Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты

Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И Е 0 48789У

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскик

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 07.12.73 (21) 1974554/28-13 с присоединением заявки № (5!) М. Кл. С 07g 7/026

Совета Министров СССР ло делам изобретений н открытий

Опубликовано 15.10.75. Бюллетень ¹ 38

Дата опубликования описания 19.04.76 (53) УДК 615.739.6 (088.8) (72) Авторы изобретения

Л. Б. Шагалов, Ю. П. Вайнберг, И. Г. Аносова, О. И. Рябошапко, Т. С. Рябоченко, Л. С. Ермилина, А. С. Лоренс и П. С. Кранц

Институт биофизики (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ

ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ

ЙсУдаРс венный комитет (23) Приоритет

Изобретение относится к технологии получения биохимических препаратов.

Известен способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты из молок рыб, по которому. молоки последовательно гомогенизируют в присутствии буфера и детергента, прогревают при 60 — 75 С 15 мин, охлаждают до 0 — 4 С, выдерживают 2 — 3 час при этой температуре, примесные белки осаждают хлороформом, а дезоксирибонуклеиновую кислоту — этиловым спиртом. Однако известный способ является трудоемким.

По предлагаемому способу прогревание проводят в течение 1 — 4 час, а очистку осуществляют сорбцией реакционной массы на кизелыуре с последующей элюцией целевого продукта.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример. 100 г замороженных молок рыб гомогенизируют в 500 мл холодного цитратносолевого раствора в течение 3 мин при

8000 об/мин. Гомогенат центрифупируют на центрифуге ПЛР-1 в течение 20 мин при

2500 об/мин и температуре — 3 С. Надосадочную жидкость сливают, в осадке получают ядерный материал.

Осадок ядерного материала переносят в макроизмельчитель тканей PT-1, заливают

350 мл цитратно-солевого раствора и гомогенизируют 1 мин при 4000 об/мин. Гомогенат помещают в 10 л-ый аппарат, добавляют при перемешивании механической мешалкой 2,4 л цитратно-солевого раствора и 680 мл 6%-ного раствора додецилсульфата натрия, не прекра5 щая перемешивания, нагревают до 60 С и выдерживают при этой температуре 1,5 часа. По окончании выдержки при работающей мешалке добавляют 4 л цитратно-солевой смеси, содержащей 29% поваренной соли и 4,8%

10 трехзамещенного цитрата натрия и продолжают помешивание еще 1,5 часа при 60 С. По истечении этого времени массу из аппарата сливают в кристаллизатор и охлаждают до — 2 — 4 С.

15 В смеситель емкостью 30 л помещают

4,8 кг кизельгура, охлажденную массу с предыдущей стадии, все перемешивают 3 мин так, чтобы вся охлажденная масса сорбировалась на кизельгур. Элюируют ДНК с ки20 зельгура 4 л цитратно-солевой смеси, содержащей 14,5% поваренной соли и 2,4% трехзамещенного нитрата натрия, при перемешивании в течение 30 мин. Отделяют элюат от кизельгура фильтрацией на 50 нутч-фильтре

25 через слой бальтинга и фильтровальной бумаги. Элюацию повторяют 3 раза, элюаты объединяют.

В стакан помещают 1 л 96% ного холодного этанола и приливают к нему 1 л элюата.

30 Смесь перемешивают осторожным перелива487897

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Техред О. Луговая

Корректор О. Тюрина

Редактор Н. Коган

Заказ 674/15 Изд. № 1874 Тираж 529 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, 5К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр Сапунова, 2 нием из одного стакана в другой до тех пор, пока не сформируется нитевидный осадок

ДН1(. Сгусток осадка пинцетом переносят в стакан с 50%-ным этанолом, дважды тщательно ополаскивают и помещают в сборник, предварительно заполненный 7% -ным этанолом.

Выход ДНК составляет 3 r от загрузки (3% от веса загруженных молок).

Характеристика Д Н К.

Молекулярный вес 15 10, содержание белка 1,5%, гиперхромный эффект 41%, ширина плавления 5,1.

Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты путем гомогенизации молок рыб, обработки детергентом и буферным раствором, прогревания реакционной массы при 60 — 70 С, выделения и очистки целевого продукта, отл и ч а ю щи и с я тем, что, с целью упрощения способа, прогревание проводят в течение 1—

10 4 час, а очистку осуществляют сорбцией реакционной массы на кизельгуре с последующей элюцией целевого продукта.