Способ получения препаратов вируса гриппа

Способ получения препаратов вируса гриппа

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических республик

Л1)48 gQ41 (61) Дополнительное к азт. свид-ву— (22) Заявлено 22.05.74!21)2022201/28-13 с присоединением заявки №(23) Приоритет (43) Опубликовано 25,03.76 Ртоллетевь № 1 1 (45) Дата опубликования описания /е.оУ. 06.

P1) М. Кл2

С 12 К 7/00

Государственный номнтет

Совете Инннстрав СССР ое делам нзооретеннй и отнрытнй (53) УДК 576.8.094 (088.8 ) A. А. Соминина, Т. П. Лисок, Т. Е. Медведева и Н. В. Яковлева (72) Авторы изобретения

1 .J

Всесоюзный научно-исследовательский инетитут гриппа (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ ВИРУСА

ГРИ ППА

Изобретение относится к медипине, а именно к вирусоуогии.

Известен способ получения препаратов вируса гриппа путем культивирования вируса на культуре клеток в жидкой питательной среде.

Однако такой способ не обеспечивает

;высокой биологической активности препара,тов.

С целью повышения активности препаратов цо предлагаемому способу зараженные ,клетки попеременно подвергают,, контакту с воздухом и средой, обогащенной сернокислыми солями меди 0,3-0,6 мг/л, цинка и железа 0,8-1,2 мг/л, аргннином И

230-260 ьж|л и гистидином 80-90 мгlл. Способ осуществляют следующим образом.

Первично трипсимиэироваиную суспенэию клеток,из почек эмбрионов крупного йе рогатого скота разводят в среде Игла (рН

7,2.), содержащей 10% сыворотки телят, и засевают s роллерные флаконы из расчета 200000 клеток на 1 см2 полезной пло,щади роллера. Объем среды составляет йб

1/10 часть объема флакона. Флрконы помешают в роллерный станок и культивируют прн 37оС в течение 3 суток, затем проводят замену первичной среды на све жую среду Игла с 10% сывораткй. Полное

;формирование монослоя происходит на 4- ! .сутки с момента посева клеточной взвеси.

Флаконы со сплошным клеточным, моно;слоем однократно ополаскивают фосфатно:, солевым буфером, рН 7,2, затем заража1 ,ют вирусом гриппа. для заражения использу- ° ют штаммы вируса, адаптированные к кле,точной культуре в результате 5-7 последовательных пассажей.

Множественность инфекции должна составлять 1 ЗИД50 на 1000-5000 клеток, объем "инокулята: - 1/100 часть от объема флакона.

После периода ацсорбцяи в роллерных .условиях продолжительнос гью 1 ч при ,37оС инокулят уделяют, во все флаконы вносят модифицированную среду Игла без

;сыворотки, содержащую аминокислоты: ар1гинин в концентрации 230-260 мг/л н гистидин в концентрации 80-90 мг/л, 48754 1

Составитель С. Малютина

Редактор Л. Гончарова ТехредМ. Левицкая Корректор -А. Гусева:.

Заказ 1Ъ4 Тираж 5И Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

11303ф, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент, г. Ужгород, ул. Гагарина, 101

3 соли двухвалентного металлоВ ГеБО 7Н О

Zn S 04 7 Н 2 О в концентрации

1 мг/л,CuSOy БНдО О,5 мг/л, пенициллин

100 ед/мл и стрептомицин 100 мкгlмл.

Продолжительность инкубации заражен-, тиых культур в роллерах составляет 4872 ч, после чего тканевую вируссодержащую жидкость собирают и хранят до употребления в рефрижераторе при 4оС или замораживают при -20оС. Готовый пре- . парат имеет вид прозрачной жидкости оранжевого цвета. Содержание инфекционного вируса составляет в получаемых препаратах 8 0,8 ед ЗИД50/0,2 мл., т.е. в 70 раз выше, чем в той же культуре при об щепринятых стационарных условиях культивирования.

Препарат обладает высокой иммуногенной и инфекционной активностью.

Формула и э о б р е т е н и я

Способ получения препаратов вируса гриппа путем культивирования вируса на культуре клеток в жидкой среде, о т—

10 личающийся тем,что,сцелью повышения активности препаратов, зара-,, женные клетки попеременно подвергают контакту с воздухом и средой, обогащенной сернокислыми солями меди 0,3-0,6

15 мг/л, цинка и железа 0,8-1,2 мг/л, аргинином 230260 мг/л и гистидином 8090 мг/л,