 2920, 1695, 1620 с»

Прецмет изобретении

1. Способ получения антибиотика, о т— л и ч а ю шийся тем, что культуру3877

Chaetomium ylabosum kunze ех Ггiе8 НЕЕ выращивают на среце, соцержашей источ30 ники углероца, азота, минеральные соли и микроэлементы, с последующим выделением целевого процукта из культурной жидкости н мицелия известными приемами.

352.Способпоп.1,отличающийс я тем, что выращивание осуществляк т „о при 12-37 С и рН 5,7-6,0 в течение 612 суток.