Способ разделения кислых глинозаминогликанов

Способ разделения кислых глинозаминогликанов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

-.!У

1! у ! (i

1 !

1 G35 а.оииа1н; .. Иц. Сии!! (61) ДО!1ОДННТВЛЬНО6 К Я =.": . ОБЕД-Б ! (22) Занв-!<но 2.-.,0.3.73:":- .i 190,12 4,/28

С ПРНСОBДЯН" :-1 :"-.i.,:::. и:-.КН Л"

); (1, !

М. Кл.

01н 33/16

Ь 01 )с 5/00

j Q!i! Pill!i;Y88fihbl1i 1!ЕИ1! Ю йвнь Мк!!1;л1еее ИР йа делен 1!зебрете1!1!й

К Е!КЕЬЛ1:Л (QQ) Дрцорнтат! О и )! О д н gi 0 в Я Я -:„: ".. -"- * 2., :: 3, О 1о д д Р .Р н 1, )",. е „-: с3

) а,-а р —;-* (ð! :iiiääðiiã; - -; .:,.;„-н!1ci О0 02 "7

-:> ..:: . -.- .. — ";.:;.-Л1!.: УГ)н 6

/088.8!!! g j P,:) Ó О Р Ц н >Ок рс: «ънюiq

7 ) р«д Вите Л:

Спепчапь z9 -!О1чс f ÷""; ";.Гъсс",Ое . i,р .; -, 1р1.;цдк (54) Cjl0COE РАЗЙЫ1Е!1И & 1!1СДЫХ НИКОЗАPq1! iО1-1! I!5 A1!OB!!...

:з!>брь =. е:1не Относится к л!Вд1! Н»с и

AGA(8 1 най f B 11рименение д11Н днагностикч ранних сталий чекоторы на елс: ен ь:" эаболе! ° аний yi о!лредед нчд чффектчвио —:рч разли 1Hых лекарственных препаратов для

ИХ ДЕ !ЕНИН. цзвестен с пособ анализа кислы- л.-:— козами11огликанОВ (1(ГАГ B тканях il Моче способом злектрофореза в полиакриламидном блОке горизо!!1 альиого т1!На, Однако такой способ не обеспечивает быстрого анализа и высокой четкости деления фракний КГАГ.

C !!Велью ВозмОжнОсти нсс1!сдОВания нативной мочи, В качестве гелеообразующего бу(жра исllОльзукл трис-сОлянОкислый с КОннОЙ силой 1- 1,2 В качестВе алектродного трис — глининовый буфер с ионной силой 0,012-0,04.

Способ осун1еств!1щот следую!Ним обраЗОМ.

В качестве гелеобраэую!1!его раствора используют трис-соляный буфер, рН 8,9 (48 мл 1И.НС + трис 36,6 г) с ионной силой 1,0.

8 К:. р .: В!= р 1с. д а О ДНО ° О рас.Т ЬОРН

1:спо1!Ьзук т трис-гли1гиновый бу!Ь..р, pjj

8 -, .р;,.; р);,. -" ". р лин! H 3 6 ) c ион!!Ой ,:-;.;.-;-ВВ»,; ра. r.—:,!1ю11,:еi:о il кбнн<. нтриру1 ри, 1!Ь1,Ь! g а g,:), 1., 8ЫСО-!а СТО11б::КОВ раэдЕ1!НЮН1В! О 10 Ъ -ИОго ге!я !0 мм, а коннентрируюшего 4% ного — 10-15 л!м, Полимеризацию гелевых столбиков нроо водят прн 28-30 С в течение 20-30 мин, по!!Имеризац1!я коннентрируюн!его геля происходит прн той же температуре в течение

30-45 каин.

1«к В качестве обьекта исс11едовиния гпикозал!Иногп!!Капов используют нативиую мо« чу здоровых или больных людей. Обьем анализируемой пробы должу» быть не болеа

0,4 мл с содержанием 5-12 мкг кислых гликозаминогликанов.

Электрический режим деления при диск-влектрофорезе составпяг " 0,2-0,5 МА на столбик в течение 1- 1,5 час В начальной стадии пронесса и 2-3 МА на с.олбик при

Яь эпектрофоретическом делении.

:Таблица 1

Таблица 2

Длина пробега фракций, мм

Кониент-;

Гелеобразу юший буфер

Число фракций

Приме ание

Электродный раствор

i рация .геля%

Фосфат муравьиный

Делений нет

Фосфат -муравьиный

То ж е

7 То же

То же

Трис-лимонный

То же

Боратный

То же

10

42 Трис-глициновый

Трис-соляный

-{ и.с.0,5) 48

Три с-сол нный (и.с.О,5) Тряс-глициновый (и.с. 0,025) 10

46

Трис-соляный (и.с. 1,0) 7 То же

3 50 54 56

То же

3-4

46 49 51

Четкое деление

То же

10 Тряс-глициновый (и,с.0,012)

3-4

45 4 5

Окрашивание полученных фракций после электрофоретического деления проводят в

1%-ном растворе альцианового синего в

3%-ной уксусной кислоте. Избыток красителя удаляют электрофбретически и 3%-ном растворе уксусной кислоты.

Сравнение деления КГАГ при диск-элекВ результате проведения серии опытов ло диск-электрофорезу кислых гликозаминоглнканов мочи установлено, что четкое деление кислых гликозаминогликанов происходит при использовании трис-соляного буфера ионной силой 1,0 и трис-глицинового буфера с ионной силой 0,012, рофорезе проводят по числу полученными фракций гликозаминогликанов и длине их пробега (в мм от стартовой линии).

Результаты электрофоретического деления, полученные при использовании различных буферных систем, представлены в табл. 2.

Предмет изобретени я

Способ разделения кислых глюкозаминогликанов путем диск-электрофореза в по лиакриламидном геле с, йспользо ва н нем гелеобразующего и электродных систем, 60 о т л и ч а ю m и и с я тем, что, с

s cq< q5

Составитель С. П. Малютина

Редактор А. Бер Техред М. Левицкая Корректор 3, <ра„та

Заказ 1158 Тираж 902 Подписное

INHHllH Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., g.4/5 филиал ППП Патент". г. Ужгород, ул. Гагарина, 101.

НПП .Патент Зак. ЮР нелью воэможности исследования нативной мОЙи, в качестве гелеобраэуюнего буфера используют трис-солянОкислый с ионнОЙ силой 1- 1,2 и в качестве электрааного трис-глицинолый буфер с ионной силой

0,0 1 2-0, 04.