Способ подготовки ферментных препаратов и реактивов для определения активности ферментов

Способ подготовки ферментных препаратов и реактивов для определения активности ферментов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е <1>490807

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свпд-ву— (22) Заявлено 07.09.73 (21) 1960397/28-13 (51) М. Кл. С 07g 7, 02 с присоединением заявки—

Государственный комитет

Совета Министров СССР оо делам изобретений

N открытии (23) Приоритет—

Опубликовано 05.11.75. Бюллетень ¹ 41

Дата опубликования описания 19.03.76 (53) УДК 577.15.08 (088.8) (72) Авторы изобретения

А. А. Таран, Ю. М. Шапиро и О. Я. Ищенко

Краснодарский политехнический институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ

ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ И РЕАКТИВОВ

ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к способам под-.отовки ферментных препаратов и реактивов для определения активностг. ферментов B растительных и животных тканях и может быть использовано, например, в пищевой промышленности и при биологических исследованиях.

Известен способ подготовки ферментных препаратов и реактивов для определения активности ферментов в материалах, содержащих их, включающий добавление растворителя в ферментный препарат и реактив.

Однако такой способ не обеспечивает возможности определения активности ферментов при отрицательных температурах.

С целью определения активности ферментов при отрицательных температурах в качестве растворителя используют водно-глицериновую смесь, содержащую дистиллированную воду и глицерин в соотношении 19: 1 — 1: 1,5, при этом после введения растворителя каждый полученный раствор охлаждают до температуры от 0 до — 40 С, затем смешивают их и выдерживают при этой температуре, например, 2 — 3 час.

Способ осуществляют следующим образом.

В ферментный препарат и реактив добавляют растворитель, в качестве которого используют водно-глицериновую смесь, состоящую из дистиллированной воды и глицерина в соотношении 19: 1 — 1: 1,5 соответственно

Полученные растворы ферментного препарата н реактива раздельно охлаждают до выбранной температуры в пределах от 0 С до минус 40 С, затем смешивают их н выдерживают при этой температуре, например, 2 — 3 час.

Предложенный способ апробирован в лабораторных условиях для определения активности пер оксидазы при окислении его гваякола в присутствии перекиси водорода при температурах 0 С, 10 С и минус 10 С.

Пример. На растворителе, содержащем дистиллированную воду и химически чистый глицерин в соотношении 1: 1,5. готовят

0,04 Ч раствор перекиси водорода и раствор перокспдазы нз расчета 1 г сухого хрена на

10 лл растворителя, и 0,1 М спиртовой раствор гваякола.

Ферментный раствор, раствор перекиси водорода и спиртовой раствор гваякола раздельно охлаждают до минус 10 С, а затем смешивают 6 мл раствора ферментного препарата, 2 игл спиртового раствора гваякола и

2 гял раствора перекиси водорода в термостатпруемой трехгорлой колбе со шлифами, оснащенной термометром для измерения м инусовых температур. При постоянном контроле в колбе поддерживают температуру — 10 С с точностью определения -1 С.

490807 где / — температура.

На основе получе«пых данных установлс«о, что с понижением температуры активность пероксидазы по««икается в соответствии с уравнением:

1дК= nt m, где п — коэффициент пропорциональности, зависящий от субстрата и концентрации пероксидазы, / — температура, m — активность пероксидазы при 0 С.

Способ подготовки ферментных препаратов и реактивов для определения активности ферментов в материалах, содержащих их, включающий добавление растворителя в ферме«тный препарат и реактив, отлича ои1ийся тем, что, с целью определения активности ферментов при отрицательных температурах, в качсстве растворителя используют водноглицериновую смесь, содержащую дистиллированную воду и глицерин в соотношении

19: 1 — 1: 1,5, при этом после введения растворителя каждый полученный раствор охлаждают до температуры от 0 до — 40 С, затем смешивают их и выдерживают при этой температуре, например, 2 — 3 час.

K=D

Составитель А. Бражникова

Техред 3. Тараненко

Редактор Л. Гончарова

Корректор В. Гутман

Заказ 145/201 Изд. ¹ 108

ЦИИИПИ Государственного комитета по делам изобретений

Москва, »К-35, Р а ушска я

Тип. Харьк. фил. пред. «Патент»

Определение активности ведут спектральным методом по величине оптической плотности продуктов окисления гваякола, для чего из реакционной колбы периодически через

15 лин отоирают пробы микропипеткой по

0,1 — 0,2 лл, которые разбавляют в 10 — 20кратном объеме водно-глицериновой смесью, что замедляет процесс окисления гваякола « течение времени спектроскспированпя.

Замер оптической плотности разбавленного раствора ведут в стеклян«ых кюветах толщиной 0,5 — 5 c»i на ФЭК-М при зеленом светофильтре или СФ-4А при длине волны (Х), равной 480 н»ь

Для сопоставления активности ферментов при отрицательных и положительных температурах опыт проводят при 18 С, 0 С и — 10 С. 20

На основе кинетических кривых, построенных по данным спектроскопии начальную скорость процесса устанавлива1от по уравнению: где D — оптическая плотность раствора, r — время, лик.

Затем величину К отождествляют с актив«остью пероксидазы и строят зависимость:

Предмет изобретения

Тираж 529 Подписное

Совета Мшшстрсв СССР и открытий наб., д. 4/5