Способ получения гуанозин-5-монофосфата

Способ получения гуанозин-5-монофосфата

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

г-

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

iii) 493474

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 09.04.73 (21) )9)063)!23-4 (51) М. Кл, С 07d 51/54 с присоединением заявки ¹

ГосУдаРственный комитет (23) Приорит

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Опубликовано 30.)).75. Бюллетень ¹ 44

Дата опубликования описания 16.02.76 (53) УДК 547.963.32 (088.8) (72) Авторы изобретения

Г. E. Устюжаиии, В. В. Коломейцева, У. Я. Микстайс, И. Р. Чаксте и М. Т. Страутзеле

Институт высокомолекулярных соединений АН СССР и Латвийский филиал Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени научноисследовательский институт химических реактивов и особо чистых химических веществ (71) Заявнтел,. (54) СПОСОБ ПОЛ УЧ ЕН ИЯ ГУАНОЗ И Н-5 -МО НОФОСФАТА

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения гуанозин-5 -монофосфата, который используется в биологических, биохимических и медицинских исследованиях.

В литературе известно получение гуанозин5 -монофосфата путем фосфорилирования гуанозина без защиты 2,3 -гидроксильных групп, зак.почающийся B том, что к реакционной смеси добавляют гндроокись натрия, устанавливают рН 3 и осаждают метанолом нуклеотидный материал, основную массу которого составляет натрисвая соль гуанозин-5 -монофосфата. Далее нуклеотидную массу разделяют при помощи иопообменной хроматографии.

Недостатком известного способа является сложность выделения и недостаточная чистота продукта при осаждении метанолом, связанная с тем, что растворимость натриевой соли гуанозинмонофосфат близка к растворимости натриевых солей гуанозинди- и полифосфатов, и при осаждении метанолом из реакционной смеси эти соли осаждаются вместе. Для получения чистого гуанозинмонофосфата требуется дополнительная очистка на ионообменных материалах, которая влечет за собой большие затраты ионообменного материала и рабочего времени.

Целью предполагаемо"o изобретения является обеспечение чистоты целевого продукта и упрощение процесса.

Способ заключается в том, что после фосфорилирования гуанозпна в реакционную смесь вводят сосдинсния кальция, устанавливают рН 0,5 — 2 и избирательно осаждают примеси и целевой продукт изменением соотношения этилового спирта к реакционной смеси в интервале 1: 2 — 10: 1.

При соотношении этилового спирта к раствору нуклеотидного материала 1: 4 — 1: 2 осаждают кальциевые соли гуанозинди- и полифосфатов, при увеличении соотношения спирта к раствору 6: 1 — 10: 1 кальциевую соль гуанозпнмонофосфата.

Изучение растворимости солей гуанозинфосфатов в водных и водноорганических растворах показало, что растворимость кальциевых солей гуанозинфосфатов и фосфорной кислоты сильно отлича|отся в сппртоводносолянокислых средах.

Выбор рН в интервале 0,5 — 2 обусловлен тем, что при таких условиях гуании, гуанозин и неорганические соли спиртом не осаждаются. В более кислых средах затрудняется осаждение гуанозинфосфатов, в менее кислых растворах нарушается избирательность осаждения.

Применением соединений кальция в качестве источника катионов солей гуаниловых кислот упрощается проведение процесса, найденные соотношения спирта к раствору нукле493474

11рс:(мст i!. Обр(LIIII1IIHII Гост);; !Cc::ctntî.-о к,,:.тс(>; Сc! .;.;-: Яо)! . ".. (.:.(.:

)(о,(с; (3:! 3:зов>)) I(i!ii;: и:)""!») . -. Я .!IQcl(t:B, Ж-3 .. Ря :(»ос(с; i: i!i, сь -!, 1 тяiiог))яtlc) ) о (,(ti) t, oT»;ного материала обеспечивают избирательное отделение примесей.

14Зб?(РЯТСЛЬНОС ОСажДСШ!С ГУсПЮЗИПМОПОфОСфата в виде кальциевой соли ири рН 0,5 — -2 и найденных соотношениях спирта к раствору позволяст получить гуанозипмоио(росфат и 3 реакционной смеси с выходом 75---80 /с и высокой степени чисто гы (содержание Оспош(ого вещества 95 — 99",о ) ..

Пример 1. Реакционную смесь, полученную при фосфорилироваиии 2,84 ." (10,04 моль) гуаиозииа 2,76 мл (30,20 ммоль) хлорокисью фосфора в 18 мл тримстилфосфата, иромываloT 40 мл вфира и нейтрализуют вод((ой суспспзисй и!Дроокиси кальц(ии По нуклсотидиоily материалу смесь содср?кит 77",о гуапозии5 -монофосфата; 11,6",() гуапозин дифосфато)3;

4,9 ; полифосфатов il 6,5 /() гуяиоз(ша 1! ри

1(ИO(ОКРЯТIIO.)I I!30()ITh33 НЕOPI BII?!c!CCI:Ii:(фоСфатов. Нукг!ест?(дный материал полностью осаждают 10-кратным объемом спирта пс отношсншо к раствору. 11олу !Спиую смесь расTDop5lIoT В 00 ъ!. 1 0 I i!. солянос(кислоты. К3,1ьциевые соли гуаиозиндифосфатов и полифосфатов выделяют добавлением 15 мл спирта.

