Способ концентрирования антител

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

т..окта Советских

Социалистических

Республик (11) 48885 9 (61} Дополнительное к авт. свид-ву— (п2) Заsnaevo21.07.72 (21) с присоединением заявки Хе (23) ПриоритетОиубликовано25.10.75.Бюллетень М 39

Дата опубликования описания 16.01.76 (51) М. Кл.

12 к 7/00

1оеудоротоенный ноьвтет

Сонете Миннстрое СССР оо денни изобретений н* открытий (53) УДК 576.8,, ОО7 (066 8) (72) Авторы изобретения

<.:. Я. Гайдамович, Е. Э. Мельникова.и Н. К. Шяноян (71) Заявитель

Институт вирусологии им. Д. И. Ивановского (54) С110СОБ КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ АНТИТЕЛ

Изобретение относится к медицине, а именно к вопросам, связанным с изготовлением диагностических сывороток для серологических реакций. Как известно, для проведения серологических-реакций в настоящее время вместо иммунных сывороток пользуются ас-итсм иммунизированных животных.

Применение асцита как источника антител позволчет щире использовать для иммунизащти мелких лабораторных животных. 1п

При приготовлении иммунных асцитных жидкостей титр антител может быть невы сок, Б этом случае необходимо осушест вить концентрацию антител.

Известны способы конпентрирования ан» тител, предусматривающие фракционироваI ие исходного материала, например, с помощью ионообмениой хроматографии.

С целью упрощения способа предложено фракпионярование осуществлять при посте g0 пенном оттаивании замороженной жидкости.

Предлагаемый способ заключается в следующем.

Иммунную асцитную жидкость заморао живают при -5-70 С, а затем при 14- Яб

2 ,42 С оттаивают, отбирая при этом 2070% общего объема материала, содержащего концентрат антител.

Зтот способ основан на следукяпих экспериментах.

Их проводят с иммунной асцитной жид костью (ИАЖ), которая содержит антитела как высоких, так и низких титров.

ИАЖ разливают в цилиндрические флаконы емкостью,50, 100, 150, 500, и

1000 мл и замораживают при минус

5,10-12, ЗО 35 и 70 С. Оттаивают о содержимое флаконов при 14-42 С. По мере оттаивания собирают фракции числом от 10 до ЗО. В каждой фракции определают содержание белка и антител.

Исходную ИАЖ и каждую фракцию исследуют на содержание антител в реакциЦ связывания комплемента (РСЖ), реакции торможения гемагглютинацин (РТГА) и реакции нейтрализации.

Пример 1. Замораживание 11%К в объеме 500 мл ведут при чптырпх т и, пературных режимах; — 5,10, — 30 и —. (т С.

1ЯРЯ59

На фиг. 1 представлены полученные данные О содержании белка.

Наивысшее содержание белка наблюдается В первых десяти фракциях после заме.раживания при —.«, -10 и — «О =. После

Г оо замораживания при 70 С "îäåðæàíèå бел ка в 1-20 фракциях более равномерное.

В результате сопоставления результатов опыта установлено, что слишком быстрое

О оттаивание (42 С) или очень медленное (14 C) не обеспечивает желаемого эффекта разделения ИАЖ. Оптимальным режимОм замОраживания яВляется минус о О

10-12 С, а оттаивания - 18-20 С. При ,этом в центре флакона образуется яд= рО из кристаллов воды, от KoTopox о к периферии флакона располагается белковыя раствор с увеличением в этом направлении

его концентрации. Во время замораживания ИАЖ нельзя перемепивать или ВстряСопоставление оптической плотности фракций и ак--.ивности в серологическчх реакциях

11

12

14

16

17

18

19

21

22

23

24

26

27

28

29 зо

2560

2560

160

80

160

320

З2О

160

86

80 (16О

320

160

40

40

40

1286

646

4.G

$ G

О

О

G..-".T ìòü, так как можно царуши и,::троп с пас слоения

Il p и м е р 2, Исследую е 114?V, к вирусу венесуэльского энцефаломи элита лошадей. Общий объем Ц,л,Ж 1 56 мл. Количество фракпий 30, объем каждой кз них 5,0 мл.

