Способ дифференциации бактерий

Способ дифференциации бактерий

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е («) 490820

ИЗОбРЕТЕ Н ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 19.10.72 (21) 1838091/30-15 с присоединением заявки зче (32) Приоритет

Опубликовано 05.11.75. Бюллетень М 41

Дата опубликования описания 18.02.76 (51) М. Кл. С 12k 1/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР (53) УДК 576.8.07-851. .136:543.42.062 (088.8) по делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения

П. С. Ананьев-Рящакко, В. М. Котляров и И. А. Бакулов (71) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ БАКТЕРИЙ

Изобретение относится к ветеринарии и найдет применение при диагностике листериоза.

Известен способ дифференциации бактерий путем измерения их абсорбции в инфракрасной области спектра.

Недостатками известного способа являются опасность заражения при работе с возбудителями антропозоносных заболеваний, например листерий, а также трудность определения серологической характеристики бактерий, имеющих идентичные факторы.

С целью ликвидации указанных недостатков взвесь бактерий автоклавируют не более чем при 1,5 атм в течение 30 мин, наносят на германиевую пластинку в концентрации, обеспечивающей распределение 3 — 5 млрд. микробных тел на 1 мм2 поверхности, измеряют абсорбцию взвеси в области от 1250 до

900 см и по наличию максимума поглощения в участке спектра 1160 см- судят об антигенной структуре листерий, позволяющей отнести их ко второй серогруппе.

Способ осуществляется следующим образом.

Бактерии, выращенные в течение 16—

18 час на плотной питательной среде при

370 С смывают дистиллированной водой. Суспензию бактерий автоклавируют при 1,5 атм в течение 0,5 час, после этого трижды отмывают дистиллированной водой с помощью центрифугирования при 5000 об/мин в течение

10 мин. Инактированную суспензию (концентрация 400 млрд/мл) бактерий в количестве

5 0,05 мл наносят на германиевую пластину толщиной в 1 мм и равномерно распределяют на площади 5 — 20 мм, После высушивания на воздухе при комнатной температуре пластину вставляют в держатель образцов и помеща10 ют в спектрофотометр.

Поглощение пластинки компенсируется специальной диафрагмой, вводимой в луч сравнения.

Продолжительность исследования одного

15 штамма бактерий равна 30 мин.

На фиг. 1 изображены ИК-спектры листерий, где кривая 1 — эпизодический штамм

766, серотип 1, первой серогруппы; 2 — вакцинный штамм «А», серотип 1-а, первой серо20 группы; 3 — эпизодический штамм 634, серотип 4-а, второй серогруппы (стрелкой показана область, по которой проводится определение серогрупповой принадлежности штаммов листерий); на фиг. 2 — изображены ИК

25 спектры бактерий, где кривая 1 — стафилококк, 2 — возбудитель рожи свиней, штамм

848; 3 — диплококк, 4 — кокк, 5 — сенная палочка.

Листерии, независимо от их биологичеЗО ских и серологических свойств имеют их

490820 спектр, позволяющий с высокой степенью достоверности отличить их от других бактерий.

Серогрупповую принадлежность листерий определяют по наличию или отсутствию поглощения в области 1160 см — (диаграмма № 1). Эта область поглощения углеводов, которые определяют серологическую формулу бактерий. У листерий второй серогруппы в этой области наблюдается четко выраженное поглощение, а у листерий первой группы поглощение в этой области без границ переходит в полосу 1080 см — . Вакцинный штамм

«А» (первая серогруппа) занимает промежуточное положение, поскольку имеет хорошо выр аженное плечо.

Место, объект и время выделения листерий, а также их вирулентность существенным образом не влияют на ИК-спектры.

Предмет изобретения

Способ дифференциации бактерий путем измерения их абсорбции в инфракрасной об5 ласти спектра, отличающийся тем, что, с целью обеспечения безопасности при работе с возбудителями антропозоносных заболеваний, например листериями, и определения их серологической характеристики, взвесь бак10 терий автоклавируют не более чем при

1,5 атм в течение 30 мин, наносят на германиевую пластину в концентрации, обеспечи вающий распределение 3 — 5 млрд. микробных тел на 1 мм поверхности, измеряют абсорб15 цию взвеси в области от 1250 до 900 — см и по наличию максимума поглощения в участке спектра 1160 см судят об антигенной структуре листерий, позволяющей отнести их ко второй серогруппе.