Кальциевую соль гуанозии-5 -мопофосфата

Выдсля!от добавлением 350 мл спирта. При последующем псреосаждснпи продукга (13 соляиокислого раствора получена кальциевая соль гуанозпп-5 -моиофосфата с ч:!с)OTOII более 95% (выход 78"")о); при периодатпом окислении обнаружено 99Я) гуанозиимонофосфата.

Прод> 1>г! )(po: 1атОГp B(J)?I !Oci и и э, Ic)(TJ)o(j)oj) cT?I

ЧССК?l ОДПОРО)(СП.

Весовая зкстинкци51 (j .> G,!-, 266 им;

0 .; ))11 1!

11,4. 10 " сх!,/;,(Оль.

П р и м с р 2. Реакционную смесь, !олучспную п(ш фосфор)(лироваиии 2,5 " (8,81 ммоль)

l у(а поз ап;! 3,7 мл (26>9 1 M >loль1 пирофосфорилтстряхлопида В -17 мл яцсгопитр)(ла, прос !it>l() RIOT З(1)ИР03((1 50 „! l ) ОС13 Оl 1) P CTBOP5! о с)

10 1 L 0 Г Л(,I, 1!loic ПО,!I>! ll;IJ)00! ИСЬ О И31РИЯ

pl 1 pclc! Hop 3,(oB0, (я (, (О 0,5. К рас1ВО )%c Io

О ЯГ). 151юТ . 0 I, 1 И. 1) c! CTHO!c) c! х. 10;) ИС О. О ка.(Ы(i!51. Вl>iСШII(. Иро;(3 )с l ы фОСфоi)ИЛlij)ОВЯIIИ51

CМ (:ОЗИП;! OCB?I(;(c!IOT 20 AI)l CII?lpTB. 1,с.ЛЫ(ИСВУIО СОЛЬ ГУ ЯИОЗИИ-0 -)IОИОЫОСфа сl ЬЬ)ДС;!Я(ОТ

j(ooltl3лсписм 300 мл сппр- а. 1!ри посс!С,(у!Ошсм исpсОсяждсиии иродуl;TB из 0,1 li, соля(IОКI)СЛО! 0 Р с CTI301) B 1!0. I», !IC!l c. Кс ., 1)эи(ИСБЯ Я CO. !Ü

J!! Гусс)поз,! it-o )101(0(j)OC >)B t cl С IICTOTOЙ бо;!СС

G ..., !))

) > jG 13ь!ход i / !G ), ili) II Ilcj))IO;(Bт!1031 Ок,: с,!(. 1(11!! Оои" !)у жспо 99 1 >>яи03пимоиофос(1)с)та. 1)0 (Укт хР " Я" О Ра(Р"-"-"-" Il - чскГРоф"Рсги1. ЕС";I 0! I 1tOP 0 )(.:И

1б В(СОБс!Я ЗКС1ИНКЦf15! ().,(;; c 260 ПМ; PH 1)

11,6> 103 см", моги,, 1. Cflocotj !Io.!), ) е. l! l Г! !:!03)!il-5 - .(Оиофос,1)я сl П ", С>)((i)ÎC!!)OJ) I. . Iij)01! с! 1.! 5! i"с я позип с. ОС 3

3Bù:Iты 2 /,>33 -lчьipo: силf)!,ых (рупп с Г(оследу;ОЩИМ Б (ДОЛ ..i C .. )30>0: Po,-.,hTB ОСЯ?КДС! l1 о.,. Il fit)1 (М, (i Т . (:! : (! 10 )i; I i! С ." ГС \(, iÒO, C !1 Ñ, jl>lO ПРОЩCllll51 I!PO ),СССcl !I Иo!3)>!It)n П (и .ис1 О Гь) цел !30! 0 пj)0. !I кт, 1, 11:)Оцссс Вс. (, T Б

lIj)llc), )с(пни со(,.и(lси)lи l;B, ü I!51 )!р?! р11 (0,0, Б кn.(сствс си))р-я и j.o(IL»ó)OT = и((o!3!>tit

C1I1IP ?1:130!Ij)PT(С,.I-; 0 ОСЯ..Е,3101 ПРИ:с(ЕСИ li.

Зь . е )c:-:Oj! прОду j(T из.,!с (сii!!0»! соотl(ошспий зти,,ОПОГО t!!pin-: ), )с!СТВО .:,, !(О, f !(!(0 3О с: IС

1!1icl,>3 ti ;ltI Г рв )Лс 1 . 2 .0: 1, (I10c00 ll0 l:. 1, . t,! . -i !О li„1! C 5)

3) . ИС.(:(:I>OC(!!cl i 3 П;:ОПO;i,. l )»Б, С) i:C l ?! CO..;-)Ион)(слому 1:()с!1)0 )у .:,).л. О.: .):;) с

),Г . .l0c(io по;. 1>;; I li: к;.((: и с; )-см, с .TO О с.>К (. !.!С К;!:>j>j!l)CБО!с СОЛ ) " .ИО >l!l!-0— (с:,"Oc!i, Я! ;1 i!>030 (1 i l)риб -i 33, l i! )Ic (t K co, 5!iiOl((. 0)), j)".C 30,"., !11;ЛС-, "ll»П! 0 ) c. C:!";c) IB

) .: ) . )с

6: U 0!: c.lol, =т);ло я О спьр-.г