Способ получения электронномикроскопических автографов

Способ получения электронномикроскопических автографов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

O П И С А Н И Е (ц 487368

ИЗОБРЕТЕНИЯ i

Сааз Советских

Социалистических

Реснуолик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свнд-ву (22) Заявлено 28.01.74 (21) 1990479/23-4 (51) М. Кл. C 03 1,00

4 03с 5/00 с присоединением заявки №

Государственный комитет

Совета Министров СССР по дела,"л изобретений и откоытнй (23) 11риоритет

Опубликовано 05,10.75. Бюллетень ¹ 37

Дата опубликованпя описания 31.05.76 (53) УДК 771.5(088.8) (72) Авторы изобретения

К, М. Романовская и А. А. Макина (71) Заявитель Всесоюзный государственный научно-исследовательский и проектный институт химико-фотографической промышленности (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ

ЗА ЕКТРО Н НОМИ КРОСКОП И ЧЕСКИХ АВТОГРАФОВ

Изобретение относится к способу получения электронномикроскопических автографов, которые могут быть использованы в медицине, биологии и технике для исследований способом электронной авторадиографии с применением меченых атомов.

Известен способ получения электронномикроскопических автографов путем нанесения на биологический срез ядерной эмульсии, предварительно подвергнутой топкослойному сепарированию для выделения твердой фазы эмульсии, с последующим экспонированием и проявлением.

В этом случае первое созревание проводят в присутствии стабилизатора — ста-соли и отделяют твердую фазу эмульсии методом тонкослойного сепарирования, проводимого в одну стадию.

Введение стабилизатора в первом созревании эмульсии обеспечивает заданный размер микрокристаллов галогенида серебра (0,08 мкм), но при этом снижается фотографическая чувствительность ((3 — 4) 10 †" единиц почернения на 1 электрон с энергией

E=75,6 кэв при толщине эмульсионного слоя

20 мкм).

Малая чувствительность эмульсионного слоя требует длительных экспозиций, сопровождающихся процессом регрессии центров скрытого изображения, а также способствующих протекаппю процессов перекристаллизации микрокрпсталлов галогенпда серебра, что вызывает артефакты автографа.

11оэтому предлагаемым способом нельзя выявить метаболизмы ультраструктур клетки.

Цель изобретения — увеличение разрешающей способности автографов, повышение фотографической чувствительности эмульсии, улучшение адгезин эмульсии к биологпческо10 му срезу, повышение эффективности фотографической обработки — достигается тем, что выделение твердой фазы эмульсии выполняют не менее, чем в две стадии, причем на первой стадии выделяют микрокристаллы галогеннда

I ) серебра, средний размер которых больше среднего размера мпкрокристаллов, выделяемых на второй стадии, п фотографическую обработку ведут при (— 4) — (+8) "С.

Для улучшения адгезии эмульсионного слоя

20 к биологическому срезу в эмульсию обычно вводят смачнватель — додецнлгликолевый эфир пзооктилфенола.

Пример. Для получения мелкозернистой

25 э., ульсип приготавливают 2,9% -ный раствор предварительно набухшей желатины в дистиллированной воде. причем в расплавленную желатпну вводят 6,3 г-моль/л бромистого калия и водный раствор аммнрованного азотно30 кислого серебра (5,3 г-моль/л).

487368

Средний размер непроявленного микрокристалла, мкм

Чувствительность, единиц почернения на 1 электрон с энергией

Е=76,6 кэв

Число зерен

Концентрация га то енита серебра в с хом слое, Фракция сепарирования

Диспервуали в

10 смв, шт сия

5 10 — 8

Исходная эмульсия типа М

0,110

0,70

32,5 0,5

2,5

5,0 10

1,0 10 — 8

0,60

0,130

3,0

82,5= 0,5

82,5 0,5

Первая

Вторая

0,05

0,075

1,5

Предмет изобретения

Составитель В. Матросов

Редактор T. Шарганова

Техред И. Ханеева Корректор Л. Котова

Заказ 1027/14 Изд. Л" 56 Тираж 529 Подписное

Ц1-1ИИПИ Государстве. ного комитета Совета Министров ССС1 по делам изобретений и открытий

113035, Москва, )K-35, Раугпская наб., л. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

К раствору желатины при перемешивании (100 об/мин) прибавляют раствор азотнокислого серебра в течение 1 — 2 сек. Продолжительность физического созревания до 60 сек.

После нейтрализации избытка иона аммония

30%-пым раствором уксусной кислоты доводят рН эмульсии до 4,7 — 4,9.

Тонкослойное сепарирование проводят не менее, чем в две стадии.

Сначала пропускают эмульсию через дозирующий ниппель размером 6,0 мм при скорости сепаратора 4500 об/мин. Затем повторно сепарируют выделяющийся фугат, пропуская эмульсию через дозирующий ниппель размером не более 3,0 мм при скорости сепаратора

7700 об/мин.

На первой стадии сепарирования выделяют крупные микрокристаллы, на второй мелкие, но более однородные по размеру.

Полученный на второй стадии сепарирования осадок галогенида серебра диспергируют в присутствии желатины и подвергают химическому созреванию при 50 С в кислой среде в присутствии золотохлористоводородной кислоты, роданида и тиосульфата натрия.

1. Способ получения электронномикроскопических автографов путем нанесения на биологический срез ядерной эмульсии, предварительно подвергнутой тонкослойному сепарированию для выделения твердой фазы .эмульсии, с последующим экспонированием и проявлением, отличающийся тем, что, с целью увеличения разрешающей способности автографов, повышения фотографической чувствительности эмульсии, улучшения адгезии

Физико-химические и фотографические характеристики исходной эмульсии и первой и второй фракций сепарирования приведены в таблице.

5 Перед нанесением второй фракции эмульсии на биологический срез ее разводят стабилизирующим раствором в соотношении

1: 10, после чего вводят смачиватель додецилгликолевый эфир изооктилфенола, 10 Эмульсии, изготовленные предлагаемым способом, обладают высокой коллоидной устойчивостью и не склонны к процессу перекристаллизации несмотря на большую удельную поверхность микрокристаллов второй

15 фракции сепарирования, поскольку использована стандартная ядерная эмульсия типа М, в которой коллоидная устойчивость микрокристаллов оптимальна. Полученную эмульсию наносят на препаративную металлическую

20 сетку. с предварительно положенным биологическим объектом, содержащим меченые атомы, экспонируют в холодильнике при +4 С в течение 10 — 15 суток для следовых автографов и до 25 суток для контрастных автографов, 25 после чего проявляют при (— 4) — (+4) С в течение 4 — 10 мин. эмульсии к биологическому срезу, повышения эффективности фотографической обработки, выделение твердой фазы эмульсии ведут не

30 менее чем в две стадии, причем на первой стадии выделяю. микрокристаллы галогенида серебра, средний размер которых больше среднего размера микрокристаллов, выделяемых на второй стадии, и фотографическую обра35 ботку ведут при (— 4) — (+8) С.

2. Способ по п. 1, о тли ч а ю щи и с я тем, что в эмульсию добавляют смачиватель додецилгликолевый эфир изооктилфенола.