Способ инактивации инфекциозности вирусов

Способ инактивации инфекциозности вирусов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О Л И С А "-И"И ЕИЗОБРЕТЕНИЯ юсеc, о юа ге g затаит;;.

Хаааа

- 1ц 490824

Союз Советских

Соцналнстнческнх

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 27.08.74 (21) 2055851/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 05.11.75. Бюллетень № 41

Дата опубликования описания 06.02.76 (51) М. Кл. С 121< 5/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий (53) УДК 615.372 (088.8) (72) Авторы изобретения

М. П. Чумаков, А. М. Поверенный, Ю. А. Семин, А. В. Гагарина, E А. Ткаченко, В. Н. Башкирцев и М. К. Ханина

Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ ИНАКТИВАЦИИ

ИНФЕКЦИОЗНОСТИ ВИРУСОВ

Изобретение относится к биологической промышленности и касается получения вирусных препаратов.

Известен способ инактивации инфекциозности вирусов путем воздействия на вирусную взвесь формалином в концентрации 1: 2000 в течение 72 час при температуре 32 С под защитой клеточного белка.

Однако известный способ длителен и не обеспечивает высокой иммуногенности препарата.

С целью повышения иммуногенности препарата и сокращения длительности технологического процесса в качестве инактивирующего агента используют продукт взаимодействия формальдегида с аминокислотой в конечной концентрации 1: 2000 — 1: 4000 в течение 47—

49 час.

Способ осуществляют следующим образом.

Для инактивации используют высокоочищенные инфекциозные сливы с зараженных культур ткани. Для этого культуральный инфекциозный слив сразу же подвергают обработке на сепараторе для удаления клеточного детрита и ультрафильтрации через фильтры с диаметром пор 220 — 450 ммк.

В фильтрат культурального вируса вводят препарат ПАМС в конечной концентрации

1:4000. Инактивацию осуществляют при 31—

33 С в течение 47 — 49 час.

Состав ПАМС и способ приготовления.

Препарат аминометилольных соединений (ПАМС) получают при смешивании водных растворов 40 -ного формалина и лизина (в

5 0,1 М а-фосфатном буфере). Конечная концентрация формальдегида 0,166 М (рН раствора доводят до 6,8). Конечную концентрацию лизина, взятого в избытке, с целью связывания всего формальдегида, определяют

10 константой равновесия реакции образования монометилольного производного и она равна

0,7 М. Готовый раствор двух ингредиентов содержит метилольное производное амина в концентрации, эквимолярной конечной кон15 центрации СН О 0,166 М, а также свободный амин (0,54 М). Свободный формальдегид в растворе отсутствует. При приготовлении

ПАМС формалин разводят в 80 раз, а содержание метилольного производного амина в

20 препарате эквимолярно исходному формалину, для сравнения результатов проводившихся испытаний ПАМС и формальдегида все разведения ПАМС делают с учетом исходного разведения 1: 80. Эта технология обеспечивает пол25 ную инактивацию инфекциозности вируса с сохранением иммуногенных и антигенных свойств.

Препарат а мино метилольных соединений (ПАМС) применяют на двух моделях; для

ЗО инактивации вируса клещевого энцефалита

490824

Предмет изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор В. Смиригина Техред 3. Тараненко Корректор О. Тюрина

Заказ 30/8 Изд. Хз 65 Тираж 529 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, 5Ê-35, Раушская наб;, д, 4!5

Типографии, пр, Сапунова, 2 (КЭ) выращенного в культуре ткани куриного "-мбриона и вируса крымской геморрагической лихорадки (КГЛ), размноженного в мозгу зараженных новорожденных белых мышей и одновременно для стабилизации их антигенов, Инактивацию вирусов проводят с целью изготовления иммуногенпых препаратов, создающих достаточно высокую иммунологическую. резистентность у вакционированных белых мышей (против КЭ) или пригодных для иммунизации животных-доноров гипериммунных глобулинов (против КГЛ) или в качестве антигенов в реакции связывания комплемента.

Под воздействием формалина в разведении

1: 2000 и препарата ПАМС в разведении

1: 4000 при температуре 32 С в бесклеточной среде с одной серией вируса свидетельствуют о значительном превосходстве ПАМС. Титры вируса КЭ под воздействием ПАМС резко падают уже через б, 12, 18 час и полностью отсутствуют, начиная с 24 час после начала опыта, в то время как формалин не полностью инактивировал вирус КЭ даже через 48 час после начала опыта. Обе партии вируса: с формалином и с ПАМС выдерживают при 32 С в течение 72 час, затем используют для вакцинации белых мышей по стандартной методике. Испытание иммунологической резистентности двух групп вакцинированных мышей показало, что вакцина, приготовленная с ПАМС, обладает приемлемой иммуногенностью, ее индекс равен 4,0, вакцина, приготовленная с формалином имеет индекс 2,9 и не удовлетворяет требованиям официального стандарта иммуногенности.

Инактивация двух серий вируса тремя разными разведениями ПАМС дает в пяти случаях из шести высокопммуногенпь.с вакцины, тогда как из двух серий вакцины с при5 менением формалина одна не соответствует требованиям стандарта.

При инактивации препаратами формалина и ПАМС вируса крымской геморрагической лихорадки, находившегося в 10 /о взвеси моз10 га новорожденных белых мышей, при температуре 24 С, когда оба препарата представлены в разведении 1: 4000 и 1: 8000, скорость инактивации вируса с помощью ПАМС значительно больше, чем при обработке фор15 малином.

Все опыты по инактивации как культурального вируса КЭ, так и в мозговой взвеси вируса КГЛ показывают значительные преимущества применения ПАМС по сравнению

20 с формалином.

Способ инактивации инфекциозности вирусов путем обработки вируссодержащей жидкости инактивирующим агентом, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения

30 иммуногенности препарата и сокращения длительности технологического процесса в качестве инактивирующего агента используют продукт взаимодействия формальдегида с аминокислотой в конечной концентрации

35 1: 2000 — 1: 4000 в течение 47 — 49 час.