В опыте определяют титр комплемвнтс связываюших антител, антигемагглютини . нов, а также измеряют поглощение ультр — фиолетового излучения с длиной волк,.1 около 280 ммк белками, находящимися i. каждой отдельной фракции.

Данные представлены в таблице. Иэ них видно, что наивысшие титры антител и наибольшая концентрация белка обнаружены в первых 13 фракциях, При этом наивысшие титры наблюдают в первых

10 фракциях, а затем — постепенное спи жение концентрации антител. с

0,650

i,4OO

1,360

1,350

1,230

1,32G

1,300

1,230

0,790

0,550

0,335

G,282

О,i57

G,1 34

0,149

О, 124.

ОД20

0,115

О 106

G,G97

Ф"ъ 09 <

0,090

0,693

G,G53

G,i 30

9,098

G,044

G,О2О

6,016

6,012

4 Яй с -! >

В примерах 3,4 и " изучали ИАЖ к

Восточному энцефаломиэлиту лошадей, вирусу Семлики и Чикунгунья, При этом замораживали по 100 мл, а при оттаива нии собирали фракции по 10 мл. Полученные результаты представлены соответственно на фиг. 2,3 и 4.

Во всех случаях фракция 1 представляла собой исходную ИАЖ.

Из графиков видно, что во фракции 2 щ (по сравнению с фракцией 1) имеет место скачкообразное нарастание титра антител и концентрации белка. В нескольких по ,следующих фракциях (3-5) содержание антител и белка также значительна. Во ц фракциях 6, 7 имеет место .постепенное понижение титра антител и количества белка, а в последней фракции антител почти не содержится.

Аналогичная картина наблюдалась и при 2в исследовании фракций на наличие глобулинов с помощью электрофореза в агаре фир

".ч Дифко .

Злектрофореграмма фракций ИАЖ к вирусу ЗЭЛ представлена на фиг. 5. 25

B первых фракциях отмечается большое содержание аль|у» на и -глобулина, а затем от фракции к фракции их количество уменьшается.

В последней фракции содержится неболчи- З шое количество альбумина, j -глобулин отсутствует, Данные подтверждают, что наивысимя

KoHIIp*.òðàèèÿ антител имеет место в перBblX 0TTRHBlWHX llOpllHBX, Что COCTRBII APT около 20% общего объема, последние порции (около 30 ) практически не содержит антител. Таким образом, согласно предлаràåìîìó способу, концентрацию антител ведут путем фракционировання исходного материала, которое осуществляют при поотепенном оттаивании замороженной асцит ной жидкости.

В зависимостн от того ; какую степеиь концентрации антител требуется получить, по мере оттаивания собирают 20-70Ъ общего обьема, а остальное выбрасывают.

Этот способ не требует сложного обо: рудования и легко осуществим как в лабораториях, так и в производственных условиях.

Формула изобретения

Способ концентрирования антител путеь. фракционирования исходного материала, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, фрякциониро» ванне осуществляют при постепенном ов» таивании замороженной агцитной жидкос» ти.,Р Ж . 1,.

РП,4 6ex w

48r96 М СЛУХАЧ ДЯ ;i;j7;"-у,: -;, J g:;*

450

Р/, /

2 <3 4" 5 б 7 8 У

НОМЯ3 Ц)ДИКЦМУ

«7Ьг. z! /;

1

Д, Р !

1

Д

1 !

) 3

f р>

Х ( (I

Ю,1 г

Реса:;-;.ор .- -". ==:=-р, гМ . Л ндре еаа (.о."тазитеиь

, ех:=":и Леьчцкаи Корректс р

Заказ . О ":,":.ат 529 Попписиое

lz.— !Èë. (Б Гос1;иаv,;., .иио-:. о комитета (. оаета Министрои ГССР ио иенцам . зооретений ";: Открытий

1 I ЗОЭ5. (;осква, >К -35, Раужсиан иаб., д. 4/5 ф ; л! ад I jf (t 1 а еит, .* .. ж Орол, /л. а(арииа, 3. О)